中药材连翘道地性的分子物学探讨

运用随机扩增多态DNA（RAPD）方法研究了来自山西黎城、长治、平顺、壶关、屯留及安泽6个地区11个连翘地方栽培品系的亲缘关系，并用HPLC方法测定连翘主要指标成分-连翘甙含量的变异情况，RAPD分析结果表明，可分为A、B、C3个不同分支，连翘甙含量分析结果显示，2个遗传关系相近分支B和C的连翘甙含量差异不显著（t=0.44,p=0.67；平均连翘甙含量分别为0.53mg/g和0.67mg/g），这2个类群与第3个类群遗传差异大，连翘甙含量差异也很大（8.7mg/g），这种DNA分子多样性差异与化学指标成分含量差异的相关性说明连翘的遗传基础可能对化学指标成分的形成和积累有显著的影响，研究结果显示运用RAPD分析手段进行药材道地性研究具有可行性，研究结果不仅对于连翘的道地性研究和中药材GAP（Good Agricultural Practice)生产有一定的指导意义，而且对于其他道地中药材的研究也具有一定参考价值。     

文种金鱼系统发育地位的研究

利用随机扩增多态ＤＮＡ技术，通过增加ＲＡＰＤ位点数进一步分析了文种鱼的系统发育地位。将ＲＡＰＤ扩增结果进行统计学分析。应用ＮＴＳＹＳ软件ＵＰＧＭＡ法聚类构建了金鱼主要代表品种发育的分子系统树。     

笼养蓝孔雀两个种群的随机扩增多态DNA分析

利用随机扩增多态DNA技术对英吉利孔雀场和广州动物园两个蓝孔雀Pavocristatus种群进行了分析。用 2 3个随机引物 ,共获得 173和 15 7个扩增片段 ,多态率分别为 47 40 %和 9 5 5 %     

运用RAPD技术鉴定澳大利亚油橄榄品种的研究

由于早期引种记录的丢失、栽培品种的错命名和重命名、品种间的杂交等原因，澳洲现有的油橄榄品种形态变化较大，同名异物和同物异名现象比较普遍，使品种间的鉴定十分困难．运用随机扩增多态DNA技术，在筛选引物的基础上，分别对2种待鉴定样品和9个已知油橄榄品种的RAPD指纹进行比较分析，经UPG—MA聚类分析，在鉴定待测样品上取得了理想效果．     

南方鲇核基因组遗传结构的RAPD分析

为了解南方鲇核基因组的遗传结构,采用38个随机引物对长江上游及其支流中南方鲇的核基因组DNA进行随机扩增.岷江支流甄溪个体与金沙江个体的遗传距离为0.265,与岷江个体的遗传距离为0.208,明显高于金沙江个体与岷江个体的遗传距离0.095.实验结果显示,长江上游金沙江岷江及其支流甄溪水域中的南方鲇个体间核基因组存在RAPD遗传多样性.     

淤泥湖和梁子湖团头鲂遗传多样性的研究

采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对淤泥湖和梁子湖的团头鲂进行了遗传分析,在所用20个10碱基随机引物中,除OPP－1、OPP－13外,其余18个引物都能对团头鲂扩增出稳定的RAPD谱带,其中OPP－7、8、9、12、15、17等6个引物在团头鲂不同个体间扩增出多态性片段,用这些引物对团头鲂进行遗传分析,结果表明,淤泥湖团头鲂个体间的遗传相似度在0．9543－0．9718之间,平均值为0．9617;梁子湖团头鲂个体间的遗传相似度在0．9541－0．9622之间,平均值为0．9589;淤泥湖和梁子湖团头鲂个体间的遗传相似度在0．9395－0．9614之间,平均值为0．9541。     

基于RAPD分析用的佛手DNA的提取

对佛手DNA提取过程从不同方面进行了改良、优化，筛选出较理想的佛手DNA提取方法：每eppen—dorf管鲜样品取量为0．1g～0．25g，700μL提取缓冲液，加提取液前用液氮研磨，Vc(抗坏血酸)添加量为ω(Vc／鲜样)=0．1．该方法分离出DNA的A260／A280大于1．9，符合佛手RAPD(随机扩增多态DNA)分析要求，在佛手遗传多态性分析和品种分子鉴定中具有良好的应用前景。     

