北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究

为探讨北海竹林盐场极端嗜盐真菌的物种多样性及其抑菌活性,采用高盐培养基分离盐场饱和盐度采样点的可培养真菌,并基于ITS基因序列进行菌株鉴定;使用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,SA)和海豚链球菌(Strepstococcus iniae,SI)作为指示菌,利用96孔板法评价真菌发酵提取物的抑菌活性。本研究分离得到可培养极端嗜盐真菌16株,鉴定为6科6属12种,其中枝孢菌属(Cladosporium,3种)、黑孢霉属(Nigrospora,3种)和镰刀菌属(Fusarium,3种)是优势属。菌株F.incarnatum GXIMD00527和F.chlamydosporum GXIMD00541的发酵产物对4种指示菌有较强的抑菌活性[90%Minimal Inhibitory Concentration (MIC₉₀)<6.25μg...     

碱蓬内生枯草芽孢杆菌分离鉴定及抑菌活性检测

采用全自动微生物鉴定系统(VITEK)和分子生物学鉴定方法,从辽宁碱蓬中分离纯化出7种细菌:枯草芽孢杆菌(Bacillus stutilis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、缓慢葡萄球菌(Staphylococcus lentus)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae).其中,枯草芽孢杆菌(Bacillus stutilis)对供试的10种真菌有抑菌作用,尤其对草酸青霉菌丝干物质抑制率可达86.4%,对茄病镰孢菌和串珠镰孢菌的抑制率分别为52.2%和41.4%.     

西安枣园西汉早期墓葬出土古酒中菌害分析

针对2003年西安市文物保护考古所发现的西安枣园西汉早期墓葬出土古酒的菌害,分析微生物群落,并对照其成份判断菌种来源,为制定稳妥的古酒灭菌方案提供科学依据。研究使用分子生物学方法,通过培养分离微生物群落,16S r DNA/18S r DNA序列分析,根据同源性比对及系统发育树分析,鉴定出4种优势菌种,其中真菌为淡紫拟青霉菌,3种细菌分别为微球菌、葡萄球菌和考克氏菌属细菌。鉴定出的4种优势菌种与空气微生物中的常见菌种一致;判定古酒菌害原因主要来源于外界空气的交流;提出通过菌落滤除,隔绝空气,以有效抑制古酒中微生物滋生的防治对策。该研究也是16S r DNA/18S r DNA序列分析首次成功在酒类液体文物菌害成份鉴定中应用。     

致树鼩腹泻的奇异变形杆菌分离鉴定及药敏试验

目的诊断导致树鼩(Tupaia belangeri)腹泻的肠道致病菌,为疾病预防和控制提供参考。方法采集6只腹泻树鼩新鲜粪便,按常规肠道细菌鉴定方法进行分离培养,观察细菌形态和各菌种比例,对优势可疑菌进行生化和分子生物学鉴定,并进行了8种常用抗菌素的敏感试验。结果培养菌落在营养琼脂培养基上多数呈黄白色,表面光滑湿润;在S.S琼脂培养基上菌落为圆形、中心发黑,有的蔓延成黑色波纹状且有臭味。细菌形态为两端钝圆短杆菌,大小为(0.4—0.6μm)×(1.0—3.0μm),无芽孢和荚膜,革兰氏染色阴性,非抗酸菌。生化鉴定该分离株产硫化氢,鸟氨酸、尿素等反应阳性。核酸扩增后与GenBank中奇异变形杆菌相似度达99%。鉴定为奇异变形杆菌。该分离株对左氧氟沙星、环丙沙星等8种药物均敏感。结论作为条件致病菌的奇异变形杆菌能够引起哺乳期母树鼩和仔树鼩腹泻甚至死亡。实施针对性的饲养管理和药物治疗,可有效地控制该疾病的传播。     

