营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一--DMEM培养基使黑色素瘤B16细胞的恶性生长抑制

对小鼠黑色素瘤B16细胞在DMEM和RPMI1640两种培养基中培养产生的活细胞数和黑色素量进行了检测.结果显示,该癌细胞在DMEM培养基中培养产生的活细胞数比在RPMI1640培养基中培养产生的活细胞数平均减少87.9%,而黑色素量平均增加795%.以"黑色素量/活细胞数"计算分化指数,再以"DMEM中的分化指数/1640中的分化指数"计算DMEM相对于1640的对B16细胞的分化指数,显示DMEM中的分化指数平均是1640中的分化指数的67.8倍.提出营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一.     

培养基诱导B16细胞黑色素合成及机理研究

研究不同培养基对B16细胞体外培养生物学特性的影响及其黑色素表达能力与相关分子作用机制.方法:利用不同培养基对B16细胞进行体外连续传代培养,考查培养基对细胞形态、细胞成活率、细胞周期和黑色素合成等方面的影响.同时,借助RT-PCR、Western Blot和双向电泳等技术,研究与黑色素生物合成相关蛋白质的表达水平.结果:B16细胞在Gibco-RPMI-1640-31800和Gibco-DMEM-12800这两种培养基中培养时,细胞外观形态良好、细胞活力强、传代周期短并且均可稳定连续传代培养,两者的细胞周期也一致;B16细胞在GibcoRPMI-1640-31800培养基中基本不合成黑色素,而在Gibco-DMEM-12800培养基能大量合成黑色素.分析B16细胞中三种黑色素合成相关蛋白质(Tyrosinase,Tyrosinase-related protein 1和Tyrosinase-related protein 2)在以上两种培养基中表达的差异,发现这三种蛋白质的m RNA转录水平基本没有差异,在Gibco-DMEM-12800培养基中这三种蛋白质的翻译水平均明显提高,总蛋白质组也更加多样.结论:Gibco-DMEM-12800培养基通过提高Tyrosinase、TRP1和TRP2等三种蛋白质的翻译水平使B16细胞黑色素大量合成.     

贝氏高原鳅不同组织原代培养的研究

采用胰酶半消化法,对贝氏高原鳅的吻端、肾脏和性腺组织的原代培养条件进行探究,使用MEM,RPMI1640,DMEM和DMEM/F12培养基进行培养;血清质量分数设置为10%,30%,50%和100%;分别置于37℃,26℃和室温(11～15℃)条件下培养,观察细胞在不同条件下的生长情况.初步确定了各组织原代培养的最佳条件是温度26℃、血清质量分数50%的条件下,吻端和肾脏组织在MEM培养基、精巢在DMEM培养基中生长情况最优.Giemsa染色显示各组织细胞结构完整,荧光染料Alexa fluor 488Phalloidin显示各组织细胞的微丝网络发达.     

MTT检测超声激活血卟啉对SW-480细胞的杀伤作用

采用1.1、1.6、2.3MHz频率聚焦超声结合血卟啉的方式对体外培养的人结肠癌细胞SW 480进行照射,其介质分别为NaCl溶液、RPMI1640、完全培养基,用MTT法测试了SDT对肿瘤细胞的杀伤效果.结果表明,SW 480细胞在声照强度为1.5W/cm2,频率2.3MHz条件下,介质为NaCl溶液、RPMI1640和完全培养基中都存在超声激活血卟啉增强杀伤肿瘤细胞的效果,且在RPMI1640和完全培养基中这种效果和处理后细胞孵育的时间有一定的相关性.     

人胚肺细胞系(MU-L1)生物学特性研究

目的：对新建人胚肺细胞系(MU-L1)的生物学特性进行评价，以期建立可用于疫苗生产的人二倍体细胞株.方法：使用不同培养基及血清、不同血清浓度和传代比例培养MU-L1细胞，通过细胞形态、增殖速率和生长动力学等进行比较分析，筛选出较适宜的培养条件，用适宜的培养条件连续培养细胞至生命周期结束.传代过程中检查无菌、支原体和外源病毒因子，并进行染色体核型分析.结果：在常用培养基(MEM、DMEM、M199、DME/F12和PRMI1640)、胎牛血清和新生牛血清中MU-L1细胞均良好生长；按1∶4传代比例，使用含10%新生牛血清的MEM培养基培养，可培养至67代(世代),在生命周期的不同阶段经液氮冻存，复苏活率在91.56%～98.92%,生长良好.染色体核型为正常人二倍体核型，2n=46,无菌、支原体和外源病毒因子检查均为阴性.结论：MU-L1为正常人二倍体细胞系，具备作为病毒性疫苗基质进一步研究和生产应用的价值.     

