模拟人体胆汁相平衡研究的初步探索

由于现代饮食结构的改变 ,胆石症发病率明显上升 ,已成为影响人类健康的常见病和多发病 .胆结石一般可分为以胆固醇为主和胆色素为主的两大类 ,前者约占 70 % .探索胆固醇结石成因对于胆石症的防止和治疗有重要的意义 .胆结石成因机制的研究已有近 1 0 0年的历史 .近年来该领域的研究有了很多新的发现 ,使我们对胆固醇结石的形成机制有了新的认识 .尽管很少有物理化学家参与胆石成因的研究 ,但是近 2 0年来这一领域的研究却一直聚焦在胆汁体系的物理化学性质上[1] .Small等人[2 ,3 ] 早期研究发现胆固醇、胆盐和卵磷脂在一定组成范围内构成…     

增加雷斯青霉15α–羟化酶基因拷贝数提高甾体转化效率

孕二烯酮是第三代高效避孕药的主要成分.雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)ATCC10490催化甾体左旋乙基甾烯双酮的C15α–羟基化反应合成孕二烯酮的重要中间体C15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.为了提高现有生产菌种的转化效率,本文研究了在雷斯青霉ATCC10490中增加甾体C15α–羟化酶基因(PRH)拷贝数对转化效率的影响.分别构建了PRH基因的诱导型和组成型过表达载体pPZP-p800-PRH和pPZP-TrpC-PRH,并通过同源重组的方法定点整合到雷斯青霉基因组.转化实验表明,在出发菌株中增加一个PRH基因拷贝显著提高了甾体左旋乙基甾烯双酮转化效率,重组菌PRH-P800和PRH-TrpC的摩尔转化率分别提高了13%和20%,同时转化时间均缩短了12 h.     

避孕药对不同糖质量浓度下雌性黑腹果蝇寿命的影响

低糖是引起女运动员三联征的主要原因之一,避孕药对运动成绩的影响也存在争议.本文选用模式生物雌性黑腹果蝇作为女运动员研究的模型,通过研究不同白砂糖和避孕药质量浓度对黑腹果蝇寿命的影响,为女运动员健康维护提供理论依据.结果表明雌性黑腹果蝇的寿命与白砂糖浓度成倒U字型相关,在正常糖质量浓度(40.5 mg/mL)条件下雌性黑腹果蝇的寿命显著延长,与此相比,无糖组和高糖组寿命显著降低.在低糖模型(糖质量浓度13.5 mg/mL)和正常糖模型(40.5 mg/mL)下,一定质量浓度的避孕药(0.25 mg/mL)均显著地延长果蝇寿命,而无避孕药和高避孕药质量浓度都不利于雌性黑腹果蝇的生长.在高糖模型下果蝇的寿命随避孕药质量浓度变化不再出现明显的倒U型曲线,寿命最高点的质量浓度出现在4号(0.20 mg/mL)药物质量浓度点.研究结果表明适当服用避孕药可以延长低糖组、正糖组和高糖组条件下雌性黑腹果蝇寿命.     

胆色素类结石的组成、结构与形成机理的研究

一 引言 胆石症是腹部外科的常见病,一般可分为两类:胆固醇类结石以胆固醇为主要成分,经常长在胆囊;胆色素类结石含有较多的胆红素,大多发生在肝脏内外的胆管。前一类结石的手术治愈率为90％左右,并初步阐明了其形成机理,另外,用口服鹅去氧胆酸溶石也获得了一定效果。然而对于胆色素类结石手术治疗后胆管炎复发率将近三分之二,中西医     

