中国科学院昆明动物研究所动物毒素实验室

蛇毒是毒蛇分泌的一种毒液,由多种蛋白和多肽等活性物质组成,具有多种生物学活性。它们可以作用于人体的血液系统、神经系统和免疫系统。由于它们作用专一、活性高,被称为天然药物开发的宝库。自古就有人使用饭匙倩蛇毒做镇痛药,由于现代对蛇毒蛋白的深入研究,蛇毒研发的药物在临床诊断和治疗上的应用越来越广泛。     

卵黄抗体(IgY)及其在蛇伤治疗中的研究进展

传统抗蛇毒血清存在生产成本高、得率低、多种副作用等不足,使得寻找更理想的蛇毒解毒剂变得十分迫切;因卵黄抗体(Ig Y)在生产及中和蛇毒毒性等方面所体现的独特优势,成为开发新蛇毒解毒剂的重要研究对象。当前研究表明:Ig Y与哺乳动物Ig G功能相似但结构不同;Ig Y据有良好的耐压及耐酸碱稳定性,但对高温及蛋白水酶敏感;相比Ig G,Ig Y的生产成本低且具有非侵略性,其运用于免疫分析可降低假阳性率;产蛋鸡的免疫应答受抗原(剂量、分子量)、佐剂类型、免疫途径、免疫间隔等4种主要因素共同影响;纯化方法影响Ig Y纯度与活性;已制备出的多种抗蛇毒Ig Y对蛇毒引起的毒理作用有很好的中和效果。随着生物技术的快速发展,抗蛇毒Ig Y有望被开发成解毒剂、诊断试纸、亲和配体、口服制剂等,在蛇伤研究领域的应用前景广阔。
     

蛇毒抗肿瘤活性成分的研究进展

癌症严重威胁人类健康,寻找有效的抗癌药物与方法,彻底攻克癌症,是世界医学界重要的研究课题.目前治疗癌症常用的药物一般为合成药物,但合成药物在治疗中可能会出现明显的毒副作用,天然药物越来越受到人们的重视.天然毒素在生物学、医学及药学等许多领域有广阔的应用前景,其中蛇毒的研究最为广泛.蛇毒的成分复杂且毒性较大,但研究发现蛇毒的许多组分可以抑制肿瘤生长,对肿瘤的治疗有很好的临床效果.概述了近年来关于蛇毒抗肿瘤的活性成分及机制的研究进展.     

若干蛇毒蛋白的结构生物学研究

以本研究组较有研究特色的五种蛇毒蛋白家族为线索,简要综述了蛇毒金属蛋白酶、蛇毒丝氨酸蛋白酶、蛇毒crisp蛋白、蛇毒磷脂酶A2及蛇毒神经毒素等蛋白家族有关结构生物学研究的结果、现状及进展.强调了蛇毒蛋白研究中蛇毒糖蛋白的结构生物学研究、超高分辨率晶体学研究及与蛇毒蛋白相关的复合物结构生物学研究的重要性.     

天然植物中抗蛇毒活性成分的研究进展

对天然植物中抗蛇毒活性成分的分类、理化性质、结构及药理学活性等研究情况进行了综述。目前治疗蛇伤主要使用抗蛇毒血清,但存在一定的局限性,尤其在偏远山区不易获得抗蛇毒血清,通常采取天然植物进行替代治疗。为了弄清天然植物活性成分治疗蛇伤的机制,近些年来国内外开展了很多抗蛇毒天然植物活性成分的研究和探索。结果显示,从植物的水提取物和醇提取物中得到的活性成分如甾醇类、黄酮类、五环三帖类、植物单宁类、马兜铃酸类等对抗蛇毒均有很好的疗效;特别是植物单宁类是很好的蛋白质沉淀剂,它与蛇毒作用对蛇毒中酶的抑制效果尤为显著。大量抗蛇毒天然植物活性成分的结构与功能得以确定,其在临床医学等研究领域中有着重要的应用背景。随着作用机制等方面研究的不断深入,抗蛇毒活性成分的用途也将越来越广泛。     

