猪卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰场收集卵巢,用注射器从卵泡中吸出卵丘－卵母细胞复合体,对猪卵母细胞体外成熟的条件进行研究,根据卵母细胞体外成熟时的核成熟率、胞质成熟及体外受精时精子的穿卵速度,合适的体外成熟培养时间为４２～４５ｈ．卵母细胞周围卵丘细胞的多少及其排列紧密状态与卵母细胞的体外成熟率密切相关。卵泡大小与卵母细胞的体外成熟率有关,大卵泡卵优于小卵泡卵。ＰＭＳＧ促进猪卵母细胞体外成熟。     

猪体外成熟卵母细胞凋亡的形态观察

将猪成熟卵母细胞直接放入NCSU23培养液中培养,通过形态观察和Hoechst33342染色,并与孤雌激活卵子对照,探明猪体外成熟卵母细胞凋亡的规律.在未激活组中,胞质不均匀分裂是主要的趋势,高于坏死和胞质均匀分裂;胞质不均匀分裂在24 h出现,在24～96 h时间段有较大的增幅,最高胞质不均匀分裂率出现在132 h;胞质均匀分裂在12 h出现,在24～72 h时间段有较大的增幅,最高胞质均匀分裂率出现在120 h,之后略有下降;坏死在12 h出现并持续增加,在24～108 h增幅较大,180 h坏死率为28.6%.孤雌激活组中,胞质均匀分裂是主要趋势,但60 h后坏死率高于胞质不均匀分裂;胞质均匀分裂在12 h出现,在24～60 h时间段有较大的增幅,最高胞质均匀分裂率出现在60 h,并出现了5.6%的囊胚率;胞质不均匀分裂在24 h出现并持续增加,在24～72 h时间段有较大的增幅,180 h的胞质不均匀分裂率为15.4%;坏死在12 h出现,在24～108 h增幅较大,180 h之间的坏死率为39.6%.未激活组胞质不均匀分裂形态明显高于孤雌激活组,96h后差异显著(p《0.05);孤雌激活组胞质均匀分裂形态高于未激活组,60h后,两组差别显著(p《0.05);孤雌激活组坏死形态高于未激活组,96 h后两组出现明显差异(p《0.05).     

猪卵母细胞体外成熟及电激活后发育能力的研究

探讨了不同的成熟培养液及外源激素对猪卵母细胞体外成熟培养及电激活后孤雌胚胎发育能力的影响. 结果表明：（1）改良M199（mM199）组猪卵母细胞成熟率显著高于M199组，且这两组又较NCSU-23组能极显著提高卵母细胞的成熟率. （2）孕马血清（PMSG）+人绒毛膜促性腺激素（hCG）+促卵泡素（FSH）组卵母细胞成熟率略高于FSH+促黄体素（LH）组，两者卵母细胞成熟率极显著高于尿促性腺激素（hMG）组. （3）含胎牛血清（FBS），猪卵泡液（PFF），表皮生长因子（EGF）的培养液较对照组在卵母细胞成熟率上无显著差异，但均能显著提高电激活后的卵裂率.添加EGF组桑囊率明显高于不添加组.但分别添加FBS和PFF组较对照组在桑囊率上均无显著差异. （4）卵丘细胞扩散与卵母细胞第一极体排出之间无直接相关性，但扩散程度好能提高电激活后的卵裂率.     

瘦素对猪卵母细胞体外成熟及克隆猪妊娠率的影响

体细胞克隆猪在人类医学、基础科学研究和畜牧业生产方面均具有很大的应用潜力.为了提高体细胞克隆猪的效率,首先比较了两种基础成熟液NCSU-23和TCM199的体外成熟效果,然后在TCM199培养液的基础上,较系统地研究了添加不同浓度的瘦素对猪卵母细胞成熟、孤雌激活胚胎和克隆胚胎的体外发育以及克隆胚胎体内发育的影响.结果表明:成熟液中添加100ng/mL或200ng/mL瘦素对猪卵母细胞的核成熟没有显著影响(P>0.05);对孤雌激活卵裂率和克隆胚胎卵裂率也没有显著影响(P>0.05);但却显著提高了孤雌激活胚胎的囊胚率和囊胚细胞数,并且显著提高了克隆胚胎的囊胚率;当添加量为100ng/mL时,克隆囊胚的细胞数显著升高.另外,研究表明,瘦素很可能具有提高克隆胚胎移植妊娠率和妊娠到期率的作用.     

