毛霉酶促磷酸化反应条件的研究

本文较详细的研究了毛霉酶促磷酸化的反应条件,并讨论了反应体系中各种因素对其酶促磷酸化的影响。在试验中发现高浓度葡萄糖能推迟ATP累积高峰出现的时间;高浓度磷酸盐能促进磷酸化反应;葡萄糖、磷酸盐和反应时三者的配合关系对ATP克分子转化率影响较大。最后用正交试验确定了酶促反应的较佳方案。     

固定化增殖酵母细胞技术研究

本文介绍了在一定载体中,固定化完整酵母细胞的制备和增殖方法.关键是研究化学稳定性好、机械强度大、发酵能力强的固定化酵母.实验结果表明:固定化酵母细胞可以反复使用、大大缩短发酵周期,用于液态白酒,糖蜜酒精及蜂蜜酒的生产是可行的.     

具有蔗糖转化酶活力的酵母细胞的固定化

用明胶包埋、戊二醛交联制备的固定化酵母细胞,菌体包埋量大,活力回收高,机械性能好。酵母细胞固定化后,表观米氏常数有明显增大,热稳定性有所提高。固定化细胞装柱后用于蔗糖的转化,连续使用15天,酶活力保持不变。     

酶促磷酸化合成腺三磷的影响因素及其合成机制的初步报告

对利用啤酒酵母活体的复合酶系磷酸化合成腺三磷(ATP)进行了研究。证明反应系统中葡萄糖浓度为0.1M时ATP的转化率最高。啤酒酵母经8℃深水贮藏4—7天后磷酸化合成ATP的能力显著增强。在反应系统中乙醛和甲苯加入与否并不显著影响ATP的合成。用加入抑制剂的方法对啤酒酵母酶促磷酸化合成ATP的途径进行了初步研究,结果是:丙二酸和NaF强烈抑制ATP的合成;而NaN_3,2,4—DNP只有很少的抑制效果。证明啤酒酵母磷酸化合成ATP主要是通过EMP途径代谢水平的无氧磷酸化,而氧化磷酸化不是主要的。据此理论,把属于有氧呼吸类型的白地霉置于通有氮气的水中,密封贮藏于8℃冰箱中7天后,代替啤酒酵母坭进行磷酸化合成ATP的试验,结果得到了59.2%的转化率,而不经处理的新鲜白地霉在同样条件下是不能把AMP磷酸化合成ATP的。这不仅进一步提供了上述论点的证据,且说明生产上采用核酸含量高的需氧菌株代替来源较少的属厌氧呼吸的啤酒酵母进行酶促磷酸化合成ATP是可能的。     

"Na+、K+—ATP酶"在糖酵解中的作用

成熟的红细胞是通过糖酵解产生ATP，主要用于维持膜上Na^ 、K^ -ATP酶的功能。Na^ 、K^ -ATP酶通过水解ATP进行逆化学梯度的离子运输；维持细胞内Na^ 、K^ 浓度的相对恒定；保持了细胞膜内外渗透压平衡；对于细胞以及整个机体具有重要作用。     

载体固定化增殖酵母应用于淀粉质原料酒精生产的研究

固定化细胞 (酶 )技术是近十余年来迅速发展起来的一项生物工程高新技术 ,并在发酵工业、医药工业、化学分析、环境保护等诸多领域得到了较为广泛的应用 ,显示出了巨大的优越性和广阔的发展前景。采用固定化细胞技术制备的固定化酵母用于酒精发酵 ,具有酵母细胞密度高 ,发酵速度快 ,出酒率高 ,设备利用率高 ,操作简便 ,适于连续化、自动化生产等显著优点。因而 ,采用固定化酵母生产酒精 ,已成为酒精行业中技术创新的研究热点。我国于90年代相继开展此方面的研究 ,近两年固定化酵母酒精发酵技术已在广东、广西、云南三省的糖蜜酒精生产中得到…     

用海藻酸钠为载体固定化产二氢嘧啶酶菌体细胞的研究

近年来,固定化微生物细胞及其在工业上的普遍应用,越来越引起人们重视。这是因为微生物细胞被某一载体固定化后、显著增加了靶酶的稳定性,有利于固定化细胞对底物的催化转化和连续作用。同时细胞固定化后,增加了酶——细胞膜——细胞壁——载体——底物之间的反应复杂性。因此固定化细胞的催化性质是一个值得探讨的问题。     

适于固定化细胞内底物有效扩散系数测定的无反应发生条件

在无反应发生条件下进行组分在固定化细胞内有效扩散系数测定时,常常要使细胞失去活性。通过显微镜形态观察及重量变化测定,分析了常用的几种失活细胞的方法对细胞本向的影响。测定了由各种不同方式得到的无活性固定化细胞内葡萄糖与乙醇的有效扩散系数,并与有活性固定化细胞内组分的有效扩散系数进行了比较。提出了一种方便于使用,既可保护底物不被消耗,又可以测得更接近实际值的有效扩散系数的无反应发生条件;苯甲酸处理法。     

