Ri质粒转化牛膝及其发状根的培养

用发根农杆菌的Ｒｉ质粒转化药用植物牛膝，诱导出了抗卡那霉素的发状根。将诱导的发状根进行固体平板培养和液体悬浮培养。在附加Ｋｍ３０ｍｇ／Ｌ的ＭＳｏ和１／２ＭＳｏ培养基上，发状根生长良好，而未经转化的对照组则死亡，表现出生激素自主性。在附中外源激素ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ时，能促进发状根的成活，侧根的形成以及提高增殖倍数。表明适量的外源激素能促进发状根的生长。     

发根农杆菌Ri质粒诱导的黄芪发状根根冠细胞亚显微结构研究

对膜荚黄芪发状根根冠细胞的亚显微结构进行研究发现：发状根根尖没有分化出典型的根冠结构；根冠平衡囊细胞中淀粉分布无极性，散地细胞质中；细胞中未发现粗面内质网而仅有滑面内质网的存在；高尔基体分泌功能不旺盛，无肥大的潴泡；细胞壁较薄，纵向壁略加厚，其间无粘液积累；根冠外周细胞逐渐老化，但细胞壁不溶解，老化的细胞不脱落，且根冠细胞层数不增加。     

Ri质粒转化及其在植物基因工程中的应用

发根农杆菌Ｒｉ质粒为一种植物基因工程新载体。近年来，国内外对Ｒｉ质粒的遗传转化进行了大量的研究，本文结合自己的一些研究工程对Ｒｉ质粒转化及其应用作一综述。     

Ri质粒转化及其在植物基因工程中的应用

发根农杆菌Ｒｉ（Ｒｏｏｔｉｎｄｕｃｉｎｇ）质粒为一种植物基因工程新载体。近年来，国内外对Ｒｉ质粒的遗传转化进行了大量的研究，本文结合自己的一些研究工作对Ｒｉ质粒转化及其应用作一综述。     

芸芥发状根的诱导及其植株再生体系的建立

通过发根农杆菌R1000介导的遗传转化建立了芸芥发状根的诱导、培养及植株再生体系.研究了影响发状根诱导及生长的各种因素,通过PCR对所得发状根进行了分子水平的鉴定.结果表明:发根农杆菌R1000的rol B基因已被成功地转入并整合到该发根培养物的基因组中.     

发根农杆菌A4转化黄瓜获得发状根再生植株

研究以黄瓜栽培品种津研四号为试材,比较了培养基中添激素对自然生根及发状根诱导的影响。无菌苗子叶及下胚轴经发根农杆菌Ａ４侵染后２周诱导出发状根,发状根在无激素的ＭＳ筛选培养基上能够自主生长,在附加ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的筛选分化培养基上分化出不定芽,ＧＵＳ染色表明转化植株呈阳性反应。     

商陆发状根生长动力学的研究

发根农杆菌株1334感染商陆无菌苗的子叶,获得发状根,经PCR检测扩增出了560bp的rolC基因的目的片断,采用液体振荡培养对发状根的生长势及不同理化因子对其的影响进行了研究,在MS培养液,pH=8,添加激素0.1mg/LIAA的条件下发根最大生长量达到了8.3795g.     

地黄毛状根的培养研究

发根农杆菌是一种革兰氏阴性菌,能侵染大多数的双子叶植物,诱发被感染植物的受伤部位长出毛状根.本实验用发根农杆菌感染地黄外植体诱导其产生毛状根,并加以培养,为今后选择合适的培养方式,大规模培养毛状根来生产地黄的次生物质奠定基础.     

怀牛膝毛状根诱导及培养体系的建立

以牛膝叶片为外植体,研究了不同发根农杆菌、培养基、乙酰丁香酮(AS)对毛状根诱导率及其生长的影响.结果表明,发根农杆菌不同菌种对牛膝叶片转化率有显著影响,3个供试菌种中ATCC15834菌株诱导率最高;在1/2MS无激素固体培养基上毛状根的诱导率及生长状况均优于MS培养基;100μmol·L-1 AS可以有效提高毛状根诱导率.毛状根从叶片形态学下端中脉切口处形成的愈伤组织上产生,能在无外源激素的培养基上自主生长.PCR扩增结果显示发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已在牛膝毛状根基因组中插入、整合并得到表达.建立了牛膝毛状根诱导培养体系,为利用毛状根大规模生产药用成分奠定了基础.     