双肾藤茎枝甾体类化学成分的分离鉴定

【目的】系统研究药用植物双肾藤(Bauhinia glaucasubsp.hupehana)茎枝的化学成分,明确其药用物质基础。【方法】采用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等分离技术,从双肾藤茎枝中分离甾体类单体化合物,运用理化和波谱分析方法鉴定其化学结构。【结果】从双肾藤茎枝分离获得6个甾体类化合物,分别鉴定为(24R)-5α-豆甾烷-3,6-二酮(1)、(22E,24R)-麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(2)、(24R)-5α-豆甾-4-en-3,6-二酮(3)、豆甾烷-4-烯-3-酮(4)、β-谷甾醇(5)、胡萝卜苷(6)。【结论】从双肾藤中分离获得的甾体类化合物包括甾醇、甾酮和甾体苷,其中化合物1和2均为首次从该属植物中分离得到。     

赭曲霉甾体11α–羟化酶基因AOH在毕赤酵母中的表达及功能分析

11α–羟基左旋乙基甾烯双酮(11α-OH-GD)是生产高效避孕药去氧孕烯的关键中间体.丝状真菌赭曲霉(Aspergillus ochraceus)TCCC41060可以转化左旋乙基甾烯双酮(GD)形成11α-OH-GD,但该转化反应特异性低,副产物偏高,限制了其工业应用.为了研究赭曲霉转化GD特异性偏低的机理,本文克隆了赭曲霉11α–羟化酶基因AOH并构建了表达载体p PIC3.5,K-AOH,获得了重组毕赤酵母菌株.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹实验(Western blot)分析表明,AOH重组蛋白相对分子质量为6.12×104,与预测结果一致.对转化产物进行薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析结果显示,AOH重组菌株能够转化GD,形成目标产物11α-OH-GD以及3种副产物.以上结果表明:AOH基因编码的甾体11α–羟化酶对底物GD转化反应的特异性较差.     

MS营养液对苦良姜组培假植苗生物学产量的效应

苦良姜又名黄姜。属于薯蓣科，薯蓣属。是理想的提取甾体激素类药物的重要原料，皂甙元(俗称皂素)，其甾体结构化合物加以改造，就可得到各种不同的甾体激素类药物。从苦良姜根状茎中提取的最初产品为皂雄酮、醋酸孕酮(单酯)、强的松、可的松系列以及催产素、避孕     

甾体皂苷的选择性酸水解研究

甾体皂苷的药物活性不仅与苷元有关,而且与糖链部分有更为密切的联系.为了研究糖链结构对甾体皂苷生物活性的影响,从龙葵(Solanum nigrum L.)和穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)中提取了3种甾体皂苷类化合物澳洲茄边碱、澳洲茄碱和薯蓣皂苷,通过选择性酸水解,制备了一系列糖链结构不同的产物.研究结果表明,澳洲茄边碱水解得到4种产物,澳洲茄碱水解得到3种产物,β1-澳洲茄碱无法分离得到.用浓度为2%的H2SO4水解薯蓣皂苷,90℃反应75 min,主要得到γ-薯蓣皂苷水解产物,此条件下具有很好的选择性;而用5%的H2SO4水解,75℃反应75 min,则主要得到β-薯蓣皂苷水解产物.     

磁场对胆石中胆固醇溶解作用的影响

研究了旋转磁场、静磁场、脉冲磁场对胆石中胆固醇溶解作用的影响。对样品中胆固醇的含量进行了定量分析，测定了溶出百分数。结果表明，上述磁场对胆石中胆固醇的溶解均有不同程序的促进作用。     

蒙克汀及几种胆石溶解剂的体外溶石研究

选用蒙克汀，橙油，舒胆通，三七皂甙提取母液组成几类单方及复方的溶石剂 ，对胆固醇型胆石及胆固醇和胆色素混合型的胆石进行了体外溶石实验。实验结果表明，蒙克汀及橙油对此二类胆石均为良好的溶石剂，胆石在此二种试剂中浸泡４８ｈ，减重率均在９０％以上。两者相比，橙油的溶石效果更好。     

利用固定化微生物细胞羟基化左旋乙基甾烯双酮

研究了海藻酸钙包埋法固定化技术在甾体化合物的生物转化中的应用.利用固定化 Penicillium raistrickii 细胞实现对左旋乙基甾烯双酮（13-ethyl-estr-4-ene-3,17-dione）的15α 位羟基化作用,合成了重要的药物中间体15α-羟基左旋乙基甾烯双酮.优化了固定化孢子浓度,固定化孢子接种量,投料浓度,投料时间,转化时间等转化条件.结果表明：在摇瓶发酵生物转化中,固定化 Penicillium raistrickii 细胞可重复利用5次而转化能力没有明显下降.     

