运动发酵单胞菌定点整合质粒的构建

运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)是目前发现的乙醇发酵能力最强的微生物之一,被认为是进行大规模乙醇生产的潜在菌种,但其可利用的碳源范围窄.对其进行分子生物学基础研究和基因工程改造的工作早在上世纪八、九十年代就开始了,但基于其独特的生物学特性,至今遗传操作手段仍不成熟.以大肠杆菌(E.coli)pBR328为出发质粒,分段插入带Z.mobilis乳酸脱氢酶基因ldh、分别作为左右同源臂、1.5 kb大小的DNA片段,构建了Z.mo-bilis定点整合型质粒pBR328-ldhR-ldhL(6 239 bp),此质粒两同源臂片段即ldhR和ldhL的中间有稀有酶切位点NotI和SfiI,以方便插入待整合片段.经Notl位点插入1 216 bp氯霉素抗性基因cml,将相应质粒pBR328-ldhR-cml-ldhL以环型和线型形式分别电击转化Z.mobilis ZM4菌株,都成功筛选到了ZM4 ldh::cml菌株,证明此定点整合质粒是方便可用的,为对Z.mobilis的定点遗传操作提供了很好的基础.     

运动发酵单胞菌和大肠杆菌间穿梭质粒的构建

运动发酵单胞菌(Zymomonas．mobilis)是目前发现的乙醇发酵能力最强的微生物之一,被认为是进行大规模乙醇生产的潜在菌种;但由于其可利用的碳源范围窄,所以对其进行基因工程改造首先需要有较好的载体系统．以Z．mobilis内源质粒pZM2和大肠杆菌(E．coli)质粒pBR328、pACYC184为出发质粒,构建了三个Z．mobilis-E．coli之间的克隆型穿梭质粒,即pZB1、pZB21和pZB31．对它们在Z．mobilis CP4中的稳定性、拷贝数的初步比较分析表明：pZB21最稳定、拷贝数最高,pZB31次之,pZB1最差．进一步以pZB21为载体,在Z．mo- bilis CP4中表达E．coli的talB基因,酶活水平为0．087 U/mg蛋白．证明pZB21是能用于基因表达的、较为理想的Z．moblis-E．coli之间的穿梭载体．     

水解淀粉对运动发酵单胞菌酒精发酵的影响

工业水解淀粉用于运动发酵单胞菌的酒精发酵，其结果与１５％和２０％葡萄糖的发酵结果相近似，酒精终浓度可达９％，发酵周期为７０ｈ，发酵过程中，以２４－４８ｈ期间内产酒精速度最快，显示出水解淀粉用以替代葡萄糖进行运动发酵单胞菌酒精发酵的可能性。     

固定化运动发酵单胞菌细胞增殖的研究

本文报道了pH、温度和葡萄糖浓度诸因子对固定在海藻酸钙凝胶球中的运动发酵单胞菌(zymomonas mobilis)细胞增殖的影响。实验结果表明在pH6.0～7.0、温度25℃、葡萄糖浓度为10％的条件下,固定化运动发酵单胞菌增殖速度最快,并于7天内达到最大菌体浓度。     

超声波破碎运动发酵单胞菌方法初探

用国产CPs——1A超声波粉碎机破碎运动发酵单胞菌的菌体细胞,探讨了不同破碎条件对细胞破碎程度的影响。     

水解淀粉对运动发酵单胞菌酒精发酵的影响

工业水解淀粉用于运动发酵单胞菌的酒精发酵，其结果与１５％和２０％葡萄糖的发酵结果相近似，酒精终浓度可达９％，发酵周期为７０ｈ，发酵过程中，以２４～４８ｈ期间内产酒精速度最快，显示出水解淀粉用以替代葡萄糖进行运动发酵单胞菌酒精发酵的可能性     

葡萄糖浓度对固定化运动发酵单胞菌生产乙醇的影响

葡萄糖浓度是影响运动发酵单胞菌生产乙醇的关键因素。本文报道了在不同的葡萄糖浓度下固定化运动发酵单胞菌连续发酵生产乙醇的情况，并计算了在稳定状态下的各种动力学参数，实验结果表明：较高的糖浓度对生产乙醇不利。     

运动发酵单胞菌丙酮酸脱羧酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

以总DNA为模板，采用PCR技术克隆得到运动发酵单胞菌(Zymamonas mobilis）丙酮酸脱羧酶(pyru—Vate decarboxylase)基因pdc，将该基因连接到表达裁体pSE380上，得到重组质粒PSE—pdc,将此重组质粒转化到受体菌E．coliDH5α中，挑取重组菌株．经IPTG诱导后，在乙醛指示平板检测到丙酮酸脱羧酶活性．SDS—PAGE电泳结果显示出明显的特异性蛋白质条带：其分子量约为60KD．     

