杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜（DMSO）为效应物．研究其对杂色鲍碱性磷酸酶（ALP）活力的影响，结果表明：该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降，当DMSO浓度达40％，酶活力几乎完全丧失．说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用．导致酶活力丧失50％的DMSO浓度为17％．在较低DMSO浓度（〈20％）的失活是可逆的反应过程．动力学研究表明，该酶的失活过程属于混合型．进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与DMSO的结合常数（K1和K1s），结果表明K1〈K1s即说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用．应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况，随着DMSO浓度增大，荧光强度逐渐增强．但发射峰未发生明显变化现象．说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化．     

乙醇对大肠杆菌碱性磷酸酶活性与构象的影响

常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶（ＥＡＰ）活性影响状态作用机制进行了研究．结果表明,ＥＡＰ酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对 ＥＡＰ有明显的失活作用,ＩＣ５０为１３％．关于乙醇对 ＥＡＰ失活作用机制的研究表明,乙醇对 ＥＡＰ的失活作用是以非竞争性机制模式进行的．应用荧光光谱研究 ＥＡＰ经乙醇微扰后的分子构象变化,发现 ＥＡＰ的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,说明酶蛋白分子中的荧光发色基团所处微环境已经发生变化,乙醇对 ＥＡＰ分子构象存在显著影响．      

中华猕猴桃蛋白酶在乙醇溶液中的分子折叠

研究了中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）乙醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱、圆二色光谱（ＣＤ谱）及傅立叶变换红外光谱的变化，并测定了相应的活力变化，当乙醇浓度低于３０％时，酶的荧光强度无明显变化，而乙醇浓度大于３０％时，则酶荧光强度增大，且峰位略红移。在乙醇溶液中，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ内出现正峰，峰强度随乙醇浓度的增高基本表现为逐渐增大，峰位也逐渐蓝移。ＣＤ谱及红外光谱的测定结果表明低浓度乙醇中酶分子有序二级结构的减少及高浓度乙醇中β－折叠含量的增加．随乙醇浓度的增加．酶的活力表现为逐渐降低，且乙醇对酶的失活作用类似于竞争性抑制。     

丙酮对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以丙酮为效应物,研究其对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降,当丙酮浓度达25%,酶的剩余活力仅为20%,说明丙酮对青蟹NA-Gase有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的丙酮浓度为7.5%.在较低丙酮浓度(＜10%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与丙酮的结合常数(K1和K1s),分别为4.06%和10.49%,K1＜K1s,说明底物存在对酶被丙酮的失活作用有一定的保护作用.应用荧光发射光谱研究青蟹NAGase经丙酮微扰后的分子构象变化情况,结果表明:丙酮对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随丙酮浓度增大而降低,说明酶分子中的生色基团Trp和Tyr残基的微环境发生了变化.     

中华猕猴桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与活力变化研究

研究中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化；酶的内源荧光强度随甲醇浓度的增加而增高，且发射峰略有红移．在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ范围内出现正峰，随甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移．ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ──螺旋度有不同程度的减少．在１０％～５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象，当甲醇浓度为３０％和４０％时，激活程度最大，约为天然酶活力的１５０％．     

无花果蛋白酶分子去折叠与催化功能

应用光谱法研究无花果蛋白酶（ＥＣ．３．４．４．１２）在不同浓度脲及ＬＤＳ存在下的结构变化和活力变化的关系。荧光光谱显示，在１－６ｍｏｌ／Ｌ脲范围内，荧光强度均比天然酶高，但剩余活力只有天然酶的２０％以下，随脲浓度增大，α螺旋度有不同程度的增加，酶在低浓度（０．５ｇ／Ｌ）ＬＤＳ作用下，荧光强度下降，发射峰红移，在高浓度ＬＤＳ作用时，荧光强度增强，发射峰基本保持不变，活力则随着ＬＤＳ浓度增大而下降，甚     