黄腐酚逆转B16-F10黑色素瘤细胞恶性表型

本研究从体外增殖、细胞周期分布、克隆形成和迁移能力、黑色素合成以及糖酵解水平等考察了黄腐酚(XN)对B16-F10高转移潜能小鼠黑色素瘤细胞恶性表型的影响。结果表明，XN明显抑制B16-F10细胞增殖、克隆形成和体外迁移，阻滞细胞周期于G0/G1期，并上调细胞黑色素合成水平。同时发现XN下调B16-F10细胞的葡萄糖摄取，降低乳酸脱氢酶和己糖激酶活性及NAD⁺/NADH比率，下调缺氧诱导因子1(HIF-1α)和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达。另外，XN明显延长荷B16-F10黑色素瘤小鼠生存期。总之，本研究表明XN逆转B16-F10黑色素瘤恶性表型，并发挥抗肿瘤增殖和转移活性，或与其调控肿瘤糖代谢效应相关。     

人胚胎脑神经干细胞分离纯化及体外培养的研究

为了探讨人胚神经干细胞体外培养条件下的生物学特性,为其应用于临床治疗奠定基础.取胎龄16周的人流产胚胎,胰酶消化结合机械法分离成单细胞悬液,以2×106个细胞/mL接种到含hEGF和h-bFGF的DMEM/F12、N2培养基进行体外培养;观察细胞生长情况,用10% FBS诱导神经干细胞球分化,免疫细胞化学鉴定. 结果显示从人胚大脑分离出的细胞经悬浮培养可以形成细胞球,表达Nestin蛋白.经诱导分化后具有表达神经元,神经胶质细胞的特异性抗原. 说明人胚神经干细胞在体外可以稳定生长,并能分化成为神经原及胶质细胞.     

一种高倍扩增细胞因子诱导杀伤细胞方法

CD3单克隆抗体分别以包被和悬浮的方式刺激人外周血单个核细胞,并以不同的基本培养基(RPMI-1640、IMDM、DMEM/F-12 (1:1)和M199)以及抗氧化剂(2-巯基乙醇和亚硒酸钠)培养细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞,分别测定细胞的扩增、表型(CD3CD56和CD25)和非MHC-限制性毒性(NK 毒性和LAK毒性).结果显示高浓度CD3单克隆抗体包被刺激方式的细胞集落和细胞扩增倍数大于悬浮刺激方式.基本培养基DMEM/F-12 (1:1)的扩增倍数优于其他3种基本培养基.抗氧化剂2-巯基乙醇和亚硒酸钠均有促进CD25抗原形成的作用,亚硒酸钠能提高CIK细胞的毒性,而2-巯基乙醇对于细胞的扩增有促进作用.建立了一种高倍扩增CIK细胞的方法,20 d细胞平均扩增倍数可以达到千倍以上.     

NVP-BEZ235诱导自噬在肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的 以Hep3B和PLC/PRF/5两种肝癌细胞为研究对象,探讨自噬在NVP-BEZ235中引起细胞凋亡的作用.方法 人类肝癌细胞Hep3B和PLC/PRF/5在含有10%FBS的DMEM培养基中进行培养,然后再进行细胞活性检测,用于Western blotting检测及线粒体膜电位(MMP)分析.结果 NVP-BEZ235能够有效增加LC3-Ⅱ的表达,并同时降低p62的表达,由此推断,NVP-BEZ235也能够诱导产生自噬,与Atg5的siRNA或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合应用时,肝癌细胞的生长被抑制.结论 NVP-BEZ235与Atg5的siRNA或者3-MA的联合应用能够促进细胞凋亡,NVP-BEZ235和自噬抑制剂的联合应用可为肝癌和其他恶性肿瘤临床治疗提供新的方法.     