绵羊卵母细胞不同采集方法对体外成熟培养的影响

为提高绵羊卵巢卵母细胞的采集效率,提供用于卵母细胞体外成熟培养和体外受精的更多优质的成熟卵母细胞,试验利用抽吸法和剖切法2种采集方法采集绵羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养并对其效果进行了对比研究.结果表明剖切法获得的卵子数量显著高于抽吸法(P<0.05),而所用时间则无显著差异(P>0.05);A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法(P<0.05),抽吸法所采集的C级细胞显著高于剖切法(P<0.05);剖切法中卵丘扩散率和第一极体排出率要显著高于抽吸法(P<0.05).     

褪黑素对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响

本文通过卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠如母细胞成熟的影响。结果表明:0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.004mg/mg及0.0008mg/ml浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEO_s)自发成熟过程(P<0.01)。但对裸卵(DO_s)自发成熟,没有影响。结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的。     

不同培养液对卵母细胞体外成熟及重组卵母细胞孤雌活化的影响

为研究生发泡(GV)移植后的重组卵母细胞能充分在体外成熟和发育,比较了几种培养液对GV期卵母细胞体外成熟和重组卵母细胞孤雌活化的影响.自然获得的GV期卵母细胞和经显微操作获得的重组卵母细胞在M2、HTF和M199培养液培养,其体外成熟率无差异(P&gt;0.05);但成熟的重组卵母细胞经人工活化后,生长在HTF培养液的细胞发育到2-细胞期胚的比率(49.2%)明显高于生长在M199培养液的比率(28.9%)(P&lt;0.05).结果表明HTF培养液更适合小鼠卵母细胞的体外成熟和进一步发育.     

EGF、IGF-Ⅰ对牛卵母细胞体外成熟的影响

在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同量的EGF、IGF-Ⅰ,观察其对牛卵母细胞体外成熟的影响并确定成熟液中添加这两种生长因子的最佳浓度.在卵母细胞成熟培养液中分别添加1 ng/m l、10 ng/m l、50 ng/m l、100 ng/m l、200 ng/m l的EGF,10 ng/m l、50 ng/m l、100 ng/m l、150 ng/m l、200 ng/m l的IGF-Ⅰ,分析成熟培养22 h后的卵母细胞成熟率.发现添加有EGF实验组的成熟率分别是36.73%、42.18%、56.18%、53.67%、56.50%,同对照组相比都较对照组的成熟率(34.04%)高,且50 ng/m l、100 ng/m l、200 ng/m l实验组的成熟率同对照组差异显著(P<0.05).IGF-Ⅰ实验组的成熟率分别是38.46%、46.94%、58.73%、55.00%、58.70%,50 ng/m l、100 ng/m l、150 ng/m l、200 ng/m l都较对照组的成熟率(38.60%)要高,100 ng/m l、150 ng/m l、200 ng/m l实验组同对照组相比差异显著(P<0.05).将50 ng/m l的EGF、100 ng/m l的IGF-Ⅰ共同添加在成熟培养液中得到的成熟率为75.00%,同对照组(36.54%)相比差异极显著(P<0.01).在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加EGF、IGF-Ⅰ会提高卵母细胞的成熟率,并且随着浓度的增加,这种作用将达到饱和,其最佳作用浓度为50ng/m l EGF、100 ng/m l IGF-Ⅰ.     

季节对猪体外成熟卵母细胞的发育能力的影响

猪的卵母细胞对外界环境非常敏感,这造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一.文章的研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响.研究中比较了不同季节每对卵巢获得A/B级卵的数量以及卵母细胞核成熟的比例(实验1),另外统计分析了不同季节孤雌(实验2)和核移植(实验3)胚胎发育能力的差异,最后在冬春两季分别进行了克隆胚胎的移植以观测其体内发育情况(实验4).结果显示实验1,春季(3月到5月)COCs/卵巢的比例最高(7.6±3.5),夏,秋,冬季的比例依次是(6.4±3.3),(6.7±2.9),(6.7±3.4),p<0.05.然而,没有发现卵母细胞的MⅡ比例有显著性差异((75.3±3.3)%,(73.5±2.3)%,(73.0±4.2)%,(76.5±6.7)%,依次是春,夏,秋,冬季的MⅡ比例,p<0.05).实验2,观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低(10.1±2.6)%,春,秋,冬季的孤雌胚胎囊胚率依次是(27.2±3.4)%,(22.4±3.5)%,(22.4±3.4)%,p<0.05.实验3,猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高((12.2±1.3)%,秋,冬季的克隆胚胎囊胚率依次是(10.2±1.2)%,(8.1±1.4)%,p<0.05).实验4,发现冬季胚胎移植无论是妊娠率还是出生率都明显低于春季.以上结果表明季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力.     

