丙型肝炎病毒NS5A基因的克隆以及在原核和昆虫细胞中表达的研究

克隆了丙型肝炎病毒的NS5A基因，并在细菌和昆虫两种不同的系统中成功地进行了该基因的表达。利用PCR方法获得了NS5A完整的编码区并克隆到原核表达载体pGEX—KG上，在大肠杆菌中诱导表达了78kDa的NS5A与GST的融合蛋白。同时发现，融合蛋白被部分切割为50kDa的NS5A和28kDa的GST。在原核细胞中表达的78kDa和50kDa两种蛋白均具有较高的免疫原性，通过免疫家兔获得了高特异性的兔抗血清。另外，利用两种昆虫表达系统，即AcMN—PV和HaSNPV的Bac-to-Bac系统对NS5A进行了表达，表达产物为58kDa。     

X-ray structure of NS1 from a highly pathogenic H5N1 influenza virus

The recent emergence of highly pathogenic avian (H5N1) influenza viruses, their epizootic and panzootic nature, and their association with lethal human infections have raised significant global health concerns. Several studies have underlined the importance of non-structural protein NS1 in the increased pathogenicity and virulence of these strains. NS1, which consists of two domains-a double-stranded RNA (dsRNA) binding domain and the effector domain, separated through a linker-is an antagonist of antiviral type-I interferon response in the host. Here we report the X-ray structure of the full-length NS1 from an H5N1 strain (A/Vietnam/1203/2004) that was associated with 60% of human deaths in an outbreak in Vietnam. Compared to the individually determined structures of the RNA binding domain and the effector domain from non-H5N1 strains, the RNA binding domain within H5N1 NS1 exhibits modest structural changes, while the H5N1 effector domain shows significant alteration, particularly in the dimeric interface. Although both domains in the full-length NS1 individually participate in dimeric interactions, an unexpected finding is that these interactions result in the formation of a chain of NS1 molecules instead of distinct dimeric units. Three such chains in the crystal interact with one another extensively to form a tubular organization of similar dimensions to that observed in the cryo-electron microscopy images of NS1 in the presence of dsRNA. The tubular oligomeric organization of NS1, in which residues implicated in dsRNA binding face a 20-A-wide central tunnel, provides a plausible mechanism for how NS1 sequesters varying lengths of dsRNA, to counter cellular antiviral dsRNA response pathways, while simultaneously interacting with other cellular ligands during an infection.     

截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清。说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体。     

HCV非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。     

基于贝叶斯推断的风云四号闪电成像仪中虚假信号滤除

多种原因使得风云四号A星(Fengyun-4A,FY-4A)闪电成像仪(lightning mapping imager,LMI)探测到的发光事件中包含大量虚假信号,且目前针对不同的噪声来源采用不同的滤除方法。因此,为寻求一种较通用的、能同时滤除不同来源虚假信号的方法,尝试采用贝叶斯概率推断对2017年8月8日京津冀地区一次雷暴过程中的LMI实测数据进行虚假信号滤除。首先,采用国际上惯用的卫星闪电聚类参数化方案,将时间间隔小于330 ms且空间间隔小于16. 5 km的事件认为是闪电引起的连续信号,不满足此条件的则视为孤立的虚假信号而被滤除。然后,根据连续信号的辐射强度和该位置处的背景亮度与孤立虚假信号之间的差异性,采用贝叶斯概率推断来滤除连续信号中的虚假信号。考虑到贝叶斯推断可能存在误差,进一步根据闪电时空连续性特征设计了信号再判断方法,尽可能地滤除虚假信号且保留真实闪电信号。最后,利用云顶亮温资料及全球闪电定位网(worldwide lightning location network,WWLLN)数据对滤除结果进行初步检验。结果表明:虚假信号约占所有信号的50%;滤除虚假信号后,90%以上的信号分布在云顶低于240 K的区域内,且与WWLLN闪击点具有较好的对应。这种同时考虑信号时空连续性及不同信号间特征量差异性的虚假信号滤除算法,为设计更通用高效的虚假信号滤除算法做出了尝试。     

人类基因组中L1元件及其5''''UTR的研究

讨论了L1在人类染色体中的分布密度与染色体长度以及L1的密度与基因密度之间的关系.发现在大多数染色体上L1的密度和染色体的长度表现为正相关,而L1的密度和染色体中基因的密度表现为负相关;对人类L1的5'UTR进行了详细的研究后,发现在L1元件的5'UTR部分含有许多转录因子结合位点.对基因的转录起始位点上游进行统计分析,发现其中含有大量的L1序列.通过对人类的EST数据库进行BLAST分析,新发现了51条和人类L1 5'UTR相似性较高的EST片断,根据它们分布的组织特异性,说明L1元件可能调控与发育过程有关的基因的表达;最后应用多样性增量的方法对人类和大鼠的L1 5'UTR进行了区分,得到了较好的预测结果,说明大部分L1的5'UTR的调控作用是人类特有的.     