天然植物中抗蛇毒活性成分的研究进展

对天然植物中抗蛇毒活性成分的分类、理化性质、结构及药理学活性等研究情况进行了综述。目前治疗蛇伤主要使用抗蛇毒血清,但存在一定的局限性,尤其在偏远山区不易获得抗蛇毒血清,通常采取天然植物进行替代治疗。为了弄清天然植物活性成分治疗蛇伤的机制,近些年来国内外开展了很多抗蛇毒天然植物活性成分的研究和探索。结果显示,从植物的水提取物和醇提取物中得到的活性成分如甾醇类、黄酮类、五环三帖类、植物单宁类、马兜铃酸类等对抗蛇毒均有很好的疗效;特别是植物单宁类是很好的蛋白质沉淀剂,它与蛇毒作用对蛇毒中酶的抑制效果尤为显著。大量抗蛇毒天然植物活性成分的结构与功能得以确定,其在临床医学等研究领域中有着重要的应用背景。随着作用机制等方面研究的不断深入,抗蛇毒活性成分的用途也将越来越广泛。
     

蛇毒的研究进展及其在医药领域的应用

就国内外主要毒蛇的蛇毒组分、对凝血系统的影响及蛇毒在医药领域的应用进行了综述．蛇毒的化学成分十分复杂,主要包括酶、神经毒性多肽、神经生长因子、膜活性多肽及其他生物活性肽,其中酶类包含多种与凝血系统、纤溶系统相关的成分．蛇毒在医药领域具有非常重要的作用,主要有促凝作用、溶栓作用、镇痛作用、降压作用和抗肿瘤作用．     

蛇毒中生物活性酶的研究进展

蛇毒是一类包含蛋白质、多肽和金属离子等成份的混合物.蛇毒中的多种生物活性酶决定了其功能的多样性,例如凝血、溶栓、止痛和抗肿瘤作用等.然而,由于蛇粗毒免疫原性强和副作用多等缺点,其临床应用受到了一定的限制.随着新技术和分离纯化方法的发展,越来越多蛇毒产品的新功能被开发出来.针对蛇毒成分的分离纯化技术和分析鉴定方法,对研究...     

蛇毒神经毒素和肌肉毒素研究进展

对蛇毒中神经毒素和肌肉毒素的分类、理化性质、结构及药理学活性进行了综述。当前研究表明,蛇毒神经毒素可分为3类:突触前神经毒素、突触后神经毒素和类神经毒素;前两者主要抑制运动终板处的神经肌肉传导,造成肌肉麻痹和呼吸衰竭;而后者可以阻断平滑肌收缩和离子通道,表现出类神经毒活性。蛇毒肌肉毒素主要分为3类:响尾蛇毒素、心脏毒素和肌肉毒PLA2;它们主要表现为破坏肌细胞膜,降解肌纤维,造成肌肉坏死。近年来,大量的蛇毒神经毒素和肌肉毒素的结构与功能得以确定,其在临床医学及研究领域中将有着重要的应用前景。随着在作用机制等方面研究的不断深入,蛇毒神经毒素和肌肉毒素的用途也将越来越广泛。     

蛇毒神经毒素和肌肉毒素研究进展

对蛇毒中神经毒素和肌肉毒素的分类、理化性质、结构及药理学活性进行了综述。当前研究表明，蛇毒神经毒素可分为3类：突触前神经毒素、突触后神经毒素和类神经毒素；前两者主要抑制运动终板处的神经肌肉传导，造成肌肉麻痹和呼吸衰竭；而后者可以阻断平滑肌收缩和离子通道，表现出类神经毒活性。蛇毒肌肉毒素主要分为3类：响尾蛇毒素、心脏毒素和肌肉毒 PLA2；它们主要表现为破坏肌细胞膜，降解肌纤维，造成肌肉坏死。近年来，大量的蛇毒神经毒素和肌肉毒素的结构与功能得以确定，其在临床医学及研究领域中将有着重要的应用前景。随着在作用机制等方面研究的不断深入，蛇毒蛇毒毒素和肌肉毒素的用途也将越来越广泛。
     