骨髓间充质细胞联合细胞外基质成血管能力的研究

选用8周龄的雄性SD大鼠,处死后分离骨髓单个核细胞,用DMEM培养基和细胞外基质进行培养,观察细胞集落.选用8周龄雌性SD大鼠,结扎一侧股动脉引起下肢缺血,随机分为4组,A组进行细胞外基质联合细胞移植;B组进行单纯的细胞移植;C组进行细胞外基质移植;D组进行生理盐水注射;2周后测定大鼠下肢活动能力、小血管数目、Y染色体SRY基因量评估细胞外基质和细胞联合移植的效果.在细胞外基质中培养得到的细胞集落形态学上呈血岛样外观,而在普通DMEM培养基中得到的细胞集落呈铺路石样外观.进行细胞移植的动物中,A组大鼠跛行距离最长(P<0.05);小血管密度最高(P<0.05);Y染色体SRY的DNA量最高(P<0.05).     

两歧双歧杆菌固态培养的研究

两歧双歧杆菌 (Bifidobacteriumbifidum )ATCC2 95 2 1在含质量分数为 2 0 %惰性固态物质 (纤维素 )的MRS固态培养基中 ,若营养物的质量分数比液体培养基中营养物的质量分数提高 1倍 ,则菌体生长量也相应提高 1倍 (达 1 9× 10 8cfu/ g) .经过 3种固态基质作比较后 ,发现大豆渣和麦麸为佳 ,前者的含菌量最高达 5 4×10 8cfu/ g ,后者含菌量最高可达 2 3× 10 8cfu/ g .通过加入可中和所产酸量的CaCO3 ,并用缓冲液代替水配制培养基 ,结果发现用pH6 8的缓冲液配制培养基 ,培养后含菌量可达 16× 10 8cfu/g ,比对照的液体培养提高了11 4倍 .通过“液 固先后培养”并测定其中活菌数的变化 ,进一步证明了固态培养的优越性 .     

血清浓度对MDCK细胞低密度培养的影响研究

目的:确定血清浓度对犬肾细胞(MDCK)培养的影响.方法:在DMEM培养基中添加了2%、5%、8%、10%的新生牛血清,以10个/cm2密度接种MDCK细胞培养后通过细胞集落计数,计算贴壁率.结果:不同血清浓度培养MDCK细胞均能形成明显的细胞集落,贴壁率分别为23.15%、43.17%、61.00%、74.89%.结论:血清浓度对MDCK细胞集落的形成及细胞贴壁率有明显的影响,8%和10%血清的贴壁率较高,适合该细胞培养.     

福司可林(FSK88)对HL60细胞抑增殖促分化的实验研究

研究了诱导分化剂FSK88对人白血病HL60细胞的抗肿瘤作用，将HL60细胞培养在含不同浓度FSK88的RPMI1640培养液中，测定FSK88对HL60细胞生长曲线、NBT阳性率、ANAE酶活性的影响，探讨了FSK88对HL60细胞裸鼠异种移植瘤体内抗肿瘤作用。结果表明，FSK88能诱导HL670细胞向单核／巨噬细胞方向分化，表现为生长抑制，NBT还原能力提高，酸性非特异性酯酶（ANAE）活性增加；流式细胞仪检测表明FSK88对HL60的诱导作用与细胞所处细胞周期的变化无明显相关性；FSK88可以有效的抑制白血病HL60的致瘤力，可见FSK88能抑制人白血病细胞的生长，促使其进入终末分化及凋亡。     

神经球内神经干/祖细胞活性与代谢研究

为定量研究静态无血清悬浮培养的神经球内神经干/祖细胞的活性及代谢情况,取孕14 d的小鼠胚胎,从海马脑组织分离出神经干/祖细胞,培养过程中跟踪测定神经球直径的分布变化,利用CCK-8法测定活细胞数,同时对培养上清进行葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和氨的定量测定,并对相关细胞代谢动力学参数进行计算和分析.结果表明在培养过程中,神经球内细胞活性及细胞代谢均随着球直径的增加而减弱.在神经球平均直径为100 μm左右,培养基中葡萄糖、谷氨酰胺浓度分别为36.38 mmol/L和1.33 mmol/L时,球心细胞生长开始受到抑制;而当神经球直径主体分布于100～150 μm,培养基中葡萄糖浓度为31.11 mmol/L、谷氨酰胺浓度为1.15 mmol/L时,神经球内部细胞死亡数开始大于增殖数,同时细胞代谢降低到很低水平.表明随着神经球直径的增加而造成的传质困难对于其内部细胞的活性和代谢有重要影响.     