基于RAPD的藏马鸡亲缘关系的研究

为了测定7只笼养藏马鸡的亲缘关系,利用随机扩增多态DNA技术对7个个体进行了分析.选用53个10bp的随机引物对每只藏马鸡的基因组DNA进行扩增,获得14个有效引物,并得到226个扩增片段.根据聚类分析所得到的树状图,确定了7只藏马鸡的亲缘关系,证明RAPD可以用来鉴定亲缘关系.     

大鸨的随机扩增多态DNA分析与种内亲缘关系研究

利用随机扩增多态DNA技术对大鸨(Otis tarda)6个个体进行了随机扩增多态DNA分析,共筛选出有效随机引物14条,利用所得的随机引物对每只大鸨的基因组DNA进行扩增,共得到327个扩增片段,其中共有片段150个,根据聚类分析所得到的树状图确定了6只大鸨的亲缘关系.     

林木RAPD分析及实验条件的优化

随机扩增多态分子标记是目前林木遗传研究中使用最为广泛的一种分子标记,作者对影响ＲＡＰＤ实验的因素进行了分析和探讨,确定了一针对林木进行ＲＡＰＤ分析的实验程序。根据该程序,可以快速确定ＲＡＰＤ实验的理想条件,获得ＲＡＰＤ反应的良好重复性。     

高效液相色谱法测定蒜油中大蒜素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定蒜油中的大蒜素含量。方法:蒜油样品经正己烷溶液溶解,采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5um),以乙腈∶水∶四氢呋喃(68∶30∶2)为流动相,流速1.0mL/min,柱温:25℃,用紫外检测器在225nm波长下测定蒜油中大蒜素含量。结果:大蒜素在16.0～80.0ug/mL质量浓度范围内具有良好线性关系(r=0.9998),最低检出限为2ng/mL,在低、中、高3个水平下的加标回收率为98.4%～99.1%,相对标准偏差(RSD%)为0.29%～0.73%。结论:该方法前处理操作简便、灵敏度高、适用范围广。     

高效液相色谱法测复方痢菌净制剂中组分含量

采用高效液相色谱法测定复方痢菌净制剂中痢菌净和喹乙醇含量，该方法色谱条件为：ＨＹＰＥＲＳＩＬＯＤＳ色谱柱，甲醇（Ｖ）／水（Ｖ）（５０：５０）作流动相，注速０．８０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２６０ｎｍ，平均回收率痢菌净为９７．３２％，喹乙醇为９８．２９％，变异系数分别为１．３２％和０．９２％。     

Study on the flow injection micro-column pre-separation system coupled with high performance liquid chromatography for the determination of ecdysterone in traditional Chinese medicine

A flow injection (FI) micro-column system coupled with high performance liquid chromatography (HPLC) was proposed for the pre-separation and determination of active organic component (ecdysterone) in traditional Chinese medicine, Loulu. The factors influencing separation performance were investigated and optimized. Under the optimal conditions, the contents of ecdysterone in Loulu were determined by HPLC system using MeOH-H₂O (40∶60,V/V) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The calibration curve was linear in the range of 0.5∼100 mg/L of ecdysterone concentrations. The detection limit of the analyte was 0.11 μmol/L (3σ) with a precision of 0.38% RSD (n=7,c=10.0 mg/L). The average recovery of the method was 98.7%. The proposed method has been applied to determine ecdysterone in practical samples, and the determined values by both external standard method and standard addition method were in good agreement. Compared to the traditional solid extraction method, the system proposed has the advantages of simple procedure, good reproducibility, minimum volume requirement, reduction of matrix interference and low contamination risk. Foundation item: Supported by Education Ministy Foundation for Chinese Returned Scholars and Nature Science Foundation of Hubei province (98J054). Biography: SHUAI Qin (1963-), famale, Ph.D. Candidate.     

