pEgr1-Trail重组质粒联合电离辐射对MCF-7细胞杀伤效应的实验研究

目的研究p Egr1-Trail重组质粒联合电离辐射对MCF-7细胞的杀伤效应,为增强肿瘤放疗效果提供实验证据.方法应用Annexin V-EGFP/PI双染法检测细胞凋亡;应用酶标仪检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期.结果不同处理组作用MCF-7细胞后24 h、不同剂量X射线照射后24 h后,各处理组MCF-7细胞的生长抑制率呈上升态势,生长抑制由弱到强的顺序为:2.0 Gy,p Egr1-Trail+0.5 Gy,5.0 Gy,p Egr1-Trail+1.0 Gy,p Egr1-Trail+2.0 Gy,Egr1-Trail+5.0 Gy.各处理组联合2.0 Gy X射线照射后6 h,细胞凋亡率开始上升,48 h达高峰,其中p Egr1-Trail+2.0 Gy组与其他各处理组比较差异具有统计学意义,且细胞凋亡最为显著(P0.05).在细胞周期方面,2.0 Gy X射线照后6 h各处理组S期细胞百分数呈现上升趋势,24 h达高峰;照后24 h,G_2+M期细胞百分数开始上升,且各处理组比较差异均具有统计学意义(P0.05);照后48 h,G_2+M期细胞百分数达到最高,依旧是p Egr1-Trail+2.0 Gy组上升最显著.结论 p Egr1-Trail重组质粒联合电离辐射作用于肿瘤细胞表现出协同杀伤效应,促凋亡作用强于单独X射照射组或p Egr1-Trail基因干预组.     

重组质粒pEgr-1-TRAIL辐射诱导乳腺癌细胞效应的实验研究

目的将具有辐射诱导表达特性的重组质粒p Egr-1-TRAIL转入乳腺癌MCF-7细胞中,诱导肿瘤杀伤基因TRAIL的表达,实现辐射和基因对MCF-7细胞的双重杀伤效应.方法用ELISA法检测不同剂量X射线诱导TRAIL表达的量效关系及2 Gy X射线照射后不同时间TRAIL的表达;用流式细胞仪检测不同处理组MCF-7细胞早期凋亡情况.结果不同剂量X射线照射转染p Egr-1-TRAIL重组质粒的乳腺癌细胞MCF-7,TRAIL表达量明显高于假照组(P0.001~0.05),其中5 Gy X射线照后表达量最高,TRAIL表达量为假照组的5.1倍.2 Gy X射线照射后4 h,TRAIL表达量明显升高(P0.05),并随时间延长逐渐增加,照射后32 h达峰值,表达量为照射前的4.6倍.MCF-7-p Egr-1-TRAIL/0 Gy组早期凋亡细胞百分数较MCF-7/0 Gy和MCF-7-p3.1Egr/0 Gy组明显增加(P0.01),随着照射剂量的增加,MCF-7-p Egr-1-TRAIL/5 Gy组细胞早期凋亡率与其他处理组比较均存在统计学意义(P0.001~0.05),MCF-7/0 Gy组细胞生长最快,而MCF-7-p Egr-1-TRAIL/8 Gy组细胞生长最慢.结论乳腺癌细胞转染p Egr-1-TRAIL重组表达质粒联合X射线照射能够增加MCF-7细胞凋亡,抑制其生长.     

电离辐射声效应的生物效应

本文研究了电离辐射声效应的生物效应,结果表明,电离辐射通过生物体时产生的瞬时热沉积和声瞬变,在辐射生物效应的机制中起重要作用。     

超声波激活血卟啉抗肿瘤效应机理研究

研究了活性净化剂组氨酸和甘露醇对超声波激活血卟啉杀伤人体黑色素瘤细胞LiBr的抑制作用，探讨了声动力学方法抗肿瘤效应的机理，实验结果表明，加强氨酸时，单纯超声对瘤细胞LiBr杀伤率部分被抑制，而超声加血卟啉抗肿瘤效应则几乎全被抑制。甘露醇对超声和超声加血卟啉对细胞杀伤效应均无影响，这说明单线态氧是杀伤肿瘤细胞的主要因素。     