区域资源空间分配的数学原理

文章根据经济学的择扰分配原理和区域经济地理学的区划思想，提出资源在地域空间上合理配置的数学规划方法，并指出了应用此方法的有关问题及解决办法。在探讨方法论的同时，文章也得出如下结论：资源的空间分配法则不是域均衡，而是边际收益的空间统一。     

建立一个基于报告基因的靶标筛药系统筛选上调ABCA1基因转录的中药提取物

ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)具有催化外周细胞过量胆固醇和磷脂外向流出的功能。本实验将ABCA1启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,并将得到的重组质粒pGL3B-neo/ABCA1转染入人肝癌细胞(hepG2)。通过稀释培养法最终得到含有重组质粒的稳定细胞系SABCA1。利用这个报告基因为基础的药物筛选系统,筛选了100多种中药提取物。通过荧光素酶活性测试,相对活性达到180%以上的有4种中药提取物,并最终挑选能明显激活ABCA1基因启动子的鬼箭羽水提组分进一步研究,得出半数有效浓度(EC50)为48.06 mg/L。此外,利用基于apoA1基因的药物筛选系统验证得出鬼箭羽水提组分也能促进apoA1基因的表达。     

冠心病联合用药使用调查分析

冠心病常合并多种并发症,用药种类繁多,需联合用药以控制病情.本文通过调查某医院的冠心病联合用药情况,为临床合理用药提供依据.本文通过随机抽取本市某三甲医院一周门诊处方,统计患者性别,年龄,冠心病使用药物名称及用量用法,根据药品的使用率及联合用药进行统计.结果发现某三甲医院治疗冠心病主要药物为硝酸酯类药物、抗血小板药物、β-阻滞剂、钙离子拮抗剂、ARB类、ACE阻滞剂及他汀类药物.本文冠心病是危害中老年人健康的常见病,由于其发病机理复杂、合并症多,所以需要联合用药治疗,以减轻患者症状,提高生活质量.     

尾部静脉注射5-HTP对慢性应激抑郁模型大鼠海马CA1区神经元放电频率的影响

目的研究慢性应激抑郁模型大鼠在尾部静脉注射5-羟色胺酸(5-HTP)后引起的海马CA1区神经元放电的变化.方法给予对照组大鼠及抑郁模型组大鼠尾部静脉注射5-HTP后,用玻璃微电极记录两组海马CA1区神经元的放电变化情况,并对其进行收录及结果分析.结果模型组的兴奋神经元放电频率增加的百分率明显高于正常对照组(P0.05).结论增加大鼠脑内5-HT的含量有助于加强抑郁模型大鼠海马区5-羟色胺酸神经元的兴奋性,改善抑郁症状.     

人类乙型肝炎样病毒Pre—S1包膜蛋白的一个特定区域为乙肝病毒形成所必需

土拨鼠肝炎病毒（WHV）是一种哺乳类动物的肝炎病毒．这种病毒在结构和抗原怕与人类乙型肝炎病毒（HBV）非常相似．以往的研究报告指出,在一种称为鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的Pre－S包膜蛋白中,含有一个特定区域．这一区域由天冬氨酸－天冬氨酸－脯氨酸－亮氨酸－亮氨酸（DDPLL）5个氨基酸残基所组成．已发现,这一区域在像DHBV这一类禽类乙肝病毒的病毒装配和分泌时所必需的（LenhoffR,SummersJ．JVirol,1994,68：4565～4571）．在WHV的Pre－S包胰蛋白中第201个氨基酸到第205个氨基酸所包含的顺序,甘氨酸－天冬氨酸－脯氨…     

水相中合成5-苯基-1H-四唑的新法探究

以苯甲腈、迭氮钠为原料,锌盐为催化剂,探讨在水相中合成5-苯基-1H-四唑化合物的新方法,研究了反应时间、催化剂用量、溶剂用量与反应物配比对产品收率的影响．结果表明,反应过程容易进行,最佳反应条件为n苯甲腈：n 迭氮钠=1：1．2,催化剂用量为0．25mol,反应时间20h,溶剂用量200mL,产率可以达到80％以上．     