长毛对虾碱性磷酸酶功能基团的研究

用对－氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基，酶活力不受影响，说明该酶不是“巯基酶”．用Ｎ溴代琥珀酰亚胺修饰酶后，活力完全丧失，修饰后的酶在２７５ｎｍ处的紫外吸收峰完全消失，３４０ｎｍ处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸残基是酶活性必需基因之一．用甲醛、醋酸酐修饰氨基，溴代乙酸修饰咪唑基也可以使酶活力完全丧失，说明赖氨酸残基及组氨酸残基也是酶活性功能基因．用乙酰丙酮修饰精氨酸残基，酶活力下降了５０％，精氨酸残基可能与维系酶分子构象有关．     

文昌鱼酸性磷酸酶在甲醇溶液中的构象与活力变化

文昌鱼酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，Ｅ．Ｃ３．１．３．２）是一种含有铁离子的金属酶，其可见光谱中５００ｎｍ的吸收峰以及荧光５１５ｎｍ的发射峰为该酶分子含铁的特征峰，与酶活力关系密切．通过荧光发射光谱和紫外可见光谱对该酶在不同浓度甲醇溶液中的构象与活力变化进行研究．不同浓度（Ｖ／Ｖ）的甲醇对酶活力有明显的抑制作用，动力学分析表明甲醇对酶的抑制为非竞争性抑制，其抑制常数为２０％．还研究了在甲醇存在下ＡＣＰａｓｅ活力中心的构象与活力变化，结果表明其构象变化快于活力变化．     

脲对果菠萝蛋白酶的变性与失活动力学

以脲为变性剂,以荧光光谱为监测手段,对果菠萝蛋白酶(Fruit bromelain)的分子构象变化进行研究,酶的荧光强度随脲浓度增大而递增,发射峰出现红移。荧光偏振在 230～240 nm及 260～290 nm 出现二个负峰,后者较为显著,并随脲浓度增大而加剧。脲对酶水解N-苄氧羰酰 L-赖氨酸对硝基酚酯(CBZ-Lys·pNP)活力的影响,表现为非竞争性抑制类型;比较脲对游离酶(E)及结合酶(ES)的失活速度常数。结果二者相等,底物不表现保护作用。测定酶在不同浓度脲中的变性速度常数和失活速度常数,比较了酶的构象变化及催化活力的关系,酶的失活速度常数比变性速度约大6～16倍。说明酶活性中心对脲的敏感性,酶活力的表现很大程度上依赖于酶构象的稳定性和完整性。     

脲引起反相胶束酵母醇脱氢酶的紫外与荧光变化

比较了ＡＯＴ－异辛烷及水相两种体系中脲引起的酵母醇脱氢酶（ＹＡＤＨ）紫外和荧光变化。在水相反应系统中随着脲浓度增加（至３．０ｍｏｌ／Ｌ），酶活性迅速下降并全部失活，构象发生重大改变，２２０ｎｍ处的紫外吸收增加，荧光强度减小，３３６ｎｍ处的荧光峰红移１２ｎｍ至３４８ｎｍ，在Ｒ＝１５的反相胶束体系中，酶浓度相同时ＹＡＤＨ活力相当于水相ＹＡＤＨ的６３％左右，但脲浓度增至３．０ｍｏｌ／Ｌ时ＹＡＤＨ的活力基本无变化，２４０ｎｍ和２７０ｎｍ处的紫外吸收峰、３５７ｎｍ处的荧光发射峰均随着脲浓度的增加有所升高。上述结果表明脲对两种体系中ＹＡＤＨ的分子构象和活力的影响是不同的     

Comparison of Inactivation and Unfolding of Calf Intestinal Alkaline Phosphatase in Guanidinium Chloride Solution