花背蟾蜍卵母细胞体外成熟过程的细胞学研究

采用体外跌卵和石蜡切片的方法，对激素诱导下花背蟾蜍卵母细胞的体外成熟过程进行了细胞学研究．结果表明：花背蟾蜍卵母细胞与激素接触１５ｈ可达到生理上的成熟，即第二次成熟分裂中期．在此过程中，卵母细胞的核、质及卵膜均经历了一系列复杂的形态学变化，其中与激素接触１０～１２ｈ期间是卵母细胞形态发生变化最显著的时期     

年龄、成熟方式及培养液对小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响

为研究卵母细胞能充分在体外成熟和发育,比较了年龄、成熟方式及培养液对昆明白小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响.1.5月龄、3月龄、6月龄、9月龄和12月龄小鼠的GV期卵母细胞其体外成熟率无差异(P0.05).经人工活化后,与体内成熟的卵母细胞相比,体外成熟的卵母细胞发育到原核期胚和2-细胞期胚的比率都明显降低;体外成熟的生长在HTF培养液的卵母细胞发育到2-细胞期胚的比率(44.4%)显著高于生长在M16培养液的比率(22.9%)(P0.01).结果表明昆明白小鼠卵母细胞的体外成熟不受年龄影响,体外成熟的卵母细胞人工活化后支持发育的能力比体内成熟的差,HTF培养液更适合小鼠卵母细胞人工活化后的进一步发育.     

温度对狗卵母细胞体外成熟培养的影响

以兰州土狗为实验动物,研究不同的温度对兰州土狗卵母细胞的体外成熟培养的影响,结果表明,采用不同温度以微滴(上覆灭菌矿物油)培养卵母细胞,其体外成熟率差异极显著.     

羔山羊卵泡的发育及卵母细胞体外成熟的研究

为利用羔羊作供胚羊，采用三种超数排卵的方法，对出生后４０～１５０日龄的羔山羊进行超数排卵处理以后，从活体采集卵巢卵母细胞在体外进行了培养．研究结果表明，采用超数排卵的技术能够诱导未性成熟羔山羊的卵巢卵泡的发育，由超排后采集到的羔山羊卵泡卵母细胞经体外培养有继续发育成熟的能力．适宜的超排方法为ＦＳＨ１０ｍｇ＋ＬＨ１．５ｍｇ（肌肉注射），羔山羊适宜的超排日龄为４０～９０ｄ，卵母细胞的体外适宜培养时间为１８～２８ｈ．     

富勒烯及其衍生物对小鼠卵母细胞成熟和激活的作用

为探索富勒烯及其水溶性衍生物对哺乳动物卵母细胞减数分裂的作用,使用富勒烯膦酸衍生物(2P)、富勒烯-PVP和富勒醇作用于体外培养的小鼠GV期卵母细胞和超排卵母细胞,通过观察第一极体排出率和原核形成率以判断卵母细胞的成熟和激活,并探讨光照对这一作用的影响.结果表明,在光照和非光照下,富勒烯的PVP水溶液、富勒醇对卵母细胞的成熟没有明显影响,而2P在光照下对卵母细胞的成熟和孤雌激活具有明显抑制作用,其作用有浓度依赖性.     

猪体外成熟卵母细胞激活方法的比较

研究了离子霉素/6-二甲氨基嘌呤(DMAP),乙基汞硫代水杨酸钠/二硫苏糖醇(DTT)激活猪体外成熟卵母细胞的最佳条件,比较研究了电脉冲和化学刺激对猪体外成熟卵母细胞的激活效率.结果表明,用15μmol/L离子霉素处理猪体外成熟卵母细胞10,20,30,40,50,60和70min,其囊胚发育率差异不显著,以40min时的囊胚发育率最高.用15,20和25μmol/L离子霉素处理猪体外成熟卵母细胞,其囊胚率无显著差异.用100,200和300μmol/L乙基汞硫代水杨酸钠分别激活猪体外成熟卵子,发现100μmol/L乙基汞硫代水杨酸钠中处理30min组的卵裂率和囊胚率最高.电脉冲与两种最佳化学激活组的比较研究表明,电激活组的囊胚率最高,但囊胚细胞数低,相反,乙基汞硫代水杨酸钠/二硫苏糖醇激活组的囊胚细胞数最高,囊胚率却较低.     