基因重组质粒稳定性与苯丙氨酸发酵的研究

本研究应用具有苯丙氨酸生产基因 pheA~(FR)、aroF~(FR)、CI_(857) 的质粒 pSY130～14和质粒 pS Y16,重组构建了具有苯丙氨酸生产基因系统的新质粒 pSY200-14。然后,使其转化到大肠菌 AT2471中,育成了基因重组菌株 AT2471/pSY200-14。试验表明,新菌株质粒稳定性比原菌株有较大的提高。在2. 5升通气搅拌罐进行苯丙氨酸发酵试验,在搅拌转速850rpm、通气速率1. 0VVM,38. 5℃和 pH7. 0的条件下,发酵48小时苯丙氨酸生成量达14. 2g/L,比原菌株 AT2471/pSY130-14增产11. 8%。     

AS-mCLB1重组质粒联合多西紫杉醇抗Lewis肺癌细胞增殖活性的研究

pAS-mCLB1转染Lewis肺癌(LL/2)细胞72 h后,再加用多西紫杉醇(40 nmol/L)处理细胞,MTT法测定药物对LL/2细胞的体外杀伤作用.另将LL/2细胞接种C57BL/6小鼠,成瘤后分别用pAS-mCLB1、多西紫杉醇和pAS-mCLB1+多西紫杉醇处理动物,3天1次,共4次,观察肿瘤体内增殖情况,流式细胞仪检测动物肿瘤组织的细胞凋亡.结果显示：pAS-mCLB1联合多西紫杉醇可明显降低LL/2细胞体内、外增殖活性,同时促使肿瘤组织中细胞凋亡增加,两种方法具有协同作用.pAS-mCLB1显著增强多西紫杉醇抗肿瘤效应,此增强作用可能与pAS-mCLB1诱导肿瘤细胞凋亡,提高了多西紫杉醇的细胞毒作用有关.     

流感病毒RNA聚合酶重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的实验研究

目的:甲型流感病毒RNA聚合酶PB2-1亚基的基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化入受体菌,并优化转化条件,以建立其高效、快速的转化体系.方法:以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌,研究了氯化钙溶液浓度(25、50、75、100mmol/L),热休克温度(30、37、42、50℃),转化时间(15、30、60、75min)及热休克作用时间(60、80、100、120sec)对基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的影响.结果:氯化钙溶液浓度、转化时间、热休克温度、热休克作用时间对转化效率的影响有统计学意义(P<0.05).氯化钙溶液浓度和转化时间之间及热休克温度和热休克作用时间之间分别存在交互作用.结论:在本实验条件下,以75mmol/L氯化钙制备感受态细胞,转化60min,经42℃热休克作用120秒后直接涂平板选择转化子,可获得高效、快速的转化效果.     

重组质粒分子量不均一性的电镜观察

本文报道了用电镜对重组质粒的观察结果,该质粒是高度异质性的,它们轮廓长度呈现正态分布。     

基因工程中重组质粒的获得

用两种特异的限制性核酸内切酶同时酶切含目的基因的DNA片段与质粒,可以有效的降低或防止目的基因和质粒表达载体在酶切后的末端发生任意连接;双抗生素间接平板筛选,得到含有目的基因的质粒。     

骨髓间充质干细胞对放射性胸腺损伤的修复作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对放射性胸腺损伤的修复作用.方法 C57BL/6小鼠行1.75Gy X 线全身照射,每周1次,连续4周.实验设正常对照组、照射组及照射+MSCs组,于末次照射后30、60、90 d称量各组小鼠体质量.取胸腺组织,计算胸腺质量指数,并通过组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用.结...     