用正交试验法选择运动发酵单胞菌的最佳发酵合成培养基

运动发酵单胞菌(zymomonas mobilis)是一种产酒精的细菌。本文找出了一种可使该蘑长期传代的合成培养基;运用正交设计的原理,对影响酒精产率和糖的利用率的诸因子及其因子间的交互作用进行了试验,从中筛选出酒精产率高、残糖浓度低的合成培养基,并对试验结果进行了方差分析。     

固定化Zymomonas mobilis 10225乙醇发酵研究

运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis10225)为乙醇发酵菌种.在葡萄糖浓度为10%(w/V)的发酵培养基中,分别进行游离细胞,固定化细胞的乙醇发酵实验.结果表明,游离细胞乙醇发酵的产率系数为0.42,达到了理论值的82.4%,而固定化细胞乙醇发酵产率系数为0.51,达到了理论产率的100%.固定化技术对于提高运动发酵单胞菌酒精发酵表现有显著作用.     

运动发酵单胞菌快速发酵甘薯淀粉产乙醇的研究

该研究对实验室保存的4株运动发酵单胞菌（Zymomonas mobilis CICC10225, ATCC29191, CICC10232, IFFI10225）在不同葡萄糖浓度的合成发酵培养基及甘薯糖化液发酵培养基中的乙醇发酵能力进行比较,然后以筛选出的乙醇发酵效率最高的Z.mobilis CICC10225 为出发菌株,进行了较深入的以甘薯为原料的乙醇发酵研究,结果显示：Z.mobilis CICC10225具有快速代谢底物生产乙醇的能力,游离细胞乙醇发酵时,最高乙醇浓度达79.8 g/L,     

运动发酵单胞杆菌蛋白质双向电泳技术的建立

运动发酵单胞杆菌(Zymomonas mobilis)具有高乙醇耐受力和高乙醇转化率,产醇率也较高,是一种很好的生物能源.运用双向电泳技术对运动发酵单胞杆菌蛋白质组进行了一系列单因子实验,经过验证获得了重复性好、分辨率高的双向电泳图谱,为该菌的比较蛋白质组学的研究,发现并克隆产乙醇率高的基因奠定了基础.     

利用PCR产物一步法敲除大肠埃希菌的外排泵基因acrAB

通过电转化将一段PCR产物引入宿主菌BW25113/pIJ790细胞内,PCR产物两端有与染色体同源的30个核苷酸序列,中间是抗生素抗性基因。pIJ790上编码λ噬菌体的3个重组蛋白:Exo、Bet和Gam组成Red重组系统,可实现线性片段的一步法高效重组,以PCR产物中的抗生素抗性基因取代靶基因。通过该方法得到了大肠埃希菌的外排泵基因acrAB敲除突变株,该菌株在抗菌物质的抗菌机制研究方面能发挥一定的作用。     

基因工程重组过敏性蛋白(变应原)研究进展

目前,全球大约有25%的人口受到I型变态反应疾病的影响,而对此惟一有效的办法是应用特异性变应原进行免疫治疗(脱敏治疗).在应用天然变应原提取物进行传统免疫治疗的过程中,由于天然提取物应用时的计量很难标准化,因而影响了治疗的效果.而通过基因工程的方法所合成的修饰后高纯度特异变应原在保持过敏性蛋白完整的免疫活性的同时可降低其本身的过敏性,这种修饰后的过敏性蛋白的应用将使免疫治疗更趋于标准化,操作更加安全,最终可达到提高免疫治疗效果的目的.目前,重组修饰过敏性蛋白已经成为过敏性疾病研究的新热点.     

复合酶在合成洗衣粉中的应用

本文研究了由碱性蛋白酶、淀粉酶、碱性纤维素酶复配而成的复合酶在合成洗衣粉中的应用．结果表明：洗衣粉中添加复合酶,大大提高了其去污力,可同时去除各种类型污垢;在适宜条件下,复合酶与洗衣粉中各成分配伍性良好,并具有较高的酶活稳定性．     

同源重组在染色体DNA基因克隆中的应用方法

同源重组是生物界普遍存在的现象，从噬菌体、细菌到真核生物都有能发生同源重组的种类。如何把同源重组应用到基因克隆中成为近年来生物学家研究的热点。本文从宿主细胞的改造、重组功能的诱导、感受态细胞的制备、线性同源载体的获得及重组体的鉴定等几个方面具体叙述这种基因克隆的新方法，从分子水平上较为详尽地介绍了同源重组在染色体基因克隆中的应用、前景展望及存在的局限性。     

基因重组技术在疾病诊断和治疗中的应用

综述了疾病基因的发病机制和基因重组技术在疾病诊断和治疗中的应用，基因重组技术作为分子生物学发展的一个重要领域，它为生命科学的理论研究提供了的技术手段，也为工农业生产和现代化医学的发展开辟了广阔的前景。