不同氧浓度对裸鼹鼠原代鼠星形胶质细胞增殖及生长状态的影响

摘要: 目的建立裸鼹鼠星形胶质细胞体外培养方法,观察不同氧浓度对裸鼹鼠星形胶质细胞增殖及生长状态的影响,寻找最适宜体外裸鼹鼠细胞增殖和生长的氧浓度。方法利用机械法辅以化学法分离新生裸鼹鼠脑内胶质细胞,利用差速贴壁法进行星形胶质细胞纯化,通过设置3%、5%、10%以及20%等不同氧浓度环境,利用CCK8 染色法分析不同氧浓度下裸鼹鼠星形胶质细胞增殖速率,利用免疫细胞化学染色法观察不同氧浓度下裸鼹鼠细胞胞体伸长突起的状况从而进一步判断不同氧浓度下裸鼹鼠星形胶质细胞生长状态。结果利用机械及化学法分离裸鼹鼠胶质细胞并结合差速贴壁法能够成功建立体外裸鼹鼠星形胶质细胞模型。不同氧浓度环境下裸鼹鼠生长速率不同,随着氧浓度的升高,裸鼹鼠进入快速生长期所用的时间越短。氧浓度为20%时,裸鼹鼠星形胶质细胞较小,突起少,状态不佳,但是10%以下的氧浓度环境中,裸鼹鼠能保持较多的细胞突起,状态较好。结论机械及化学法相结合,合并差速贴壁法能够成功建立裸鼹鼠星形胶质细胞体外培养模型, 10% 氧浓度下既可以保证裸鼹鼠星形胶质细胞适宜的生长速率又能保证其处于良好的生长状态。     

胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养

目的:探讨胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养条件.方法:采用胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞后采用加胎牛血清的DMEM培养液,进行细胞培养.用波形蛋白免疫细胞化学染色对所分离的细胞进行鉴定.结果:细胞培养24h后有一定量细胞贴壁,48h后贴壁细胞开始生长.结论:该实验方法可以成功地培养大鼠胚胎肺成纤维细胞.     

大鼠胚胎神经干细胞的培养和鉴定

目的　体外培养和鉴定神经干细胞 .方法　从胎鼠前脑取出脑组织 ,采用酶消化、机械吹打、对倍稀释成单个细胞 ,经无血清培养获得单细胞克隆 ,由免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞 .结果　从胎鼠脑中分离的细胞具有连续传代形成克隆的能力 ,表达神经干细胞蛋白 (nestin) ,并能诱导分化成神经元和神经胶质细胞 .结论　分离的细胞是神经干细胞 .     

人胚胎脑神经干细胞分离纯化及体外培养的研究

为了探讨人胚神经干细胞体外培养条件下的生物学特性,为其应用于临床治疗奠定基础.取胎龄16周的人流产胚胎,胰酶消化结合机械法分离成单细胞悬液,以2×106个细胞/mL接种到含hEGF和h-bFGF的DMEM/F12、N2培养基进行体外培养;观察细胞生长情况,用10% FBS诱导神经干细胞球分化,免疫细胞化学鉴定. 结果显示从人胚大脑分离出的细胞经悬浮培养可以形成细胞球,表达Nestin蛋白.经诱导分化后具有表达神经元,神经胶质细胞的特异性抗原. 说明人胚神经干细胞在体外可以稳定生长,并能分化成为神经原及胶质细胞.     

嗅鞘细胞移植促进神经修复的研究与进展

神经损伤，尤其是中枢神经损伤一旦发生将给患者，家庭及社会带来沉重的经济、精神负担。神经损伤修复是神经科学家多年研究工作面临的一大挑战。嗅鞘细胞是分布于嗅觉系统嗅球和嗅上皮基底膜的一种特殊的胶质细胞。嗅鞘细胞在体外具有促进轴突再生并促进其较长距离延伸，髓鞘化轴突的能力而使之成为近年来最为吸引人注目的一种促进神经修复的工具。中枢源性与周围源性的嗅鞘细胞具有相似的生物学特性和功能，鼻黏膜活检可以是嗅鞘细胞移植修复神经损伤的自体来源。本文就近年来嗅鞘细胞移植促进受损神经修复的应用研究现状和进展作一综述。     

大鼠皮层星形胶质细胞体外培养的对比研究

比较3种不同培养星形胶质细胞的方法,以获得高纯度星形胶质细胞,为体外研究其生物学功能奠定基础.取新生SD大鼠的皮层区,应用原代培养法、差速贴壁培养法和震荡法,通过形态学观察、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法和台盼蓝染色法,对比分析3种不同培养方法所获得星形胶质细胞的纯度和活性.差速贴壁组星形胶质细胞纯度(98.4%)明显高于原代培养组和震荡组.经台盼蓝染色发现,各组细胞活细胞率均大于95%,表明3种培养方法对于细胞活性没有显著影响.差速贴壁培养法培养星形胶质细胞的方法具有简便可行,纯度高的优点,可作为星形胶质细胞体外培养的良好模型.     

