抗EV71多克隆抗体偶联的靶向磁性纳米颗粒对病毒的特异性富集

 手足口病是幼儿和儿童常见的一种传染病,严重时会引起患者死亡。EV71病毒（人肠道病毒71型）是引起手足口病的一种主要病毒。为寻求一条快速诊断EV71病毒感染的新方法,将兔抗EV71多克隆抗体,通过戊二醛交联法偶联在氨基硅烷修饰的磁性纳米颗粒表面,获得抗EV71多克隆抗体偶联的靶向磁性纳米颗粒用于EV71病毒的检测。通过酶联免疫、免疫荧光方法证实了抗体耦合在磁性纳米颗粒表面,并通过BCA法测得其耦合的效率为94.1%。采用抗体偶联的磁性纳米颗粒对EV71病毒液中的病毒抗原进行吸附,通过ELISA法检测上清液中病毒含量的变化,并对磁性纳米颗粒表面吸附的病毒进行免疫荧光和核酸PCR检测,证明了抗体偶联的磁性纳米颗粒可以与病毒抗原特异性结合。由于该纳米颗粒同时具有抗体的靶向性和磁性颗粒的磁响应性,对病毒抗原有较好的特异性吸附能力,可以用于低浓度大样本的EV71病毒抗原的富集检测。利用抗体偶联的靶向磁性纳米颗粒,同时具有可在病毒感染的细胞周围特异性富集和磁颗粒可在交变磁场下感应升温的双重功能,将其作为磁感应热疗的靶向介质,有望研制出病毒感染性疾病磁感应热疗的靶向介质,为靶向热疗病毒感染性疾病提供新的尝试。     

2011年宜春市218例临床疑似重症手足口病病原学检测

目的对2011年宜春市各医院疑似重症手足口病病例样本进行实验室检测分析,从而为本地区手足口病的综合防治提供参考依据.方法采用real-time RT-PCR方法,对宜春市各医院采集的218份疑似重症手足口病患者的咽拭子、疱疹液、粪便、肛拭样本,进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒 A16(COX16)以及肠道病毒通用型(EV)的核酸检测.结果218份不同类型样本中,EV71病毒114例、COX16病毒4例、EV病毒20例.阳性率分别为52.29%、1.83%、9.17%.病例人群男性高于女性(1.38:1),1~2岁年龄段病例数最多,4~6月份为本年度重症报告病例最多的月份.结论2011年宜春市手足口病引起重症病例的病毒株主要以EV71型为主,应特别加强对EV71引起的重症病例的监测,提前落实抢救措施,防止病情恶化导致死亡     

“绿色奥运,绿色行动”系列报道之十五 预防肠道病原体需改进公厕的卫生管理

今年手足口病在全国范围疫情的报道,让我们看到了肠道病毒EV71的传播对儿童的危害。这是一种伤害力很强的病毒。笔者手中有一本1994年德国出版的《医学微生物》教科书,其中就有对EV71病毒致病性的记载。书中所列的病症有:手足口疹、无菌性脑膜炎、脑炎与瘫痪。这一病毒的致命之处在于:它能通过扁桃体或肠壁细胞     

筛选EV713C蛋白酶切割的宿主细胞蛋白

肠道病毒EV71 型是引起儿童手足口病的主要病原体,3C 是其编码的蛋白酶之一.3C 在切割病毒前体蛋白为成熟蛋白的同时,切割一些具有重要功能的细胞蛋白,影响细胞的生理功能. 为进一步了解EV71 与宿主的关系,明确EV71 致病机制的细节,在前期以3C 蛋白为诱饵开展的酵母双杂交工作的基础上,选取了5 种细胞蛋白,分析其是否是3C 蛋白可能的切割底物. 发现ZMYM2 蛋白可以被3C 切割;这一切割效应是依赖3C 蛋白酶活性的特异性切割,无需RNA 介导. 上述发现为进一步揭示EV71 致病机制提供了线索.     

外泌体包裹的miR-19b抑制EV71复制的影响

[目的]探讨外泌体包裹的miR-19b对EV71病毒复制的影响,为EV71病毒的miRNA防治药物的开发提供参考.[方法]将游离的miR-19b-cy3.5分子和转染miR-19b-cy3.5的HT29细胞分泌的外泌体分别处理T98G细胞,观察进入细胞的效率;分别提取未处理的、转染mimic-n.c.和转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体,并给予T98G细胞孵育后,检测细胞内miR-19b的表达;分别以60 mg/L转染mimic-n.c.的HT29细胞分泌的外泌体、60 mg/L和40 mg/L转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体孵育T98G细胞并感染EV71病毒,检测病毒RNA载量;将携带包裹的miR-19b-cy3.5的HT29细胞来源的外泌体,通过尾静脉注射小鼠检测miR-19b在小鼠各个器官中的表达.[结果] miR-19b-cy3.5能够通过外泌体的形式进入T98G细胞中,而游离的miR-19b-cy3.5无法进入细胞;转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体在处理T98G细胞后,胞内miR-19b高表达,同时,外泌体处理后的T98G细胞中EV71病毒R...     

