Comparative analysis of A, B, C and D genomes in the genus Oryza with Cot-1 DNA of C genome

Fluorescence in situ hybridization （FISH） was applied to somatic chromosomes preparations of Oryza officinalis Wall. （CC）, O. sativa L. （AA）xO. officinalis F1 hybrid （AC）, backcross progenies BC1 （AAC and ACC）, O. latifolia Desv. （CCDD）, O. alta Swallen （CCDD） and O. punctata Kotschy （BBCC） with a labelled probe of Cot-1 DNA from O. officinalis. In O. officinalis, the homologous chromosomes showed similar signal bands probed by Cot-1 DNA and karyotype analysis was conducted based on the band patterns. Using no blocking DNA, the probe identified the chromosomes of C genome clearly, but detected few signals on chromosomes of A genome in the F1 hybrid and two backcross progenies of BC1. It is obvious that the highly and moderately repetitive DNA sequences were considerably different between C and A genomes. The chromosomes of C genome were also discriminated from the chromosomes of Dand B-genome in the tetraploid species O. latifolia, O. alta and O. punctata by Cot-1 DNA-FISH. Comparison of the fluorescence intensity on the chromosomes of B, C and D genomes in O. latifolia, O. alta, and O. punctata indicated that the differentiations between C and D genomes are less than that between C and B genomes. The relationship between C and D genomes in O. alta is closer than that of C and D genomes in O. latifolia. This would be one of the causes for the fact that both the genomes are of the same karyotype （CCDD） but belong to different species. The above results showed that the Cot-1 DNA had a high specificity of genome and species. In this paper, the origin of allotetraploid in genus Oryza is also discussed.     

DNA序列在植物系统进化研究中的应用

DNA序列分析已广泛应用于植物系统与进化学研究，根据不同的研究对象和问题选择相对应的DNA序列来进行研究显得十分重要。目前在植物系统与进化学中主要一些DNA的应用，主要是讨论叶绿体基因组（rbcL等）和核基因组（18S，ITS）中的特定DNA序列区段。研究表明，18S,rbcL等编码基因一般适用于较高分类阶元甚至整个种子植物谱系间的系统发育的探讨，而ITS极cpDNA的非编码区序列等因其较快的进化速率多用于较低分类阶元的系统关系研究。     

HSV1-tk基因的部分DNA序列分析

采用ＰＣＲ技术从商品质粒ｐＨＳＶ１０６扩增出ＨＳＶ１－ｔｋ基因（１１２８ｂｐ）,ＰＣＲ产物用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,然后以重组质粒ｐｃＴＫ为模板ｔｋ基因的５端引物为ＤＮＡ测序引物进行部分ＤＮＡ序列分析,部分ＤＮＡ序列分析证明ＰＣＲ产物为ＨＳＶ１－ｔｋ基因正确无误,成功筛选到ＨＳＶ１－ｔｋ基因的真核表达载体ｐｃＴＫ,并为利用ｔｋ基因在实验动物体内进行自杀性基     

利用粳稻基因组DNA和C_ot-1 DNA探针对普通野生稻和亚洲栽培稻的比较分析

以粳稻日本晴基因组DNA和Cot-1 DNA为探针,分别对日本晴、籼稻广陆矮4号和普通野生稻的染色体组进行了基因组原位杂交(GISH)和Cot-1 DNA荧光原位杂交(FISH)分析,并对3种染色体组进行了同源聚类和比较研究.结果表明:粳稻基因组DNA和Cot-1 DNA探针信号在3种水稻染色体组中的分布状况和覆盖率相似,Cot-1 DNA的覆盖率分别为(47.13±0.18)%、(45.89±0.22)%、(44.24±0.21)%,3种水稻基因组同源性高,亲缘关系接近.Cot-1 DNA在3种水稻染色体上的杂交信号分布各有特点,中高度重复序列的变异在普通野生稻向栽培稻进化和亚洲栽培稻籼、粳分化过程中具有重要意义,中高度重复序列含量较低的2、5、8号染色体是水稻染色体组进化过程中相对活跃的成分.     

