牛体外受精技术研究的现状与展望

系统综述了牛体外受精技术研究的现状及存在的问题．并对今后的研究方向和前景提出了展望。牛卵母细胞可在不含血清的成熟培养液中获得受精及胚胎发育能力，促卵泡素、促黄体素及上皮细胞生长因子均对这一过程具促进作用。肝素是迄今最为有效的精子获能处理方法，但在受精过程中对精子获能起决定作用的是卵丘细胞和卵母细胞本身。提高受精质量可明显提高受精卵的胚胎发育能力。体外受精卵可通过改善培养条件或与体细胞进行复合培养发育到囊胚阶段．但后者更为稳定可靠。目前，牛卵母细胞的体外受精分裂率可达８０％，囊胚发育率达４０％左右．两枚鲜胚的移植妊娠率可达５０％～６０％．而两枚冻胚的移植妊娠率仅３０％～５０％。因此，尚需进一步提高体外受精胚胎的活力和改进胚胎的冷冻保存技术。     

发情犬与未发情犬卵母细胞体外受精的研究

采集发情犬和未发情犬卵巢,回收大腔（直径大于２ｍｍ）、小腔（直径１－２ｍｍ）和不可见卵泡卵细胞,进行体外受精,结果如下：①发情组的单精受精率（３１．２％）,原核形成率（１９．４％）高于未发情组。发情组的多精受精率（１２．６％）要低于未发情组。②直径１－２ｍｍ、大于２ｍｍ卵泡组单精受精率略高于不可见卵泡组。可见卵泡组的原核形成率高于不可见卵泡组。③发情犬卵泡直径大于２ｍｍ组卵裂率高于发情犬和未发情犬     

屠宰母牛卵巢卵母细胞的体外受精与早期发生

将采自屠宰母牛卵巢的未成熟卵子在含有促性腺激素和牛血清的TCM199或Ham'sF10内培养成熟后,再用以钙离子载体Ionophore A23187诱导获能的牛新鲜或冷冻精子进行授精处理,6～7小时后移入发育用培养液,即含有牛血清及丙酮酸钠的M199或Ham's F10内继续培养。在授精48小时及60～96小时后分别统计了培养卵子的受精率及受精卵的卵裂率。在部分实验中把发育为4～8细胞期的胚移入经假孕处理过的母兔输印管内培养4～5天或者在原发育培养液内继续培养5～8天之后观察了桑椹胚、囊胚的出现率。结果是培养卵子的受精率及受精卵的卵裂率分别达92.0～97.8％和62.5～67.6％,移入兔输卵管内和在体外条件下继续培养的卵子中分别有3.7～30.8％和4.3～31.0％(发育为外形正常的桑椹胚～囊胚期胚胎(包括扩张囊■及■化囊胚)。     

内蒙古白绒山羊的体细胞克隆

内蒙古白绒山羊是具有悠久历史的绒肉兼用的品种,对荒漠和半荒漠环境有较强的适应性.山羊绒是来自绒山羊的细绒毛,具有极高的商业价值.为了扩大优秀绒山羊数量,本试验尝试利用体细胞克隆技术进行绒山羊克隆研究.从一只成年优秀公绒山羊中,取其耳缘组织,培养获得成纤维细胞.从当地屠宰场获得山羊卵巢,抽取卵母细胞并体外培养成熟.然后以绒山羊成纤维细胞为核供体,通过体细胞克隆技术生产克隆胚胎.核移植重构胚的融合率、卵裂率和囊胚发育率分别为75.8%,72.6%和11.6%.将处于1-至2-细胞期的胚胎移植入同期发情受体母山羊输卵管中,于2009年4月30日诞生了一只克隆绒山羊.该克隆羊的生长状态及产绒量与细胞核供体山羊相一致,呈现良好的发育态势,说明体细胞克隆技术可以成为良种绒山羊的扩繁途径.     