牛卵母细胞的采集方法和卵巢贮存条件对其体外成熟的影响

比较了抽吸法和剖切法取得屠宰奶牛卵巢的可用卵母细胞数,并探讨了在卵巢运输过程中温度和时间对卵母细胞成熟率和卵裂率的影响.从屠宰场收集奶牛卵巢158个,用抽吸法抽取了96个卵巢,平均每个卵巢收集可用卵母细胞8.04枚(772枚/96卵巢);用切剖法切割了62个卵巢,平均每个卵巢收集可用卵母细胞18.89枚(1171枚/62卵巢).统计分析证明,两种采集方法获得的可用卵母细胞数差异极显著(p<0.01).将屠宰牛卵巢分别置于20℃～29℃和30℃～38℃的生理盐水中,在6h内收集到卵母细胞的成熟率和卵裂率分别为53.8%、31.7%和63.3%、34.3%,两者之间的差异均不显著(p>0.05).在30℃～38℃温度下,屠宰牛卵巢保存时间超过6h时,卵母细胞的成熟率和卵裂率显著下降,分别为36.1%和0%.与小于2h和2～6h相比差异极显著(p<0.01).     

p90rsk-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中的表达

采用Western blotting检测p90rsk-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中的表达.实验分别在0h、8h、16h、24h检测绵羊卵母细胞p90rsk-1的表达量的变化,并进行统计学分析.结果p90rsk-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中均为阳性表达.随着成熟时间的延长,卵母细胞p90rsk-1在16h的相对表达量显著升高(P<0.05),但在24h又下降.因此推测Rsk在绵羊卵母细胞体外成熟过程中起一定的作用.     

猪卵母细胞生长成熟过程中脂质成份的研究

本实验应用Ｃａｔａｌａｎ及Ｌｉｌｌｉｅ氏油红Ｏ染色法和Ｂａｋｅｒ氏酸性氧化苏木精染色法，对猪卵母细胞生长成熟过程中脂质成份的改变情况进行了染色研究，把生长卵泡按其直径：０．８～２．４ｍｍ（Ｓ组）、２．５～４ｍｍ（Ｍ组）、＞４ｍｍ（Ｌ组）分为三组，分别取其中的卵母细胞进行染色观察．另外，还作了卵巢冰冻切片的染色观察．结果表明，在卵泡腔形成之前的猪卵母细胞中就含有大量的脂滴，在卵泡形成时，卵母细胞内的脂滴有所增加．脂滴中含有中性脂肪和磷脂．     

猪卵母细胞体外成熟培养时间及去核方法的研究

对不同体外成熟培养时间的猪卵母细胞进行盲吸法去核及利用脱羧秋水仙碱(DC)和放线菌酮(CHX)的化学诱导法去核效率进行了比较研究.用盲吸法去核,体外成熟培养(IVM)39~41 h组卵母细胞去核率与IVM 36~38 h组差异显著(P<0.05),与42~44 h组差异不明显(P>0.05),但3组显著高于IVM 45~48 h组(P<0.05).化学诱导法去核结果,IVM 42~44 h组去核率最高,但与IVM 39~41 h组差异不显著(P>0.05),其他各组间均差异显著(P<0.05).在相同的体外成熟培养时间内,盲吸法的去核率比化学诱导法的去核率要高.猪卵母细胞IVM在39~44 h内去核率较高,且盲吸法去核效率高于化学诱导去核.     

卵母细胞减数分裂和受精过程中MPF和MAPK的作用和相互调节

在卵母细胞减数分裂成熟和受精过程中,MAPK级联信号途径和MPF起着关键性的作用.这两种蛋白激酶信号途径以及它们之间协调的相互作用影响着整个动物界卵母细胞减数分裂成熟和受精过程,包括促进生发泡破裂、抑制减数分裂过程中的DNA复制、调节染色体的分离、维持MII期阻滞、诱发第二次减数分裂恢复等.文中对卵母细胞减数分裂和受精过程中MPF和MAPK的作用和相互调节进行了综述.