利用C_ot-1 DNA FISH对3种异源四倍体野生稻的比较分析

利用来源于药用野生稻(CC基因组)的中高度重复序列C_ot-1 DNA作为探针,在相同的洗脱严谨度下,通过荧光原位杂交(FISH)对3种基因组同为CCDD的异源多倍体野生稻,宽叶野生稻(O.latifolia)、高杆野生稻(O.alta)、大颖野生稻(O.grandiglumis)进行基因组比较分析.结果发现:在80%的洗脱严谨度下,杂交信号在宽叶野生稻的C、D基因组上的分布差异较为明显,可以区分24条来源于C基因组的染色体和24条来自于D基因组的染色体;相同洗脱度下的高杆野生稻和大颖野生稻的C、D基因组则区别不明显,表明此2种野生稻中的C、D基因组亲缘关系比宽叶野生稻中的C、D基因组关系要近.在此基础上,分别利用来源于栽培稻(AA基因组)和药用野生稻(CC基因组)的C_ot-1DNA作为探针,在不同洗脱严谨度下,对C、D基因组关系相对最远的宽叶野生稻进行FISH分析,进一步研究宽叶野生稻染色体中C、D基因组的进化关系.随着洗脱严谨度的调整,杂交信号呈现出较高的特异性,主要分布在着丝粒、近着丝粒及端粒区域.结果表明:以不同洗脱严谨度下的FISH结果为基础进行的基因组分析.可进一步提高野生稻染色体识别的准确性,为研究异源多倍体的起源及进化提供依据.     

一种快速简单高效提取植物DNA的方法

在综合分析多种提取植物DNA方法的基础上,改良发展了一种快速简便高效的DNA抽提方法.以多种植物的子叶、叶片以及愈伤组织为材料,采用本方法进行抽提纯化,得到的DNA质量好、得率高,且提取过程简单,适合于大批量快速提取植物DNA.     

植物基因组DNA提取和纯化实验的改进

通过调整离心条件、剪去移液枪头、二次离心、滤纸吸附等操作步骤后,提取的DNA纯度较好,浓度较高,提高了CTAB法提取和纯化植物基因组DNA的效率和效果。     

大肠杆菌基因组的组构

以１９９３年４月为止的ＤＮＡ序列资料为依据，讨论了一年来大肠杆菌基因的研究进展，并以日本和美国科学家分别完成的两大片段的序列资料为中心，评述了大肠杆菌基因组的组成特点及其生物学意义．     

供水稻原位杂交的染色体标本制备方法的研究

为了制备出供水稻染色体位杂交用的染色体标要，以水稻根尖为材料，对８－羟基喹啉的预处理时间、纤维素酶和果胶酶的酶解时间以及后低渗时间进行了研究。并将传统的去壁低渗火焰干燥法进行了改进。结果表明：２ｍｍｏｌ／Ｌ ８－羟基喹啉预处理１ｈ，５５纤维素酶＋５％果胶酶在３０℃条件下处理５ｈ，后低渗３０ｍｉｎ。可获得数量较多，形态较好的供原位杂交用的有丝分裂早中期染色体制片。     

一种简便快捷的植物线粒体质粒DNA的提取方法

介绍了一种从植物材料中提取线粒体质粒DNA的方法,该方法不需要密度梯度离心和有机溶剂油提,整个提取过程可在较短时间内完成,该方法简便,快捷,效果好,对拷贝数低的线粒体质粒DNA得率高。     

一种适用于昆虫微量DNA模板制备的方法

随着分子生物学在昆虫领域中运用 ,昆虫 DNA的提取是有技术运用的前提 ,具有其重要的地位。但是由于一些昆虫体形较小 ,采用传统的酚 :氯仿抽提法不适用于微量 DNA模板的制备 ,而某些生物公司的试剂合相对而言价格较高。本文介绍一种适用于普通昆虫实验室贮藏及运用的微量 DNA模板制备方法。     

质粒DNA快速提取法

介绍了一种质粒ＤＮＡ的快速提取方法，所分离出的ＤＮＡ纯度较好，全部操作均在一只Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中进行，含质粒ＤＮＡ的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。此法操作简便，整个提取过程只需３０ｍｉｎ便可完成。     

BAC—FISH技术在栽培稻与野生稻中的应用

ＢＡＣ－ＦＩＳＨ技术是９０年代开始发展起来的一种新的定位技术。由于该技术较常规ＦＩＳＨ技术的信号检出率高得多,运用该技术已将一些重要抗性基因定位到水稻染色体上。随着该技术的不断发展,将在栽培稻和野生稻比较作图研究中发挥更大的作用。     

全程序微波辐射制备高等植物SEM样品的研究

本文以五种豆科植物和一种禾本科植物为材料，较为详细地研究和摸索了全程序微波辐射制备高等植物扫描电镜（ＳＥＭ）样品的条件和方法。结果表明。几种植物均能通过全程序微波辐射（包括半程序微波辐射）制得理想的ＳＥＭ样品。微波辐射制样的适宜条件为：固定、脱水、置换时的浸泡液终止温度３０±２℃，干燥终止温度７０±３．℃干燥时间３一一４ｍｉｎ。     

一种简便快速分离高质量基因组DNA的方法

介绍了一种简便快速从动物组织中提取高质量DNA的方法 ,可广泛应用于现代分子生物学实验 .     

DNA分子遗传标记技术在药用植物学中的应用

概述了DNA分子遗传标记技术在药用植物学中应用的理论依据,并综述了该技术在生药鉴定、亲缘关系、生物多样性保护、药材道地性和遗传育种等方面的研究进展。