哺乳动物体外受精的研究现状和进展

卵母细胞的成熟、精子获能、受精和早期胚胎培养等组成了完整的体外受精系统。本文较详细综述了该技术的研究进展状况以及影响其成功的关键因素。     

不同种公牛精液对牛卵母细胞体外受精效果影响的研究

分别利用不同个体的海伏特、安格斯和荷斯坦种公牛精液进行体外受精，观察了不同品种不同个体种公牛精液的体外受精效果，利用五种海伏特种公牛精液进行体外受精后卵裂率为１７．６％～７４．７％，囊胚发育率为１．０％～３２．６％，不同个体间差异极显（Ｐ〈０．０１）。利用五种安格斯种公牛精液进行体外受精后卵裂率为３４．７％～８５．３％，囊胚发育率为６．２～４０．５％，不同个体间具极显差异（Ｐ〈０．０１）。利用     

陕北白绒山羊现代育种技术展望

本文在介绍绒山羊育种现状的基础上,阐述了BLUP和REML的联合育种法、QTL定位及MAS育种法、冷冻精液、AI和MOET育种法、核移植和转基因育种法以及抗性育种法等现代育种技术以及其在陕北白绒山羊育种上的展望。     

肝素及血小板激活因子对牛卵母细胞体外受精的影响

在受精液中添加不同浓度的肝素（２，６，１８，５４，１６２，４８６ｍｇ／Ｌ）均能明显提高牛卵母细胞的受精分裂率（分别为８３．６，８４．９，８５．７，８９．２，８４．５和９０．２％，比对照组７３．６％，Ｐ〈０．０５）和卵裂指数（授精后４４－４５ｈ大于２－细胞的卵裂数占卵裂总数的百分率，分别为８５．７，８５．０，８９．９，９．８７，８７．４和８５．５％，对对照组５７．６％，Ｐ〈０．０１。然而，卵母细胞的     

卵母细胞的不同对牛体外受精效果的影响

为了进一步提高牛体外受精（ＢＩＶＦ）胚的发育率，探讨了来自不同大小卵泡、具有不同卵丘细胞层数以及细胞质形态不同的卵母细胞对牛体外受精效果的影响。结果表明：１）分别采自直径大于５ｍｍ、２￣５ｍｍ和小于２ｍｍ的卵泡的卵母细胞，经体外成熟、体外受精后，卵裂率分别为５４．５％（３０／５５）、６４．４％（８５／１３２）和５０．４％（６３／１２５）。其中，２￣５ｍｍ卵泡的卵母细胞的体外受精结果显高于小于２ｍ     

切割采卵法及牛卵巢深层卵泡卵母细胞的体外受精

为提高牛体外受精(BIVF)过程中屠宰牛卵巢的利用率,本研究将采集的110个牛卵巢先用常规的注射器抽吸法采卵后,再用刀片切割法采集了位于深层的卵泡卵母细胞,并对两种方法回收的卵子分别进行了BIVF实验。结果表明,在先用抽吸法采卵每头牛可得到9.88±2.42枚可用卵子的基础上,切割法采卵又可获得平均8.74±3.48枚可用卵子。这使得平均采卵数达到了每头牛18.62±2.59枚。体外受精后,由切割法回收的深层卵子其卵裂率和桑椹胚、囊胚发育率分别为43.01％(160/372),14.24％(53/372)和10.48％(39/372),均明显低于抽吸法回收卵的73.62％(201/273)、31.14％(85/273)和19.05％(52/273),(P<0.01)。本研究证明了抽吸后再切割的两次采卵法对提高牛卵巢采卵效率有着明显的效果,而且这部分深层卵泡卵母细胞用于体外受精后可发育为正常的早期胚胎,但各项发育指标尚有待于进一步提高。     

体外受精-胚胎移植及其衍生技术249个周期的临床研究

目的：总结本中心2年的体外受精-胚胎移植(IVF—ET)和单精子卵泡浆内显微注射(ICSI)技术研究及临床应用。方法：采用GnRHa／FSH/HOG和GnRHa／FSH/HMG／HOG、GnRHa／HMG/HOG及OCP/GnRHa／FSH/HOG四种超排卵方案治疗225对(249个周期)不孕夫妇。结果：取卵3383个。平均每周期取卵数13．59个;获受精卵3062个,受精率90．51％,卵裂率97．10％;249个周期植入胚胎762个,平均每周期移植3．06个。生化妊娠112例,临床妊娠95例,17例自然流产。截止目前已出生35个试管婴儿。其中。男婴14个,女婴21个,双胎妊娠4例,三胎妊娠2例。西北首例ICSI婴儿已1岁半,发育正常。结论：IVF—ET和ICSI是治疗不孕症的一种有效手段,特别是根据患者年龄、体重、卵巢功能状态及子内膜等因素。选择不同的超排卵方案和应用不同的药物剂量。随着技术中各个环节的进一步提高和完善,妊娠率会不断提高。     