快速溶剂萃取-高效液相法测定茶叶中的多酚

茶多酚是茶叶中一类主要的化学成分.利用快速溶剂萃取的方法,提高样品的萃取效率、大大减少溶剂用量;同时应用高效液相色谱法测定茶多酚的含量,方法快速、准确,为进一步开发荼多酚的用途,提供了可靠的理论和实验依据.     

乌头基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

采用改进方法提取乌头基因组DNA,建立乌头RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出乌头RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括dNTPs 0.06 mmol·L-1,引物0.2μmol.μL-1,模板DNA40 ng,Taq酶1U,Mg2+ 4 mmol·L-1,10×buffer缓冲液2.5μl,其余部分为无菌超纯水。PCR扩增循环为95℃3 min,38 ℃1 min,72 ℃2min 1次循环;94 ℃=1 min,38℃1 min,72 ℃2 min,45次循环,最后72℃延伸10 min。     

α-苯乙胺的间接高效液相色谱拆分研究

以酰氯A对消旋体α-苯乙胺进行柱前衍生化处理,以正己烷和异丙醇混合体系为流动相,在自制的手性柱(DNB-PG CSP)上对其进行了对映体分离研究,考察了流动相配比对分离因子的影响,研究发现正己烷与异丙醇的体积比为98∶2时,取得了理想的分离效果,分离因子α值达1.26.     

六种蝗虫基因组DNA多态性的RAPD标记研究

运用随机扩增多态 DNA技术对斑翅蝗科 Oedipodidae中三属六种蝗虫基因组DNA进行了多态性比较 ,共扩增出 2 2条特异性片断 ,分子量大小为 650～ 1 990 bp之间 ,并根据各种间片段共享度构建了 UPG聚类关系图 .研究结果表明 ,大垫尖翅蝗和甘蒙尖翅蝗的片段共享度为 0 .375;红翅皱膝蝗和鼓翅皱膝蝗的片段共享度为 0 .2 86;亚洲小车蝗和黄胫小车蝗的片段共享度也为 0 .2 86     

HPLC测定不同方法提取野生藤茶中的二氢杨梅素

目的:建立高效液相色谱法测定野生藤茶中的二氢杨梅素含量,比较不同方法提取野生藤茶中二氢杨梅素含量的差异。方法:将野生藤茶粉碎后经甲醇溶液溶解超声后,采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 um),以甲醇∶水∶磷酸(25∶75∶0.1)为流动相,流速0.7 mL/min,柱温:25℃,用紫外检测器在292 nm波长下测定藤茶中二氢杨梅素含量。结果:二氢杨梅素在0.2¹.0 mg/mL质量浓度范围内具有良好线性关系(r=0.999 7),最低检出限为5 ng/mL,在低、中、高3个水平下的加标回收率为98.47%1.0 mg/mL质量浓度范围内具有良好线性关系(r=0.999 7),最低检出限为5 ng/mL,在低、中、高3个水平下的加标回收率为98.47%⁹9.14%,相对标准偏差(RSD%)为0.28%99.14%,相对标准偏差(RSD%)为0.28%⁰.49%。以甲醇超声提取法提取的野生藤茶中二氢杨梅素含量较高且杂质较少。结论:该方法前处理操作简便、灵敏度高、适用范围广。     

锁阳中儿茶素、根皮苷的提取及含量测定

建立了高效液相色谱-二极管阵列检测器联用测定中药锁阳中黄酮类化合物儿茶素、根皮苷的方法．用C18反相色谱柱梯度洗脱法成功分离了二者;以儿茶素和根皮苷含量总和为指标。以物料比、提取时间和提取次数为正交试验考察因素,优化了锁阳中黄酮的提取方法,得到的最佳提取条件为：28kHz、50℃条件下,以药材量7．5倍的甲醇超声提取3次,每次30min．该方法提取效果好。精密度、准确度和稳定性较好。用于11个不同产地锁阳样品的提取和含量测定。可作为锁阳及其制品中儿茶素和根皮苷等黄酮类化合物提取、分析及质量控制的方法．