EV71动物模型研究进展

人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)能够引起儿童的手足口病,并且具有嗜神经毒性。该病症在全球范围内的传播逐渐引起科研和医务人员的重视。动物模型是研究传染病的重要手段,现阶段对EV71易感动物模型研究有了多方面成果。本文对EV71动物模型近期的研究进行整理总结,并对后续研究方向进行展望。     

抗击手足口病

5月6日下午,安徽省阜阳市人民医院肠道病毒EV71感染重症监护室,金色的阳光透过窗纱洒在5名危重患儿的身上。他们静静地躺在病床上,与负责救治他们的医护专家一起,和体内的肠道病毒EV71进行生与死的较量。这一非法定传染病毒已在祖国的大江南北夺走几十个鲜活的生命,使不少家庭和幼儿生活在恐惧之中,正是这样,一场以卫生部长为首的抗击手足口病的战斗正在打响。     

培养细胞体系中槐定碱抗EV71病毒的作用

探究槐定碱抗EV71病毒的作用,为防治手足口病提供线索。在体外培养的Vero细胞体系中加入槐定碱,用MTT法检测其细胞毒性;在病毒感染的不同时期用槐定碱处理,用MTT法检测细胞存活率、细胞病变等指标,表征其对EV71病毒吸附、穿入的抑制作用及直接杀灭作用;用RT-PCR法检测其对于病毒RNA复制的抑制作用。(1)槐定碱具有一定细胞毒性,其CC50为1.414mg/m L;(2)能够抑制病毒对Vero细胞的感染,其IC50=0.354mg/m L;(3)其机制可能是抑制病毒的吸附和RNA复制,但对病毒穿入的抑制作用较弱。槐定碱可抑制病毒吸附和病毒增殖,在病毒感染前后用药效果都较好,且有效浓度远小于其CC50值,作为防治手足口病药物的开发潜力较大。     

手足口病预防知识

<正>手足口病是由肠道病毒引起的传染病,引发手足口病的肠道病毒有20多种(型),其中以柯萨奇病毒A16型(Cox A16)和肠道病毒71型(EV 71)最为常见。多发生于5岁以下儿童,表现口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡,多数患儿一周左右自愈,少数     

肠道病毒71型SHZH03株VP1基因在毕赤酵母中的表达

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增得到肠道病毒71型(EV71SHZH03)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒VP1/pPIC9K,转化Pichia pastoris 酵母宿主菌Gs115,以Myc-Tag多克隆抗体作为一抗,利用双层滤膜法筛选酵母转化子.甲醇诱导表达.SDS-PAGE分析显示:表达产物的分子量约为30000,与天然VP1大小一致,ELISA实验表明,表达上清液可与EV71患者急性感染期血清呈阳性反应,表明重组蛋白VP1具有免疫原性.     

Molecular epidemiology and evolution of worldwide enterovirus 71 strains isolated from 1970 to 2004

Human enterovirus 71 （EV71） is one of the major etiological agents of the hand-foot-and-mouth disease （HFMD） that often causes severe neurological complications. Recently, its outbreaks mainly take place in the torrid zone of the Asia-Pacific region. To study the evolution and genetic variability, we collected 532 EV71 strains with almost complete or complete VP1 sequences （891 nt） isolated worldwide from 1970 to 2004. The pairwise homologies and genetic distances were analyzed. Most strains belong to previously identified genotype B and C. However, a unique strain R13223-1ND-01 appears not to fall into current three genotypes （A, B and C）, and probably represents a new genotype D. Some orphan strains were observed in the genotypes B and C, and their significance in the EV71 evolution was discussed. Moreover, there is a significant co-variance of 6 discrete positions on VP1 （amino acid 43, 58, 164, 184, 240 and 249）. This high co-variability is tightly related with the subgenotypes.     

说说手足口病

小玲玲:前不久,安徽省阜阳市发生了儿童感染肠道病毒EV71疫情。您能给我们介绍一下这种肠道病毒吗?老博士:肠道病毒EV71感染,它的临床表现主要是手足口病。这种病是在手足和口腔里面感染的,绝大多数都是以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征,一小部分     

手足口病误诊为疱疹性咽峡炎2例的分析

手足口病是由肠道病毒（以柯萨A组16型（coxA16）,肠道病毒71型（EV71）多见）引起的急性传染病,多发生于学龄前儿童,尤以3岁以下年龄组发病率最高。病人和隐性感染者均为传染源,主要通过消化道,呼吸道和密切接触等途径传播。主要症状表现为手、足、口腔等部位的斑疹、疱疹。少数病例可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等,多由EV71感染引起,致死原因主要为脑干脑炎及神经源性肺水肿。同时,对误诊病例报告进行了分析。     

肠道病毒71型SHZH03株VP2和VP4 基因的进化分析

目的:对SHZH03株、SHZH98株、亚洲流行株(中国台湾98年、日本99年及新加坡2000和2001年流行株等)以及一部分欧洲流行株等的VP2和VP4基因进行了遗传进化分析.方法:在对肠道病毒71型中国(深圳)分离株SHZH03进行全基因组序列测定的基础上,利用DNA-STAR软件对VP2和VP4基因进行遗传进化分析.结果:SHZH03和SHZH98与亚洲流行株中的中国台湾98流行株、日本99流行株的遗传距离较近,而与新加坡2000和2001年流行株的遗传距离较远;SHZH03株与一些欧洲流行株有较大的差异.结论:中国深圳地区流行的肠道病毒71型有可能来源于中国台湾1998年EV71大规模流行时的毒株.     