受精滴中精子不同平衡时间对牛卵母细胞体外受精的影响

为寻找精子在受精滴中的最佳平衡时间, 以加入精子时间为０ ｈ （对照组）, 分别在０ｈ, ０．５ ｈ, １ ｈ, ２ ｈ, ４ ｈ 随机加入等数卵母细胞到各受精滴, 结果显示： ０ ｈ, ０．５ ｈ 组卵裂率较高, 分别为８７．７％ 、８４．７％ , 与其他组相比差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）; ０．５ｈ 组的囊胚率最高,为６７．５％ ,与对照组的５７．７％ 比较差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）。结果表明,受精滴中精子经过０．５ｈ 平衡后, 弱精及死精粘聚沉淀, 余下活力强的健壮精子, 此时加入牛卵母细胞受精, 可获得较高卵裂率及囊胚率     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育的比较

目的对MII期水牛卵母细胞进行人工诱导激活,可以间接判断体外成熟卵母细胞质量的优劣,并且,卵母细胞的充分激活也是提高核移植效率的关键因素之一。比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响以及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响,并在相同条件下,对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较。结果表明,水牛卵母细胞体外成熟27 h或30 h的囊胚发育率(19.0%,17.7%)明显高于体外成熟21 h或24 h的囊胚发育率(12.3%,13.8%);Ion联合6_DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他几组激活方法;在相同培养条件下,孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力存在着差异,其中卵裂率差异不显著,但孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚(21.7%,13.0%)。     

猪卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰场收集卵巢,用注射器从卵泡中吸出卵丘－卵母细胞复合体,对猪卵母细胞体外成熟的条件进行研究,根据卵母细胞体外成熟时的核成熟率、胞质成熟及体外受精时精子的穿卵速度,合适的体外成熟培养时间为４２～４５ｈ．卵母细胞周围卵丘细胞的多少及其排列紧密状态与卵母细胞的体外成熟率密切相关。卵泡大小与卵母细胞的体外成熟率有关,大卵泡卵优于小卵泡卵。ＰＭＳＧ促进猪卵母细胞体外成熟。     

体外培养绵羊卵母细胞核质成熟的研究

实验通过研究卵母细胞的核相及皮层颗粒的分布,探讨按照卵泡大小和卵丘细胞层多少分类后的不同绵羊卵母细胞在体外培养过程中的核质成熟情况,结果表明：（１）小卵泡卵经体外２４ｈ后的核质成熟率分别为４５．９％和２８．２％,远低于大（９３．５％,６６．７％）、中（８５．１％,５１．０％）两类卵泡卵,２）大卵泡卵在体外培养２０ｈ已完成核质成熟,较中等卵泡提前４ｈ。３）ｇｋｐｈｅ ３ｎｆｃ ｃ ｈ ｇｃｆｔ ｐｎ     

内蒙古3个绒山羊品种RAPD的初步研究

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术,研究了内蒙古地区3个绒山羊品种的DNA多态性,由此推导它们之间的遗传距离和系统发育关系。在所使用的12种随机引物中,有8种随机引物扩增出多态谱带,共检测到32个RAPD标记,其中有21个发生变异。用Nei的片段公享度公式计算了品种间的遗传距离,用UPGMA聚类法构建了系统发育树。结果表明：内蒙古白绒山羊的3个类群彼此亲缘关系较近,分化不明显;内蒙古白绒山羊与罕山白绒山羊聚为一个大类,辽宁绒山羊和乌珠穆沁白绒山羊聚为一个大类,说明内蒙古白绒山羊与罕山白绒山羊有较近的亲缘关系,乌珠穆沁白绒山羊与辽宁绒山羊的亲缘关系较近。     

昆明小鼠体外受精卵体外发育的研究

分别以TYH和T_6为受精用培养液,将昆明小鼠附睾精子获能培养1小时后与超排卵子进行授精,受精率分别为70.2%和65.3%.将体外受精卵分别在Whitten,Whitten 输卵管上皮,Whitten 输卵管上皮 EDTA,TCM199,TCM199 输卵管上皮和TCM199 输卵管上皮 EDTA中进行培养,授精后24,48,72小时观察发育情况,结果Whitten和TCM199以及分别在其内添加输卵管上皮不能维待2细胞胚的进一步发育;当在Whitten和TCM199中分别同时加入输卵管上皮和EDTA时,2细胞、4细胞胚的发生率明显高于其它四种处理组,且分别有84.1%和81.6%的2细胞胚可克服2细胞阻滞,发育至桑椹胚.