含5′-磷酸吡哆醛(辅因子)的酶的固定化

辅因子—5′-磷酸吡哆醛(Pyridoxal phosphate简称PLP)在酶促反应中具有重要的作用。Weetall和Ikeda等分别用PLP与琼脂糖联接进行固定化各种含PLP的酶和直接用琼脂糖来固定化含PLP的酶的研究。本文在前文的基础上,把固定化PLP用于谷氨酸脱羧酶及谷丙转氨酶的固定化,并对其结构功能的相互关系进行探讨。     

固定化假丝酵母99-125脂肪酶催化合成甘油二酯

对无溶剂体系中自制固定化假丝酵母99-125脂肪酶催化油酸、甘油合成甘油二酯过程进行了研究，比较了自制固定化酶与商业酶在催化该反应上的不同，发现自然挥发脱水比真空脱水更适合自制固定化酶催化合成甘油二酯。对反应条件的研究表明：底物摩尔比2∶1，反应温度50℃，酶量0.6g/5.65g，自然挥发脱水条件下油酸酯化率可达92.64%，甘油二酯含量可66.16%。     

葡萄糖浓度波动对人肝L02细胞损伤的实验研究

研究了葡萄糖浓度波动对于体外培养的人肝实质L02细胞的影响以及可能的机制.利用人肝实质细胞株L02进行传代培养.实验共分为4组:正常组(N)、持续高糖组(HG)、波动组(GF)和渗透压对照组(OP).各组细胞培养72 h后,测定培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,肝细胞内糖原含量,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化酶歧化酶(SOD)、Na~+K~+-ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶的活力,胞内游离钙离子([Ca~(2+)]_i)浓度以及细胞膜的流动性.高糖组和波动组细胞培养液中ALT,AST和LDH活力上升,细胞内GSH,SOD,Na~+K~+ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶活性均下降,MDA和糖原含量上升,细胞膜流动性下降;高糖组和波动组与正常组比较均差异显著(p0.001),波动组较高糖组也有显著差异(p0.01).葡萄糖浓度波动能够导致细胞膜通透性的改变和细胞内酶的严重泄漏,同时对肝细胞有明显的氧化损伤和毒性作用,而且比单纯的高糖对肝细胞的损害更为明显和严重.     

Ecto-protein kinase activity on the external surface of neural cells

ATP is secreted in association with neurotransmitters at certain synapses and neuromuscular junctions. Extracellular ATP is known to exert potent effects on the activity of cells in the nervous system, where it can act as a neurotransmitter or as a modulator regulating the activity of other neurohormones. We have suggested that such modulation may involve the activity of extracellular protein phosphorylation systems. It is well known that intracellular protein kinases are important in the regulation of various neuronal functions, but protein kinases which use extracellular ATP to phosphorylate proteins localized at the external surface of the plasma membrane (ecto-protein kinases) have not been demonstrated in neuronal cells. Here we present direct evidence for the existence of an ecto-protein kinase and demonstrate endogenous substrates for its activity at the surface of intact neural cells. The phosphorylation of one of these surface proteins is selectively stimulated during cell depolarization. In addition, neuronal cell adhesion molecules (N-CAMs) appear to be among the substrates of ecto-protein kinase activity. These results suggest a role for surface protein phosphorylation in regulating specific functions of developing and mature neurones.     

降血糖营养强化面包的研制及其对血糖值的影响

降血糖营养强化面包是以面包专用粉、山药粉、茯苓粉、蛋白糖为原料 ,加入高铬酵母 ,经过调粉、发酵烘烤精制而成。经过正交试验确定了产品的最佳配方 ,并通过临床实验证明了此种面包具有一定的降糖效果 ,适合糖尿病人及老年人食用     

超声对细胞膜通透性影响的研究现状

不同剂量和强度的超声对细胞会产生一定生物效应.当超声参数设置合适时,能使细胞膜通透性明显增强.加入声学造影剂,由于造影剂中存在很多微泡,微泡在超声波的作用下被激活,泡核表现为振荡、生长、收缩及崩溃等一系列动力学过程,在此过程中局部产生高温高压,使细胞膜通透性进一步增强.细胞膜通透性增强能使细胞内物质释放,细胞外物质进入细胞,这样可用于释放代谢物质或中间产物,化学方法治疗肿瘤及基因转导等.根据近几年的研究,超声对细胞膜通透性的影响可以部分用于解释超声杀菌的机理,但这还有待于我们进一步的深入研究.     