H3N2SIV河南株非结构蛋白1(NS1)重组的纯化及Dot-ELISA的建立

为建立鉴别猪流感病毒感染猪和灭活疫苗免疫猪的诊断方法,利用pET-28a载体在大肠杆菌BL21中表达H3N2 SIV河南株NS1,并通过Ni2+-NTA亲和色谱法纯化His-NS1融合蛋白.用SDS-PAGE,Western blotting和Dot-ELISA分析纯化蛋白,表明重组NS1能与猪流感病毒感染猪血清进行特异性反应,而不与灭活疫苗免疫猪血清反应.结果表明重组蛋白能作为区别猪流感病毒感染猪和灭活疫苗免疫猪的诊断抗原,为控制猪群中的流感病毒奠定了基础.     

分布式知识库系统DKBS/TH—1中推理与查询接口的设计与优化

本文介绍了一个分布式知识库系统DKBS/TH—1的结构模型。它以PROLOG作为推理工具,Unify关系数据库系统作为存放知识的机构,二者之间通过一阶谓词逻辑的子集Horn子句进行联系.分布式系统中各结点之间的通讯联系也由Horn子句来实现,本文还讨论了PROLOG与关系数据库的结合方法及查询优化的技术.     

青海牦牛与云南牦牛乳球蛋白基因5''''调控区核苷酸序列同源性比较

利用一对PCR引物，寡聚核苷酸序列的上游引物为5’-gCg，AAT，TCA，TCC，CAC，gTg，CCT，gC-3’；下游引物为5’-gAg，AAT，TCC，Tgg，ggA，ggg，ACC，TT-3’。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后，分别克隆来自我国青海和云南地区牦牛的乳球蛋白基因的5’调控区1447bp的DNA片段。将该片段从琼脂糖凝胶中回收，克隆在pMD1S-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明，青海牦牛该序列的核苷酸序列与文献报道的奶牛该基因的同源性为97．65％，云南牦牛该序列的核苷酸序列与奶牛该基因的同源性为96．8％，青海牦牛与云南牦牛该基因片段的核苷酸序列同源性为99．4％。     

西部地区A1级通用机场扩展布局规划方法

针对西部地区A1级通用机场扩展布局规划问题,提出了一种基于现有运输机场布局的定量计算方法。该方法立足于西部地区A1级通用机场的功能定位,构建了机场扩展布局规划影响因素的层次分析模型,并据此对各需求点权重进行量化分析,结合P-中心模型,即使得选址点距离各航空需求点的总距离最小进行选址。最后以某西部地区A1级通用机场扩展布局规划选址为算例,对上述选址模型及方法进行了可行性分析。     

浅水船舶兴波阻力特性的理论分析

运用经典的线性兴波理论对浅水船舶兴波阻力特性进行了研究.针对浅水柯钦函数与深水柯钦函数之间存在的不相容性,通过引入深度影响因子来描述水深对浅水波阻的影响,重新定义了浅水柯钦函数,得到浅水线性波阻的一个新的表达式.借助量级分析和近似处理,导出了简化浅水柯钦函数和相应的浅水线性波阻公式.在上述工作的基础上,对浅水波阻特性进行了分析和讨论,合理地解释了若干实际现象.     

The genomic clone G-21 which resembles a beta-adrenergic receptor sequence encodes the 5-HT1A receptor

The recent cloning of the complementary DNAs and/or genes for several receptors linked to guanine nucleotide regulatory proteins including the adrenergic receptors (alpha 1, alpha 2A, alpha 2B, beta 1, beta 2), several subtypes of the muscarinic cholinergic receptors, and the visual 'receptor' rhodopsin has revealed considerable similarity in the primary structure of these proteins. In addition, all of these proteins contain seven putative transmembrane alpha-helices. We have previously described a genomic clone, G-21, isolated by cross-hybridization at reduced stringency with a full length beta 2-adrenergic receptor probe. This clone contains an intronless gene which, because of its striking sequence resemblance to the adrenergic receptors, is presumed to encode a G-protein-coupled receptor. Previous attempts to identify this putative receptor by expression studies have failed. We now report that the protein product of the genomic clone, G21, transiently expressed in monkey kidney cells has all the typical ligand-binding characteristics of the 5-hydroxytryptamine (5-HT1A) receptor.