林下连作种植参根际土壤可培养微生物区系及细菌群落对酚酸类化感物质的响应

为探究酚酸类成分对林下连作参根际土壤中微生物区系及可培养细菌群落的影响,以未栽培人参(Panax ginseng C.A.Meyer)林地土壤(1#样品)、连作未发病土壤(2#样品)和连作发病土壤(3#样品)为研究对象,探究根际土壤中微生物区系及可培养细菌群落结构、多样性的变化。同时,通过高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)分析方法对土壤样品中的酚酸进行定性和定量分析。结果表明,2#样品和3#样品土壤可培养微生物总数量与1#样品相比分别下降61.37%和68.24%;可培养细菌分别下降61.36%和68.18%;可培养放线菌分别下降72.97%和75.68%;可培养真菌分别为1#样品的1.40倍和0.47倍。3种样品共分离到193株细菌,分属于4门6纲13目19科39属96种。3种样品中最优势菌纲均为芽孢杆菌纲Bacilli(相对分离频率分别为51.67%、64.00%、48.28%),1#样品、2#样品最优势菌属为芽孢杆菌属Bacillus(相对分离频率分别为15.00%、21.33%),3#样品最优势菌属为链霉菌属...     

长春南湖水耐冷菌的筛选及其产酶特性

采用低温环境下的南湖湖水为样品,稀释后涂布平板进行富集培养,并进行细菌菌落形态及生理生化性质测定.实验共培养出耐冷菌35株,包括细菌14株,真菌21株.其中细菌分属于乳杆菌属、葡萄球菌属、糖球菌属、放线菌属;真菌分属于霉菌和酵母菌.分离的菌种能产生多种大分子物质水解酶类,包括氧化酶、接触酶、淀粉水解酶、明胶酶等,并且大...     

SPF小鼠上呼吸道常见细菌的分离鉴定及携带率分析

目的 对SPF小鼠上呼吸道分离到的细菌进行鉴定及携带状况分析.方法 按常规检测流程进行细菌分离培养、染色、镜检、生化反应、Vitek 2 compact全自动细菌鉴定.结果 SPF小鼠上呼吸道常见细菌有8种,按细菌携带率分四类,第一类:毗邻颗粒链菌,携带率98.6％;第二类:松鼠葡萄球菌和木糖葡萄球菌,携带率45％ ～...     

桉树林分枯落物分解微生物的种类和数量

通过不同地点、不同时期采集桉树枯落物样品,对其进行微生物的分离、纯化与鉴定。分离共获得195株微生物菌株,其中细菌129株分属于10属,主要为芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞杆菌属(Pseudo-monas)、利斯特菌属(Listeria)等;放线菌23株分属于链霉菌属(Streptomyces)、诺卡氏菌属(Nocardia)、小单孢菌属(Micromonospora);真菌44株分属于12个属,主要为镰刀菌属(Fusarium)、头孢霉属(Cephalos-porium)、丝核菌属(Rhizoctonia)等。分析表明:桉树枯落物中微生物数量和种类丰富,表现为细菌数量最高,真菌次之,放线菌最少;不同时期三大菌数量变化不明显;另外,混交林中的三大菌数量比纯桉林中的高。     

信阳传统发酵腊肉细菌的分离纯化及鉴定

对信阳传统发酵腊肉中的细菌进行了分离纯化及鉴定研究.共分离出8种细菌,根据其菌落、菌体的形态特征,生理生化特征进行初步鉴定.鉴定出的6种细菌为:金杆菌属、葡萄球菌属、蜡样芽孢杆菌、微球菌属、短状杆菌属、乳球菌属,另外还有2种细菌,因其含量少未做鉴定.优势菌为葡萄球菌和微球菌.     