龙胆毛状根的诱导培养

发根农杆菌（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ｒ１５００感染龙胆茎段、叶片外植体，１５ｄ后可诱导出毛状根。茎段诱导率高于叶片，可达４２．３％。毛状根的诱导与温度和光照有关。转化根具有抗卡那霉素的特征，在不含激素的ＭＳ培养基上培养，筛选出了生长正常的毛状根系。     

Ri质粒在绿豆离体器官培养中转导发根的全息现象

生物体每个相对独立部分的结构和功能,都是其整体结构和功能的成比例的缩小,这种现象称为生物全息律.以绿豆(Phaseolus radiatus L.)的上下胚轴和叶片为外植体,进行了Ri质粒转化根的试验.结果表明,离体的绿豆上下胚轴和叶片,在进行发根培养时,同样存在着生物全息现象.这种现象为研究离体器官的形态发生,以及发根农杆菌Ri质粒的发根效应,提供了一种新的观点.     

发根农杆菌A4对骆驼刺的遗传转化

用野生型发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ａ４菌株感染骆驼刺（Ａｌｈａｇｉ ｐｓｅｕｄｏａｌｈａｇｉ）无菌苗的子叶和下胚轴,１５ｄ左右在感染部位诱导出发根。将发根切段放在附加２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织,在３．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的ＭＳ培养基上进一步分化形成完整植株,冠瘿碱检测结果表明,不仅在初生发根中,在次生发根、来源于发率的愈     

发根农杆菌A_4菌株转化红豆草途径及转化组织植株再生研究

将生长２０ｄ的红豆草（ｏｎｏｂｒｙｃｈｉｓｖｉｃｉａｅｆｏｌｉａ）无菌苗的下胚轴切成０．５～１ｃｍ片段，倒插在含２，４－Ｄ的固体ＭＳ培养基上预培养两天；然后转至无激素培养基上，用发根农杆菌Ａ４，（ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓＡ４）菌悬液感染切面，１０ｄ后长出许多发状根。这些发状根在无激素培养基上继代培养，生长旺盛，且产生许多次生侧根，将次生根切段后，在含２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，进一步分化形成完整植株，初生根、次生根、愈伤组织，以及再生植株叶片均含有农杆碱和甘露碱，而未转化的对照愈伤组织则没有。另外对Ｃｕ２＋促进发状报生长的作用进行了研究。     

农杆菌质粒DNA高效提取方法研究

以EHA105菌株为实验材料,通过优化质粒扩增条件、加大菌液使用量、改良提取纯化过程中所用试剂等,简化了操作流程,给出了一种高效提取农杆菌中质粒DNA的方法。结果表明,选择LB＋KANA为培养基、抗生素质量浓度为50 mg/L,细菌培养至OD600=0.634～0.714时,以5 mL/次用量取菌液裂解;以改进方法提取试剂,得率与常规方法相当。该方法在满足PCR检测条件的前提下既减少了酚、氯仿等有毒试剂的用量,又省时、经济、方便,为植物转基因工程中目的物DNA的检测提供了技术支持。     

盾叶薯蓣毛状根的诱导与薯蓣皂甙元的生产

报道盾叶薯蓣形成毛状根诱导的方法及不同毛状根系间生长速率与薯蓣皂甙元含量的差异．结果表明,盾叶薯蓣的幼叶和茎段难被R1601、A4和LBA9402等发根农杆菌菌株诱导出毛状根,但愈伤组织则比较容易;34%的被R1601菌株感染、并在添加200μmol／L乙酰丁香酮的共培养基上培养3d的愈伤可以在30d内形成毛状根;不同的毛状根系在生长速率与薯蓣皂甙元含量方面存在显著差异．     

大麦黄矮病毒抗性基因的Ti质粒构建

通过酶切、连接、转化等技术 ,将大麦黄矮病毒抗性基因复制酶基因ORF2插入Ti质粒pGA4 82的T DNA区 ,从而提供了新的目的基因转化小麦的农杆菌 /质粒系统 .     

银杏发根的转化及其悬浮培养无性系的建立

运用具有Ｒｉ质粒的发根农杆菌对银杏的叶片，幼芽和幼茎进行成功地转化，并建立银杏发根的悬浮培养无性系，冠瘿碱检测实验表明，发根农杆菌Ｒｉ质粒的Ｔ－ＤＮＮＡ部分已整合到银杏细胞中，这为利用生物技术开发银杏资源提供一条新的途径。     

根癌农杆菌的高效电激转化

利用电激法双元载体质粒ｐＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率。探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达。