垂盆草鲜用救治蛇伤优效性评价研究

目的:比较垂盆草鲜用/干用救治蛇伤药效差异,评价垂盆草鲜用优效性及可能机制.方法:首先采用蛇毒PLA_2酶体外抑制实验评价垂盆草鲜/干提取物活性差异;然后采用蛇毒腹腔注射后口服药物治疗法、蛇毒与药物预混合后腹腔注射法、蛇毒肌肉注射后药物浸泡法,评价垂盆草鲜汁浓缩物、干品水提物、干品醇提物对蛇伤治疗作用.结果:垂盆草鲜药体外抑制PLA_2(磷脂酶A2)活性优于干用各组.小鼠腹腔注射蛇毒后口服高剂量垂盆草提取物能够降低小鼠死亡率,且作用强于干品水提组和醇提组;蛇毒与药物预混合后腹腔注射,垂盆草鲜汁浓缩物高、低剂量均能显著延长小鼠生存时间、降低小鼠死亡率(P0.05),并显著优于水提组和醇提组;药物浸泡法救治蛇毒肌肉注射造成的蛇伤,鲜药汁浸泡组对动物生存状态、生存率、肌肉组织保护作用均有显著改善(P0.05),并优于水提液浸泡组.结论:垂盆草鲜用具有显著的抗蛇毒作用,且鲜用优于干用,其机制可能与降低蛇毒PLA_2酶活性、调节Ca~(2+)浓度保护凝血系统功能有关,其鲜用优效性与垂盆草鲜汁中保留更多生物活性成分有关.本研究提示垂盆草鲜用在蛇伤救治中更具时效性和优效性,具有重要的临床意义,符合传统中药蛇伤治疗"鲜者尤良"理念,也为其他中药鲜用提供了参考.     

蛇莓乙醇提取物抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶活性初探

【目的】初步探究蛇莓(Duchesnea indica)对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒蛋白水解酶的抑制作用。【方法】采用不同极性有机溶剂对蛇莓乙醇提取物进行分级萃取,结合硅胶薄层层析(TLC)进行分离,再利用气相色谱-质谱法(GCMS)对抑制蛋白水解酶作用最强的活性部位进行组分分析。【结果】乙酸乙酯萃取相具有较强的抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶活性;经硅胶TLC分离从中获得条带1、条带2、条带3和条带4共4个条带,且条带4的尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶抑制活性最强。通过GC-MS分析检测出条带4中存在15种成分,其中2,4-二叔丁基苯酚、正十六烷酸、十八烷酸、十六烷酸,2-羟基-1-(羟甲基)乙酯、硬脂酸-2-羟基-1-(羟甲基)乙酯和10,13-十八碳二炔酸甲酯可能与抑制蛇毒活性相关。【结论】蛇莓中存在抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶的功效组分,可以作为蛇伤药物开发的资源。     

黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】探究中草药黑老虎(Kadsura coccinea)醇提物对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中主要酶类的抑制作用。【方法】用体积分数为75%的乙醇溶液浸泡黑老虎后再进行超声波处理得到醇提物；通过体外酶活抑制实验分别检测醇提物对尖吻蝮蛇毒中磷脂酶A2、蛋白水解酶、透明质酸酶、类凝血酶的抑制作用。【结果】黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶具有明显的抑制作用。当蛇毒与醇提物的质量比分别为1∶100，1∶10和 1∶5时，后者能抑制蛇毒中98%磷脂酶A2活性、79%蛋白水解酶活性和65.14%透明质酸酶活性。同时，醇提物能够明显抑制尖吻蝮蛇毒水解纤维蛋白原和类凝血酶的活性。【结论】研究结果证实了黑老虎醇提物能有效抑制尖吻蝮蛇毒中的主要酶类，为深入研究黑老虎药材的抗蛇毒机制提供了理论依据。     

中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中主要酶类活性的抑制作用

【目的】探究中华眼镜蛇(Naja atra)血清对自身蛇毒中主要酶类活性的抑制作用。【方法】不同稀释倍数的中华眼镜蛇血清与蛇毒于37℃孵育30min后,检测蛇毒中磷脂酶A2、透明质酸酶、乙酰胆碱酯酶、L-氨基酸氧化酶和5′-核苷酸酶活性的变化情况。【结果】中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中磷脂酶A2和5′-核苷酸酶具有明显的抑制作用:当血清稀释2倍时,可以使蛇毒磷脂酶A2活性降低28.44%(p<0.001);当血清稀释8倍时,可以使蛇毒中5′-核苷酸酶活性活性降低23.44%(p<0.001)。中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中的透明质酸酶、乙酰胆碱酯酶和L-氨基酸氧化酶均无抑制作用。【结论】中华眼镜蛇血清中存在蛇毒磷脂酶A2和5′-核苷酸酶的抑制剂,该结果为后期蛇毒抑制剂的筛选提供了理论依据。     