蚯蚓粪中微生物群落特征分析

宏基因组学技术是研究特定环境微生物的重要手段之一.笔者利用ITS和16S rRNA高通量测序技术,对蚯蚓粪中真菌和细菌群落结构特征进行系统分析.结果发现,207331序列共获得11951 O T U s,细菌和真菌分别为10218,1733 O T U s.细菌群落检测到34个菌门,优势菌门为变性菌门,其次为拟杆菌门、酸杆菌门、放线菌门和浮霉菌门.优势菌目为浮霉状菌目、根瘤菌目和噬纤维菌目.真菌群落检测到9个门,优势门为罗兹菌门和子囊菌门,优势目为粪壳菌目.在属水平上检测到大量的有益生防真菌和生防细菌.该研究结果为进一步开发利用蚯蚓粪微生物资源、探索其在植物土传病害生物防治方面的作用提供理论基础.     

绵羊附红细胞体感染PCR检测方法的建立

为建立特异、敏感、快速的绵羊附红细胞体感染诊断方法,本试验根据已测得的绵羊附红细胞体16S rRNA基因序列（GeneBank：EU916726、FJ440328）,设计1对特异性引物,建立了绵羊附红细胞体的PCR诊断方法。特异性实验和敏感性实验结果表明,该方法与绵羊肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、枯草杆菌均无交叉反应,能检测到绵羊附红细胞体最低DNA量为5．2pg/μL．在-80℃存放1年的皿样中也检测到阳性样品。通过临床血样检测,证明该方法可以用于本病的早期感染和隐性感染的检测。     

一株富含类胡萝卜素光合细菌的分离鉴定

从不同生物环境中分离紫色非硫菌,测定其类胡萝卜素含量,筛选出富含类胡萝卜素的菌株.对该菌株的形态学特征、碳氮源利用情况、最适生长pH值及盐度等生物学特征进行研究;利用PCR技术扩增其16S rRNA基因,测序后进行16S rRNA基因序列分析,研究其分类地位.结果:分离自暨南大学明湖底泥的菌株R2,在所分离的8株紫色非硫菌中,类胡萝卜素质量分数最高,为4.83 mg/g(干菌体),该菌株符合红游动菌属(Rhodoplanes)的生物学特性,其最适生长pH为7.0,盐度为0.2%;16S rRNA基因的分子系统学分析表明,该菌株与红游动菌属的Rhodoplanessp.HA17相似性为99.4%.可确定筛选出一株高产类胡萝卜素的菌株,该菌株属于红游动菌属(Rhodoplanes).     

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

为检测绵羊肺炎支原体感染,根据公开发表的绵羊肺炎支原体16SrRNA序列设计特异性引物。建立了PCR诊断方法。通过对绵羊肺炎支原体标准株、临床分离株、丝状支原体山羊亚种及临床病羊鼻拭子的检测。发现应用该检测方法能够对标准株、分离株和临床病羊鼻拭子扩增出特异性产物,而对丝状支原体山羊亚种则扩增小出。证实所建方法在绵羊支原体性肺炎的诊断上具有特异性、相对快速、简便等优点,值得在临床中推广应用。     

支原体种属特异性PCR引物的设计及对细胞培养物支原体的检测

目的快速全面检测感染细胞、疫苗等多种生物制品中的支原体.方法从多种支原体的16SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列,作为支原体种属特异性引物,对标本进行检测.结果用这对种属特异性引物对已知阳性的50份标本进行检测,检测结果显示全部为阳性.应用于实践,检测了89份疫苗标本,阳性率为31.4%,而用常规培养法检测阳性率为12.3%.结论用该种属特异性引物检测支原体具有检测速度快、检测灵敏度高、特异性强等优点.     

一株产抗菌物质链霉菌的筛选及鉴定

从土壤中分离到一株对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)有较强拮抗作用的链霉菌菌株HCCB10124,研究其拮抗性表明,对10种常见的病原真菌和部分细菌有拮抗作用,但对植物病原性真菌的抑制效果高于细菌.其形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与链霉菌属中的白网链霉菌(Streptomyces albireticuli)相同,16S rDNA序列的同源性达99%.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株初步归属于白网链霉菌.     