手足口病流行趋势及目标人群健康教育探析

目的 了解手足口病流行趋势,为手足口病防控措施提供可行性依据.方法 通过疾病控制中心获得所在区手足口病发病数据,进行流行病学分析.结果 手足口病发病多以3岁以下儿童为主,男女性别比为1.53:1.2011年检测临床诊断手足口病例112例,其中EV71核酸阳性61例,阳性率为54.46%,3例为CoxA16,阳性率为2.60%,其他肠道病毒11例,阳性率为10.26%.2012年检测临床诊断手足口病例80例,其中EV71核酸阳性8例,阳性率为10.01%,26例CoxA16,阳性率33.06%,其他肠道病毒26例,阳性率为32.50%.2011年和2012年病例发病主要集中在5~9月份,以夏秋季突出.结论 根据手足口病流行趋势,加强对目标人群健康教育是防控手足口病的有效措施.     

自适应变系数EV模型中系数参数的估计

从一般情况下的变系数EV模型入手来讨论一种新型的自适应变系数EV模型,主要是介绍了这种新型模型中的系数参数的估计,进而讨论了参数估计的相关性质.对估计中权函数的性质,估计的渐近性进行了讨论并给出了严格的证明.     

自适应变系数EV模型系数函数中β的估计

从一般情况下的自适应变系数EV模型入手,来讨论一种特殊形式的自适应变系数EV模型,然后利用MATLAB将一步迭代估计出来的结果进行了检验.     

考虑车主意愿和成本的车网能量互动博弈模型

针对电动汽车（Electric Vehicle， EV）在参与需求响应时对用户意愿考量不足，配网与EV利益分配不公的问题，提出了考虑用户响应成本及意愿的V2G能量交互策略. 对EV用户在交互中产生的充电时间延迟和电池劣化成本进行了量化与分析，并使得EV车主能够通过指定其成本系数的方式来表达他们的互动意愿，从而获得合理的补偿.随后，建立配电系统运营商（Distribution System Operator， DSO）和集群EV之间的双层斯托伯格（Stackelberg）博弈模型，并根据Karush-Kuhn-Tucker条件，将其转换为一个单层混合整数二阶锥规划问题.基于IEEE 33节点系统验证了模型的有效性，实现了EV车主和DSO之间的双赢.     

A model-based driving cycle test procedure of electric vehicle batteries

The battery test methods are the key issues to investigate the energy-storage characteristics and dynamic characteristics of electric vehicle （EV） batteries.In this paper,the research advances of existing battery test methods as well as driving cycles are reviewed.An electric vehicle model that consists of EV dynamics model,battery model and electric motor model is built.The dynamic characteristics of the battery in frequency domain are analyzed.Based on the EV model and the frequency domain characteristics of the battery,a driving cycle test procedure of EV battery is proposed.The battery test procedure is able to reflect the real-world characteristics of EV batteries,and can be used as a universal EV battery test method.     

中药佩兰体外抗病毒有效部位筛选

目的:在细胞水平下,通过抗病毒实验,筛选佩兰最佳提取方法及敏感病毒株,并确定分离纯化效果最佳的大孔吸附树脂型号,为进一步分离非挥发油类抗病毒成分奠定基础.方法:先通过水提法、水提醇沉法、醇提法、醇提水沉法、乙酸乙酯提取法获得粗提物,在细胞水平下,由显微镜观察细胞病变效应(CPE),噻唑蓝(MTT)法染色,酶标仪测定吸光度值,通过比较治疗指数(TI),对肠道EV-71病毒、单纯疱疹Ⅰ型病毒、柯萨奇病毒B5、呼吸道合胞病毒进行体外抗病毒筛选;其次通过大孔吸附树脂分离法,以蒸馏水、体积分数为25%、50%、75%的乙醇作为洗脱剂冲洗树脂柱,筛选分离纯化效果最好的大孔吸附树脂.结果:经初步筛选,水提醇沉法中的沉淀对肠道EV-71病的抑制作用最强,TI为84.631;通过大孔吸附树脂法得,AB-8弱极性大孔吸附树脂对佩兰的分离纯化效果最好,其中体积分数为25%乙醇洗脱部位的T1值可达127.001.结论:体积分数为25%乙醇洗脱部位是佩兰抑制肠道EV-71病毒的最佳有效部位.