四川乐山胆石的电镜、能谱和红外光谱研究

本文选取四川乐山地区手术取出胆石34例(其中胆总管结石17例、肝胆管结石7例,胆囊结石5例、肝胆管残余结石3例、胆道结石1例、胆石症1例),分别用扫描电子显微镜、能谱仪、红外光谱仪进行测试分析研究. 根据34例结石的外观和电镜图片,可分为4类:无定形状石、     

表达KstD重组大肠杆菌转化甾体化合物的条件优化

3-甾酮-Δ1脱氢酶是胆固醇降解的关键酶之一,能脱去甾酮C1,2位上的氢原子,形成双键,在甾体药物的合成过程中具有重要的作用.以异源表达3-甾酮-Δ1脱氢酶的重组大肠杆菌为材料,对其培养条件以及黄体酮转化条件进行了优化,实现了甾体化合物的高效转化.首先,对表达3-甾酮-Δ1脱氢酶基因的重组大肠杆菌的培养条件对黄体酮脱氢的影响进行了研究,结果表明,IPTG浓度为0.05mmol/L,在28℃,pH值为7的条件下诱导培养5h,获得最高转化活性的细胞;其次,以优化条件下获得的菌体为催化剂,研究了各种转化条件对底物转化的影响,结果表明,以甲基-β-环糊精为助溶剂,转化温度为37℃,底物质量浓度为6g/L,菌体量为100g/L,pH为7.0,黄体酮的转化率达到99%以上,比优化前的产量提高了2倍,转化率提高近1倍.     

甾体5α-还原酶抑制剂的高效液相色谱法体外筛选模型

报道了一种用高效液相色谱法(HPLC)筛选甾体5α-还原酶抑制剂的体外模型.将甾体5α-还原酶液、睾酮溶液、辅酶(NADPH)与5α-还原酶抑制剂(非那甾胺和爱普列特)在37℃下反应30 min,反应终止后,通过HPLC测定反应前后底物睾酮量的变化来分析酶的活性,进而由酶活性的降低来判断抑制剂对5α-还原酶的抑制作用.将实验数据按Lineweaver-Burk倒数作图,求得甾体类抑制非那甾胺抑制常数Ki=4.32±0.38μmol/L,爱普列特抑制常数Ki=1.14±0.23μmol/L.实验所得的数据和图形均说明了本实验所采用的高效液相色谱法作为一种甾体5α-还原酶抑制剂体外筛选模型是简便可行的.     

边界条件对纤维素胆甾相聚集态结构的影响

乙基氰乙基纤维素／二氯乙酸溶液形成的胆甾相的聚集态结构随着浓度的变化会呈现出多种织构形态。不同的边界(基片面)取向条件，会对其胆甾相溶液的织构会产生影响。总体上，基片面垂直取向有利于螺旋轴平行于基片面(液晶分子层垂直基片面)的焦锥排列基片面平行取向则会抑制螺旋轴平行基片面的焦锥排列，而趋向于螺旋轴垂直基片面的平面排列。界面表面张力和随溶液浓度而增大的胆甾相扭转力能抑制边界取向作用对胆甾相聚集态结构的影响。     