IntroductionCalf intestinal alkaline phosphatase(CIP,EC3 .1 .3 .1 ) is a metalloenzyme which catalyzes thenonspecific hydrolysis of phosphate monoesters[1 ] .The X-ray crystal structure of bacterial alkalinephosphatase has been reported to0 .2 nm resolutionin the presence of inorganic phosphate[2 ] . Theactive site is a pocket containing a tight cluster oftwo zinc ions (0 .3 9nm separation) and onemagnesium ion (0 . 5 and 0 .7nm from two zincions) .CIP also contains zinc and magnesium ions…     

曲酸与胰蛋白酶相互作用的光谱学研究

研究了曲酸对胰蛋白酶活性的影响,以及曲酸处理后胰蛋白酶紫外光谱、荧光淬灭光谱、同步荧光光谱和三维荧光光谱的变化．结果显示曲酸对胰蛋白酶具有激活作用;二者相互作用后,曲酸可以使胰蛋白酶的紫外吸收强度增强,但却使得蛋白内源荧光强度下降;Stern-Volmer作图显示曲酸对胰蛋白酶的荧光淬灭为静态淬灭作用;用同步荧光光谱和三维荧光光谱探讨了曲酸对胰蛋白酶构象的影响．     

Effect of Urea on Activity and Conformation of a Glycoprotein

Introduction In some enzymes, inactivation occurs before noticeable conformational change can be detected during denaturation by guanidinium chloride or urea[1-6]. Tsou[7] suggested that enzyme active sites are formed by relatively weak molecular interact…     

h—SOD在脲、胍变性剂中的光谱学特征

研究了人血超氧化物歧化酶（h-SOD)在脲、胍及不同温度下变性的分子构象与活力之间的关系。酶的吸收光谱与酶活力的变化表明：当用不同的变性剂处理后,酶蛋白的空间结构发生了改变,紫外吸收表现出明显的增色效应;酶的荧光强度随脲浓度的增加有所增加随胍浓度的增加明显下降,在4mol/L胍变性条件下,h-SOD的发射峰自337nm红移到353nm,且酶活力明显下降。据此结果推测：酶活力的下降与构象的改变是同步发生的。     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

乙腈对α-淀粉酶催化活性的影响

乙腈对α-淀粉酶活性具有抑制作用，这种抑制作用随着乙腈溶液浓度的增大而增强。动力学分析表明乙腈的抑制类型为线性混合型抑制作用。紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析显示酶的二级结构在乙腈作用下发生了变化，导致了酶活性的丧失。     

Activity and Structure Changes of Arginine Kinase from Shrimp Feneropenaeus chinensis Muscle in Trifluoroethanol Solutions

Trifluoroethanol has often been used in protein folding studies. The changes in activity and unfolding of arginine kinase from shrimp Feneropenaeus Ghinensis muscle during denaturation in different concentrations of trifuoroethanol were investigated using far-ultraviolet circular dichroism and fluorescence emission spectra. Arginine kinase was inactivated in trifluoroethanol solutions. The tertiary and secondary structures of arginine kinase were also destroyed in the trifluoroethanol solutions. The unfolding and inactivation courses were measured and compared. Inactivation occurred prior to unfolding, which suggests that the arginine kinase active site is more easily damaged by the denaturant than the enzyme as a whole. The result also indicates that the arginine kinase active site is situated in a limited and flexible region of the enzymemolecule.     

异烟肼与牛血清蛋白相互作用的光谱研究

用紫外吸收光谱和荧光光谱研究了异烟肼(INH)与牛血清蛋白(BSA)的相互作用.荧光光谱表明,INH对BSA的荧光有较强的猝灭作用.通过结合常数和结合位点数的计算,证明这种荧光猝灭机理符合静态机制,INH和BSA形成了1∶1稳定复合物;考察不同温度和酸度下的猝灭作用,进一步证实其静态猝灭行为和疏水作用机制.紫外吸收光谱和同步荧光光谱表明,INH与BSA的相互作用使蛋白质的分子构象发生变化,而同步荧光光谱显示两者的结合位点更接近于色氨酸.