尖吻蝮蛇三种毒蛋白氨基酸组成与N—末端分析

尖吻蝮蛇(Agkistrodon Acutus)三种毒蛋白的纯化及其性质的研究,徐洵等已经作详尽报道,它们都具有出血及致死作用,并兼有蛋白水解酶活性和纤溶活性等多种功能。但其出血活性不尽相同,如AaT—Ⅰ出血活性最大,还兼有肌溶作用,AaT—Ⅱ出血活性次之,而对心肌则有明显毒性作用,AaT—Ⅲ出血活性较小,主要为肌肉坏死作用。因此,研究这些毒蛋白的结构和功能的关系具有一定的理论和实践价值。分析比较它们在结构上的微观异     

苍蝇体内的抗菌肽和凝集素

苍蝇时时出没于肮脏之地,一只苍蝇身上通常带有病菌60多种,计有1700万个,多的可达5亿个,还带有很多病毒和寄生虫卵.苍蝇能传播伤寒、霍乱、痢疾等30多种疾病.然而苍蝇自身却不会被病原物感染并能大量繁殖其后代.其奥秘是由于苍蝇体内含有一种特殊的小分子蛋白质,称抗菌活性蛋白,就是这种抗菌活性蛋白成为蝇蛆本身各种病菌的克星.据测定,这种抗菌蛋白(抗菌肽)只需要万分之一的浓度就可杀死多种病菌,其效力超过青霉素.目前,欧美一些国家拨出专款予以研究,并已有新的突破.一位老者患有褥疮,曾使用各种抗菌素治疗均无效,一位美国医生利用苍蝇体内的抗菌肽很快医好了这位老人的褥疮.日本东京大学的研究人员发现,在苍蝇血液里存有能杀死真菌的活性蛋白.真菌可引起肺炎和皮肤病,迄今尚无既有效又无副作用的药物来治疗真菌感染引起的疾病,研究人员指     

石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒活性抑制作用的初步研究

【目的】寻找用于治疗尖吻蝮(Agkistrodon acutus)咬伤的中草药石柑子(Pothos chinensis)的药效实验证据。【方法】将制备所得石柑子水提物与尖吻蝮蛇毒混合孵育40min,检测混合液中蛇毒的磷脂酶A2活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性。【结果】石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒的磷脂酶A2活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性都有明显抑制作用。【结论】研究结果初步证实了石柑子对尖吻蝮咬伤具有治疗效果。     

石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒活性抑制作用的初步研究

【目的】寻找用于治疗尖吻蝮(Agkistrodon acutus)咬伤的中草药石柑子(Pothos chinensis)的药效实验证据。【方法】将制备所得石柑子水提物与尖吻蝮蛇毒混合孵育40min,检测混合液中蛇毒的磷脂酶 A2 活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性。【结果】石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒的磷脂酶 A2 活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性都有明显抑制作用。【结论】研究结果初步证实了石柑子对尖吻蝮咬伤具有治疗效果。
     

短尾蝮蛇毒金属蛋白酶和磷脂酶A_2的分离纯化及磷酸化修饰检测

利用阴离子层析、凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱从短尾蝮蛇毒中分离金属蛋白酶和磷脂酶A2,用蛋白印迹法检测两种组分的磷酸化修饰信号,结合LC-MS质谱鉴定并预测磷酸化修饰位点.结果表明,利用3种色谱法串联组合,最终分离获得两种条带单一且纯度高的短尾蝮蛇毒蛋白,经LC-MS质谱鉴定分别为蛇毒金属蛋白酶和磷脂酶A2.免疫印迹检测发现这两种蛇毒蛋白受到明显的磷酸化修饰,解析质谱图发现蛇毒金属蛋白酶有4个氨基酸位点受到潜在的磷酸化修饰(含1个丝氨酸和3个苏氨酸),磷脂酶A2仅有1个酪氨酸位点受到潜在的修饰.所得结果是磷酸化位点修饰抗体在蛇毒蛋白磷酸化修饰信号检测中的一次尝试,基于修饰位点的预测可为蛇毒蛋白功能受磷酸化修饰影响的研究提供基础.     

蛇毒及其基因克隆研究进展

对蛇素及其基因克隆研究进行了综述.蛇毒是一种天然蛋白质,蛇毒制剂可抗凝、去纤、溶 栓、扩血管、降血压、治疗神经性疾病和各种中、晚期癌症,是目前治疗疾病的理想药物.随着分子生 物学技术的迅猛发展,克隆蛇毒基因的方法也日臻成熟.通过基因工程技术使获得大量的高纯度的 蛇毒各组分成为可能.