兔儿伞中甾体成分的研究

兔儿伞中甾体类化学成分的研究,采用硅胶柱色谱及HPLC等色谱技术进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据分析鉴定化合物的结构。从兔儿伞全草正己烷萃取物中分离得到5个甾体类化合物,分别鉴定为:β-谷甾醇(1)、?-波甾醇(2)、β-谷甾醇-3-Ο-β-D葡萄糖苷(3)、豆甾醇(4)、7?-羟基谷甾醇(5)。化合物4,5为首次从该植物中分离得到。     

胰胆返流致胆道结石的实验研究

选用成年家犬通过手术建立胰胆返流致石模型。在人为胰胆返流七天后,伴有胆管完全梗阻的 A 组和部分梗阻的 B 组胆汁胆酸、卵磷脂、胆红素显著减少,胆固醇绝对值虽也减少,但相对比值却升高,胆汁沉淀压积增多,且肝外胆系有胆砂形成。单纯胰胆返流而无胆总管下端梗阻的 C 组,四种成分都减少,无胆砂,但有胆红素钙及胆固醇结晶沉淀。D 组(对照组)夹管仅造成胆管梗阻无姨胆返流,术后胆汁各成分按比例升高,胆管既无胆砂又无胆红素钙及胆固醇结晶。根据实验结果,作者认为胰胆返流特别是合并有胆总管下段完全性或不完全性梗阻是胆石症重要病因之一。据此建议采用手术方法中断胰胆返流,将有助于防止胆石形成和复发。     

避孕药饲喂果蝇的遗传学效应研究

利用果蝇(Drosophlia melanogaster)为试验材料,探讨了避孕药饲喂果蝇后产生的各种生物学效应.在果蝇培养基中添加不同浓度的(10、20、30、40、50、60、70 mg.L-1)避孕药,然后成对放置果蝇.经4代饲养,分别统计分析果蝇后代的数量、性比,测定了幼虫体重.结果发现,不同浓度的避孕药可显著减少果蝇后代的成蝇数目、可产生部分畸形个体、降低成蝇的性比;但对果蝇的幼虫体重影响却不明显.     

螺甾内酯(Spiroenone)中间体的合成

3β-乙酰氧基雄甾-5，15-二烯-17-酮(2)与甲基硫氧叶立德(3)通过亲核加成反应得到螺甾内酯(Spiroenone)重要中间体3β-乙酰氧基-15β，16β-亚甲基雄甾-5-烯-17-酮(1)，产物经重结晶法分离，收率达80．5％．讨论了反应的主要影响因素，找到了优化条件，即反应温度为12℃，n((CH3)3S^ OI^-)：n(NaH)：n(2)=1．1：1．05：l，溶剂为二甲亚砜和四氢呋喃(体积比为4：1)时，加料方式为叶立德溶液加入到甾体溶液中．实验表明：低温有利于15β，16β-亚甲基产物的形成．测试了产物的物理常数；并用IR，MS，^1HNMR等波谱分析手段对产物进行了表征、     

去氢表雄酮对抗NMDA神经毒性与抑制细胞内Ca2+升高有关

去氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone，DHEA)是一种神经甾体物质，虽然已经发现对中枢神经系统有保护作用，但其分子机制尚未阐明．从胚胎小鼠(E15～16)大脑皮层分离神经元，离体培养10d，用MTT法检测DHEA对抗NMDA神经毒性的作用．用荧光染料Fluo-3处理后，激光共聚焦显微镜分析胞内Ca^2 浓度的变化，研究了DHEA神经保护作用与胞内Ca^2 浓度的相关性．结果发现：(1)NMDA的剂量、时间依赖方式降低神经元的活性，(2)DHEA预处理可以明显改善NMDA诱导的形态学变化，且剂量依赖性预防NMDA的毒性，(3)1mmol／L NMDA诱导细胞内游离Ca^2 荧光浓度的迅速升高，而DHEA可以阻断这种变化．以上数据表明，DHEA可以保护神经元，对抗NMDA的神经毒性作用，其机制可能与抑制胞内Ca^2 升高有关．