皮肤感染患者病原菌种类和耐药性特点分析

目的探讨皮肤科患者感染病原菌种类和耐药性特点.方法从收治的皮肤感染患者伤口引流液或脓性分泌物标本中分离出病原菌165株,采用全自动微生物鉴定及药敏分析仪将菌株鉴定到种;采用CLSI推荐的KB法琼脂扩散法检测菌株的耐药性.结果检出革兰氏阳性菌84株,占50.91%;革兰氏阴性杆菌70株,占42.42%;真菌11株,占6.67%;检出率前三位的菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌.革兰氏阳性球菌对替考拉宁、万古霉素不存在耐药性;A群链球菌对皮肤科常用抗菌药物的敏感性较高.革兰氏阳性球菌对糖肽类抗菌药不存在耐药性;A群链球菌对皮肤科常用抗菌药物的敏感性较高.分离出耐甲基西林金黄色葡萄球菌51株,占30.91%;分离出耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌48株,占29.09%.结论近5 a本院皮肤科患者感染病原菌种类以革兰氏阳性球菌为主,耐亚胺培南铜绿假单胞菌上升趋势较为明显,特殊病原菌亦有较高的检出率.皮肤科应重视感染性标本的病原学检查,为合理使用抗菌药物提供参考.     

树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

摘要: 目的 建立树鼩角膜内皮细胞( corneal endothelial cells,CECs) 体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法 通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代 CECs 取材方法的优劣性。分别使用 DMEM /F12,M199,Ham’s F12 /M199 三种培养液以确定树鼩 CECs 原代细胞最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩 CECs 纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶( NES) 设计并筛选特异性引物,使用 PCＲ 方法检测细胞 NES 表达情况并用 NES 抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果 揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩 CECs 细胞。Ham’s F12 /M199 培养液是树鼩 CECs 的最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂可以达到 CECs 的纯化目的。结论 优化的树鼩 CECs 细胞培养纯化方法对树鼩 CECs 的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合 CECs 的一般特征。     

横断山区中缅树鼩肥满度的初步研究

通过对分布于横断山区中缅树鼩的肥满度进行测定,探讨中缅树鼩肥满度与环境之间的关系.将56只体重相近的中缅树鼩随机分为7组(每组8只):对照组(自由取食,control);分别禁食12h(F12h)组、24h(F24h)组和36h(F36h)组;以及禁食36h后重喂食12h(R12h)组、48h(R48h)组和7d(R7d)组.实验结束后测定动物的体重和体长.采用体重与体长立方的比值(K=100 W/L3)作为测定肥满度的指标.结果发现:中缅树鼩雌雄个体肥满度之间差异不显著,不同年龄组之间肥满度差异不显著.中缅树鼩不同季节的肥满度差异极显著,肥满度的季节变化趋势为:冬季最高,秋季较高,春季较低,夏季最低.禁食和重喂食极显著影响中缅树鼩的肥满度,禁食后肥满度降低,禁食24h时达到极显著水平,禁食36h时最小,重喂食7d后能恢复到对照组水平.中缅树鼩肥满度在不同环境条件下的变化模式与其生存的食物波动大、高海拔低纬度和年平均温度较低的横断山区密切相关.     

高产5-氨基乙酰丙酸光合细菌株的分离鉴定

从不同生态环境中分离培养出20株光合细菌,进行5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)的产量检测,筛选出一株分离自广州市云溪公园池塘底泥的菌株R5,其5-ALA产量最高,达4.92 mg/L.为了确定菌株R5的分类学地位,对该菌株的形态学、碳源利用情况等生理生化特性进行了研究,表明该菌株符合红假单胞菌属的生物学特征;以菌株R5基因组DNA为模板PCR扩增16S rDNA基因,对PCR产物进行了序列测定,将所测得的核酸序列与相关细菌的16S rRNA序列进行比对,并构建进化树进行系统发育分析,发现菌株R5与沼泽红假单胞菌株KUGB306(Rhodop-seudom onas palustrisKUGB306)形成一个类群,序列同源性为99%.故最后确定该高产5-ALA的菌株属于红假单胞菌属(Rhodopseudom onas).