茎瘤芥(榨菜)子叶及带下胚轴茎段离体培养研究

以茎瘤芥永安小叶品种无菌苗子叶和带下胚轴茎段为材料,初步探索愈伤组织诱导、分化及再生植株生根培养.结果表明,子叶与叶柄的切口处极易产生愈伤组织,在MS+1.0mg·L-16-BA+0.2mg·L~(-1)NAA培养基中,愈伤组织分化率达到64%,其不定芽量最大;1/2MS+0.6mg·L~(-1)IBA培养基对不定根形成最为有利,生根率可达到96%.     

表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养

采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养,细胞生长明显优于有血清培养(DMEM FBS(φPRS=0．05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养,最大细胞密度可分别提高16．7％和40%。同时,在培养的96h,蛋白的表达水平比有血清培养提高了18．7%,SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50％。     

厚皮甜瓜黄河蜜植株再生研究

利用厚皮甜瓜黄河蜜3号子叶及下胚轴进行植株再生实验研究.结果表明:子叶不定芽分化率高于下胚轴,适合子叶不定芽分化的培养基为MS 6-BA1.5 mg/L NAA0.2 mg/L,分化率为60%,每个外植体平均分化芽数9.4个.适合下胚轴不定芽分化的培养基是MS 6-BA 1.75 mg/L NAA0.1 mg/L,分化率为9%,每个外植体平均分化芽数8.5个.对不定芽黑暗处理2天后用1/2 MS IAA0.2 mg/L诱导生根,生根率达91.12%,平均根数为12条.200 mg/L的NAA对无根苗处理20 min后移入1/2河沙 1/2蛭石基质中,1/2 MS营养液浇灌,试管外生根率为52%.     

黑色素瘤模型的建立与评价

为了快速有效地进行在体药物筛选,研究了以小鼠黑色素实体瘤组织中的原代细胞构建黑色素瘤模型的方法。从荷黑色素瘤小鼠的组织中提取原代肿瘤细胞,与体外培养的B16细胞通过皮下注射分别植入两组C57BL/6小鼠体内,考察两组小鼠肿瘤显现时间和生长速度。结果表明：当接种浓度为5.0×10⁶个/ mL、每只0.2 mL时,小鼠黑色素瘤原代细胞和体外培养的B16细胞成瘤率分别为100%和80%,且小鼠右前肢肿瘤(大小约4 mm³）出现时间分别约在第3天和第8天。紫杉醇对两种模型的初步评价显示,与体外培养的B16细胞模型相比,原代B16细胞模型是体内筛选和评价特定化合物抗肿瘤活性的一种可行而有效的方法,成瘤时间较短、成瘤率高,所得实验数据误差也较小。模型的建立为相关药物评价模型的开发研究提供了一条可借鉴的新途径。     

三叶半夏细胞悬浮培养和植株再生的研究

三叶半夏幼嫩叶片在MS+2,4-D2.0mg/L+BA0.5mg/L培养基上一个月内可以诱导出愈伤组织.取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮振荡培养,经3～4次继代培养得到分散性好的细胞悬浮系.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养12～16d达对数生长期,细胞鲜重在第18d达到最大值.悬浮液pH值的变化在对数生长期同生长曲线一致.将细胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MS+NAA0.2mg/L+BA1.0mg/L分化培养基上,40d分化出小植株.     

坛紫菜叶状体营养细胞的固体培养

本文报道用固体培养法培养坛紫菜叶状体营养细胞试验的结果。试验表明，坛紫菜叶状体细胞可以在半固态至固态琼脂培养基上良好地存活、分裂和再生，因此用固体培养法进行其细胞培养的有关研究是可行的。细胞在半固态培养基中的分裂再生情况与在液培中完全一致。在固体培养基表面培养情况亦基本相似，单离细胞分裂与再生形成的产物亦有正常苗、畸形苗、细胞团、丝状体等，但产生的细胞团较多，无精子囊器形成；再生苗可在培养基上持续缓慢地生长，丝状体可正常地快速生长并发育成熟；观察到部分细胞团经培养发展成愈伤组织，后者可分化长出叶状体；个别单离细胞经培养直接萌发成壳孢子囊枝。本研究还观察了Ｃａ￣（＋＋）浓度对细胞再生与发育情况的影响，结果表明Ｃａ￣（＋＋）浓度低的培养基上长出的叶状体多、丝状体少、并且生长差、发育慢。