低剂量电离辐射对Ⅰ型糖尿病小鼠血糖和肾功能影响的实验研究

目的采用25 m Gy低剂量X射线照射Ⅰ型糖尿病小鼠,检测不同时间点小鼠体质量、血糖和肾功能改变情况,为低剂量照射用于预防和治疗糖尿病提供实验证据.方法建立Ⅰ型糖尿病小鼠动物模型,用血糖仪和全自动生化监测仪测量血糖、检测尿液中尿肌酐及尿白蛋白的含量.结果Ⅰ型糖尿病小鼠体质量显著低于非糖尿病组(P0.05).给予剂量为25 m Gy X射线照射后,各组小鼠体质量无显著性差异.低剂量照射使糖尿病组小鼠血糖水平受到了抑制,显著低于糖尿病组(P0.05).照射后2~16周,糖尿病组尿肌酐、白蛋白含量与糖尿病照射组比较差异具有统计学意义(P0.05).结论低剂量照射对Ⅰ型糖尿病小鼠具有保护作用,能显著降低小鼠血糖水平,还能有效降低Ⅰ型糖尿病小鼠尿中白蛋白含量,促进尿肌酐的排出,从而缓解由糖尿病高血糖引起的肾脏损伤.     

乙型肝炎表面抗原基因DNA介导的体液免疫初步研究

用ＣＰＲ技术从纯化的乙型肝炎病毒核酸中扩增出ｐｅｒＳ２－Ｓ基因,并将其定向克隆于真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中,构建成带有完整的乙肝表面前Ｓ２抗原基因和Ｓ基因的重组质粒。重组质粒经酶切及部分序列分析鉴定后,瞬时转梁小鼠Ｌ细胞,ＥＬＩＳＡ法检测到培养上清液有ＨＢｓＡｇ表达。用纯化的重组质粒静脉、肌肉和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,首次接种质粒ＤＮＡ３周后,血清抗体开始出现,再次加强２周后,阳性     

常压下强电场电离辐射诱导种子变异方法的研究

通过改变强电场放电体系的物理参数,控制离子的能量和浓度,诱导种子变异,得到变异体,并检测其种子活力、酶活性、DNA、蛋白质的变化,得到性状变异谱,寻找诱导种子变异的规律和最佳方案.     

人endostatin基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中表达

为探讨转人血管内皮抑制基因（endostatin）在转染细胞中的表达，利用逆转录病毒载体构建人endostatin基因的重组质粒，通过脂质体（lipofectamine）将重组质粒导入包装细胞PA317,制备重组病毒液。用重组病毒液感染NIH3T3细胞，经G418筛选获得转入endostatin基因细胞株NIH3T3-endo。同法制备对照细胞株NIH3T3-pLncx.PCR检测NIH3T3-endo细胞基因组，在扩增产物中一份550bp人endostatin基因特异性片段，对照组为阴性。免疫组化测定示仅NIH3T3-endo细胞中有外源性endostatin蛋白的表达，说明人endostatin基因已被成功导入NIH3T3细胞，并获得稳定表达。     

化胃舒颗粒体内抗肿瘤作用的实验研究

摘要: 目的探讨化胃舒颗粒对小鼠移植性肿瘤的抑制作用。方法以S180 肉瘤和H22 肝癌作为实验瘤株,观察化胃 舒颗粒对S180 小鼠肉瘤的抑瘤率及对H22 肿瘤小鼠生存期的影响。采用小鼠移植性肿瘤S180 实体瘤模型,观察化胃舒 颗粒与环磷酰胺( CTX) 联用对S180 实体瘤小鼠的白细胞数及抑瘤率的影响。结果化胃舒颗粒能阻止S180 肿瘤生长, 小鼠肿瘤抑制率在30%以上; 化胃舒颗粒能明显延长H22 肿瘤小鼠的生存时间; 化胃舒颗粒能抑制由环磷酰胺( CTX) 引 起的S180 实体瘤小鼠血液中白细胞总数的减少,从而增强环磷酰胺( CTX) 的抑瘤作用。结论化胃舒颗粒对S180 肉瘤 和H22 肝癌荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤作用,与环磷酰胺( CTX) 合用有显著的减毒增效作用。     

彗星实验在抗肿瘤药物研究中的应用

回顾了近年来彗星实验在抗肿瘤药物研究中的应用，将各种以肿瘤细胞为基本实验材料的不同实验，从材料、致损伤荆以及具体操作方法等方面进行总结和比较，为今后在同类的肿瘤细胞实验中应用彗星实验技术时提供参考。