RAPD技术及其在动物遗传育种研究中的应用

介绍了ＲＡＰＤ技术的原理、优缺点及其在确定品种（系）的遗传关系,品系纯度的鉴定,物种进化,基因定位,目标基因早期鉴别,遗传图谱的构建等在遗传育种研究中的应用。     

条件性基因敲除动物及其在毒理学研究领域的应用进展

动物实验是毒理学研究中的重要手段和核心内容。传统的基因敲除动物在胚胎致死性基因研究方面具有一定局限性。条件性基因敲除动物在克服传统基因敲除动物缺陷的情况下,为更深、更广的毒理学研究提供了重要工具。本文将从条件性基因敲除技术的原理及条件性基因敲除动物在毒理学领域中的应用进展两方面来进行综述。     

幼虫的起源

长期以来，幼虫和成虫是由同一基因物种进化而来这一假设与许多生物学现象有着难以调和的矛盾。本书的作者提出了一个大胆的猜想——决定幼虫形态的相关基因可能是由不同种类动物交互移植而来，并通过举例论证了这一幼虫基因移植论的可行性。     

畜牧业生产中的基因工程技术

本文主要概述了畜牧业生产中的基因工程技术。一类是将外源基因导入微生物或其他单细胞,用以生产蛋白类物质,当前主要研制各种动物生长激素。另一类是采用该技术成功地将外源基因导入了家畜的受精卵并能得以整合和表达,而且能稳定地遗传给后代。所产生的转基因家畜,改变原有遗传特性、提高生产性能。该技术的发展对畜牧业生产上的应用具有广阔的前景。     

动物的同源异型基因

同源异型基因对动物的发育有着重要的调控作用，从１８９４年首次观察到现象，至今已可以从分子水平上进行研究其行为；人们把其分成两大类：一类为Ａ－Ｐ型，一类非Ａ－Ｐ型同源异型片段一般具有很强的保守性，同源异型基因的表达具有自主性，方向性和衔接性。     

让有害基因保持沉默

千百万年来，生物的基因一直按某种规律表达自身的意图，生产生物体所需的蛋白质。自从人类基因组计划完成之后，人们对基因的运作已经有了相当的了解，控制基因自然成了人们关注的焦点。转基因、基因敲除等技术应运而生，这些技术尽管有效，但有些“生硬”。实际上，生物体本身有多种方式控制基因的表达，模仿生物的“技巧”应该是上乘之选，其中核酸干扰技术是既有效又“温柔”的一项新技术。     

STR基因扫描技术在亲子鉴定中的应用

1990年Landsteiner发现ABO血型，并被用于遗传学，为解决亲子鉴定问题奠定了一定的基础。但在过去进行亲子鉴定所检测的遗传标记多为基因产物，即蛋白质。随着分子生物学理论与技术的飞速发展，用于亲子鉴定的方法也由血型检验发展到了DNA技术，发生了从蛋白质到基因、从排除到肯定的质的飞跃。目前，用于法庭科学的DNA技术较多。本文采用新近发展起来的STR基因扫描分析技术，通过对TH01、TPOX、CSFlP0、D3S1358、VWA、FGA、D5S818、D13S317、D7S820等9个STR位点和Ameloginin基因的多态性同步检测分析，进行了2例亲子鉴定，来说明基因扫描技术在亲子鉴定中的作用。     

绵羊RARG基因组织表达规律的研究

根据GenBank中报道的绵羊视黄酸受体γ（retinoic acid receptor—gamma，RARC）基因mRNA序列，设计特异性引物，利用Real—time PCR技术对绵羊RARG基因的组织表达规律进行了研究，并对其进行了生物信息学分析，为进一步研究该基因的功能提供线索。结果表明，绵羊RARG基因共编码458个氨基酸，其中亮氨酸所占比例最高，为11．10％；该基因编码产物在系统进化树中与牛的亲缘关系最近；RARG基因编码产物二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主，主要位于细胞核中，是一种水溶性蛋白；Real—time PCR结果显示，绵羊RARG mRNA在心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、十二指肠、淋巴、下丘脑、垂体、肌肉、睾丸等12个组织中均有表达，其中在睾丸中表达量最高，推测绵羊RARG基因可能参与机体繁殖机能的调控。     

转基因动物及其应用

转基因动物技术是近十余年发展起来的，它为生命科学研究从微观的分子水平到宏观个体水平的联系提供了一套有用的工具和模型，在基本理论和实际应用研究上都很有价值，本文介绍了转基因动物的基本概念，基本制备方法以及比技术在诸多方面的应用。     

结核杆菌基因诊断研究进展

结核病被ＷＨＯ 称为最重要的传染病，目前结核病的确诊主要依靠涂片、镜检观察，这种方法阳性率不高，且准确性差。Ｅｌｉｓａ 、ＲＩＡ、ＢＡＣＴＥＣ及ＭＢ－ Ｃｈｅｃｋ 培养系统提高了检测的准确性，也较为快速，但不能最终确诊。基因诊断是以分析核酸而达到特异、敏感、快速地检测和鉴定结核杆菌的目的。本文论述了目前用于结核杆菌检测和鉴定的几种基因诊断方法，即基因探针技术、基因扩增技术、基因分型，其中着重介绍了ＰＣＲ 技术在结核杆菌诊断中的广泛应用。     