杨树木屑废弃物酶解液发酵制备富硒酵母的研究

以杨树木屑为原料,考察了固液比、酶添加量、pH和酶解时间对其酶解效果的影响。通过优化酶解条件制得葡萄糖质量浓度为55 g/L的酶解液,将酶解液作为碳源替代传统培养基中的葡萄糖,其他营养成分不变,发酵制备富硒酵母,重点研究了酵母菌在酶解液中的生长情况和富硒能力。结果表明,酵母在酶解液培养基中长势良好,5 L发酵罐发酵36 h后,每L发酵液酵母干重23.9 g,单位酵母硒含量超过3 500 μg/g。     

生物传感分析仪在共固定化酶中的应用研究

本文研究了生物传感分析仪在共固定化GOD-CAT树脂的过氧化氢(H2O2)质量浓度的测定和酶活力的表征中的应用。首先,采用过氧化氢电极法检测了反应液中过氧化氢的质量浓度,过氧化氢由不同GOD/CAT酶活比条件下制备的共固定化GOD-CAT树脂催化氧化葡萄糖生成,从而找出了最适的GOD/CAT酶活比;然后,采用葡萄糖氧化酶电极法检测了催化氧化过程中反应液中底物葡萄糖质量浓度的变化,提供了一种共固定化GOD-CAT树脂的活力表征方法,并以此为基础研究了共固定化GOD-CAT树脂的酶学性质。结果表明,共固定化GOD-CAT树脂的最适GOD/CAT活力比是1:1;共固定化酶的最适温度是45℃,最适pH值为6.0,其热稳定性、pH稳定性、操作稳定性及贮存稳定性较游离酶均有一定的提高。     

纳米银—金复合颗粒对葡萄糖生物传感器响应灵敏度的增强效应

以纳米银-金复合颗粒与聚乙烯醇缩丁醛(PVB)构成复合固酶膜基质,用溶胶-凝胶法固定葡萄糖氧化酶(GOD),组成葡萄糖生物传感器。实验表明,纳米颗粒可以使电极的响应电流从相应浓度的几十纳安增强到几千纳安。探讨了纳米颗粒效应在固定化酶中所起的作用,开辟了制备直接电子传递第三代生物传感器的新途径。     

霞多丽葡萄自然发酵醪中酿酒酵母的分离及其酿造特性分析

以烟台地区霞多丽葡萄自然发酵醪为材料,筛选鉴定本土酿酒酵母并测定其发酵力和耐受性,选育优良酵母用于霞多丽干白和赤霞珠干红葡萄酒的酿造。用孟加拉红培养基筛选酵母菌,经WL显色鉴别培养基和5.8S ITS序列鉴定获得12株酿酒酵母。通过测定受试菌株发酵后残糖量、酒精度及耐受能力(酒精度、SO₂、酸、高糖),选育4株酵母用于酿造霞多丽干白葡萄酒,测定发酵参数指标和主要挥发物含量,并结合感官评定确定酵母YXF2、YXF5和YXF10适宜酿造干白葡萄酒。菌株YXF5和YXF10酿造生产的干红葡萄酒香气特征明显,不同于商品酵母,具备酿造地域特色葡萄酒的潜力。     

胶红酵母固定化方法研究

研究胶红酵母固定化方法,并测定所得固定化细胞的机械强度和通透性,对固定化方法进行初步筛选;研究磷酸缓冲溶液对固定化细胞强度的影响,最终得到目的固定化方法。试验表明:CA-活性炭(C)复合凝胶包埋所得固定化细胞,经0.6%聚乙烯亚胺(PEI)强化12 h,再经1%的戊二醛强化3 h后,机械强度大大提高,能耐磷酸缓冲液。     

以明胶为载体的固定化葡萄糖氧化酶的研究

1.研究了明胶经戊二醛处理后,酶经渗透制备固定化葡萄糖氧化酶的方法。采用这种方法制备的固定化葡萄糖氧化酶活力高、使用稳定。2.酶固定化后,表观米氏常数有所增加,热稳定性有所提高,其他葡萄糖氧化酶性质几乎没有改变。固定化酶提高了酶的稳定性和利用效率,促使近十几年来固定化酶的方法和技术的飞跃发展。固定化葡萄糖异构酶生产果葡糖浆、固定化青霉素酰胺酶生产半合成青霉素中间体6APA等一系列工业应用的成功,已使固定化酶成为新兴的酶工艺的重要组成部分。固定化葡萄糖氧化酶可用于制葡萄糖酸,近年来还用于血糖的分析。明胶是一种优良载体,适用于多种酶的固定化。本文报导了作者用渗透法制备明胶固定化酶的方法及固定化葡萄糖氧化酶的酶学性质等方面的工作。