一种改进的重复多色荧光原位杂交技术

多色荧光原位杂交技术是在常规荧光原位杂交技术基础上建立的一种染色体分析手段,已广泛应用于肿瘤遗传学的研究,尤其是用于染色体隐匿性重排及复杂核型分析。本研究旨在利用现有实验条件,建立一种可靠的人类全染色体分析方法——重复多色荧光原位杂交技术（repetitive multicolour fluorescence in situ hybridization,RM-FISH）。采用特异的全染色体涂染探针,分别用C3、Cy5、FITC3种荧光素直接标记,组合制备4组六色的探针池。对同一染色体片先后进行4次杂交,通过装备了4组滤镜的荧光显微镜捕获信号。RM-FISH技术结合反相DAPI显带对1例原发性食管鳞癌进行核型分析,获得了全部染色体的特异信号。本研究建立的RM-FISH简便、易行,是光谱核型分析的一种较理想的替代技术。     

荧光原位杂交技术及其应用

荧光原位杂交技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术,广泛应用于基因定位及病毒感染、DNA物理图谱的构建、产前诊断等许多领域。本文对其基本原理和近年来的应用进行了阐述。     

原位杂交技术在两栖类基因定位中的应用

原位杂交技术在哺乳类及鱼类基因定位研究中有应用。作者在此基础上进行改进,报告了使用染色体原位杂交技术进行两栖类基因定位的方法。本文还对该方法的意义、应用前景及存在问题进行了讨论。     

Chromosome G-banding in situ hybridization of RFLP marker umc58 linked with the gene hm1 dictatingHelminthosporium carbonum susceptibility1 in maize

The technique of simultaneous G-banding and in situ hybridization has been developed in plants for the first time. Using this technique, RFLP marker umc58 closely linked with the hm1 gene dictatingHelminthosporium carbonum susceptibility1 was localized onto 1L3 (chromosome 1, long arm, the third band from the centromere to the end of the arm), 5L5 and 9L5. The results demonstrated that umc58 was a triplicated sequence. It was deduced that umc58 probably was in a duplicated region that includes a part ofHelminthosporium carbonum susceptibility genes (hm1 and hm2), as the hybridization sites of umc58 in chromosomes 1 and 9 were those at which the genes localize. The techniques of simultaneous G-banding and ISH in plants are discussed.     

用原位杂交技术对玉米中期染色体中rRNA的研究

本文以玉米１７ＳｒＲＮＡ的ｃＤＮＡ作探针，采用缺口平移技术，用Ｂｉｏ－ｄＵＴＰ对该探针进行生物素标记。在Ｋ４Ｍ树脂包埋的玉米根尖超薄切片上进行原位杂交。杂交后，在电镜下通过与１０ｎｍ金颗粒相连的亲合素对杂交子进行检测，首次直接证实了除核仁，核质和细胞质外，ｒＲＮＡ在中期染色体上的存在。其分布特点是随机的，均匀的，并在数量上明显高于细胞质。     

Development and characterization of interspecific hybrids between Oryza sativa and O. latifolia by in situ hybridization

Oryza sativa and O. latifolia belong to the AA and CCDD genomes of Oryza, respectively. In this study, interspecific hybrids of these species were obtained using the embryo rescue technique. Hybrid panicle traits, such as long awns, small grain, exoteric large purple stigma, grain shattering and dispersed panicles, resemble that of the paternal parent, O. latifolia, whereas there is obvious heterosis in such respects as plant height, tillering ability and vegetative vigor. Chromosome pairing and the genomic components of the hybrid were subsequently investigated using genomic in situ hybridization (GISH) and fluorescent in situ hybridization (FISH) analysis. Based on the mitotic metaphase chromosome numbers of the root tips investigated, the hybrid is a triploid with 36 chromosomes. The genomic constitution of the hybrid is ACD. In the meiotic metaphase I of the hybrid pollen mother cell, poor chro- mosome pairing was identified and most of the chromosomes were univalent, which resulted in com- plete male sterility in the hybrid.     

基于DNA探针和FISH技术对两种有害浮游植物的检测研究

针对两种典型的有害浮游植物微小原甲藻和Takayama pulchellum(T.pulchellum)各设计了4条特异性探针,并采用基于PCR管载体的荧光原位杂交检测方法检测了这些探针的标记效果。实验结果表明,针对微小原甲藻和T.pulchellum核糖体大、小亚基DNA(LSU和SSU rDNA)的序列信息所设计的8条荧光标记探针均能够特异性地识别这些目标藻。各探针的标记效果有一定差异,经过标记的目标藻细胞在单种和自然水样混合样品中均可以通过荧光显微镜进行识别和区分。针对微小原甲藻和T.pulchellum的荧光原位杂交检测方法的建立将有助于对样品中这些目标藻进行快速准确地检测和监测。     

转基因猪外源hDAF基因的定位

应用非同位素原位杂交技术研究转基因猪外源ｈＤＡＦ基因在受体基因组染色体上的整合及其定位,结果表明,外源基因在转基因狸中呈随机多位点整合,转基因分别定位在２Ｐ、６Ｐ＾１４、７Ｐ＾１１－Ｐ＾１３、７ｑ＾２６、１１ｑ＾１２、１３ｑ＾４４－ｑ＾４８、１４ｑ＾２６。     

LA-PCR法制备赤麂Y2涂染探针与原位杂交

应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR（linker-adaptor PCR）扩增后用DIG标记制备探针,然后用Southern blot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明：用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体.     

草履虫类核纤层蛋白的初步研究

本文以DGD包埋去包埋技术对草履虫的核纤层通过透射电镜和免疫荧光、分子杂交等技术进行了观察。结果显示,在核周存在由10nm纤维组成的核纤层;免疫荧光结果表明,在核周呈阳性反应,并在其表皮、口器等部位呈交叉的阳性反应;蛋白分子杂交的反应带在68kD处呈阳性反应。