小鼠精原细胞体外培养分化的研究

目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化及体外培养条件。方法采用组合酶消化法分离纯化小鼠精原细胞和支持细胞,在添加FSHC和TC的基本培养基中进行体外培养。采用反转录PCR方法检测精子细胞特异性基因过渡蛋白9（Tnp2）的表达以对分化细胞进行鉴定。结果培养5d后有分化的圆形精子细胞出现,培养7d后收集的细胞可见Tnp2基因表达。结论通过体外培养小鼠精原细胞可迅速完成减数分裂过程和减数分裂后的分化过程,并可获得更接近成熟阶段的精子细胞。     

新生小鼠神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的：探讨新生小鼠神经干细胞(NSCs)分离、培养以及鉴定的方法。方法：分离新生昆明种小鼠(出生24h内)的大脑组织,经胰酶消化加机械吹打后,利用无血清培养基悬浮培养细胞,获得具有自我增殖能力的细胞克隆,并将细胞克隆贴壁培养测其分化能力。应用抗Ncstin、Musashi、SSEA-1、NSE免疫细胞化学方法及BrdU标记方法鉴定细胞克隆。结果：从新生昆明种小鼠大脑组织分离的细胞悬液,经悬浮培养,生成大量具有增殖能力的细胞,可形成神经球(neurosphercs),抗Nestin、Musashi、SSEA-1阳性,BrdU标记也呈阳性。细胞克隆贴壁培养后神经球分化为神经细胞,抗NSE阳性。结论：上述方法分离的细胞具有自我更新、自我复制及分化为神经细胞的能力,属于中枢神经系统干细胞。     

人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化

人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及三胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和三胚层三个胚层组织与细胞.     

新生小鼠子宫内膜上皮层体外分离研究

为探讨新的体外分离培养新生小鼠子宫内膜上皮细胞的方法,尝试先体外分离新生小鼠子宫内膜上皮层,再从分离后的上皮层分离培养上皮细胞的技术路线,取新生3-4日龄的小白鼠子宫角,4℃下置于1%胰蛋白酶/0.02%EDTA消化液中温和消化90 min,将巴斯德吸管的管径拉成等于或略小于子宫角直径大小,采用吹打的方法机械分离小鼠子宫内膜上皮层与基质层.结果表明:采用胰蛋白酶温和消化子宫角结合机械分离法可成功体外分离新生小鼠子宫角的子宫内膜上皮层,使先体外分离新生小鼠子宫内膜上皮层,再从分离后的上皮层分离培养上皮细胞的技术路线成为可能.     

Clonogenic colony-forming ability of hepatic stem cells in the spleens of mice

To confirm the existence of hepatic stem cells (HSCs), fetal liver cells isolated from mice on embryonic day 13 (ED13) were long-term cultured in vitro. Growth of the cells was observed intensively and characteristics were identified by immunocytochemistry. The results showed that some of the cells grew as colonies, in which some cells expressed AFP, CD34 and Albumin. Then the cells were transplanted intravenously into irradiated syngeneic mice. At day 12 a number of small hyperplasia nodules were seen in the apparently enlarged spleens of recipient mice. Moreover, some nodules were positive for AFP and CD34 and consisted of various types of cells, suggesting the very existence of hepatic stem cells in the mouse fetal liver.     

Fractalkine基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌细胞中的表达

为克隆小鼠趋化因子Fractalkine(．FK)基因，构建真核表达质粒，并在小鼠肝癌细胞中表达，用以进行肿瘤的基因治疗，用RT-PCR法，从小鼠乳腺癌细胞D2F2扩增FK的cDNA，插入pCR2．1 TOPO载体，测序证实后，将其亚克隆至质粒pIRES中构建FK真核表达载体；用脂质体将重组质粒转染小鼠肝癌MM45 T．Li细胞，经G418筛选获得抗性细胞克隆，用RT-PCR和免疫化学方法鉴定转染细胞中FK基因的表达．结果表明：经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，RT-PCR和免疫化学方法证明转基因MM45T．Li细胞克隆中存在小鼠FK基因的表达。     

受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.     

组胺H1受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.     

复方威茯急性毒性实验及抗炎镇痛作用观察

研究复方威茯的急性毒性作用,并观察其抗炎镇痛作用。以最大给药量方法进行急性毒性实验,观察小鼠一般情况等,14 d后处死解剖,观察小鼠主要脏器组织病变情况。以二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,实验观察复方威茯抗炎作用。以冰醋酸致小鼠扭体、热板致小鼠疼痛探讨复方威茯镇痛作用。结果在急性毒性实验中,未见小鼠有中毒症状或死亡,外观表现未见异常,解剖后未见脏器异常;复方威茯可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度和醋酸致腹腔毛细血管通透性的增高(P0.05或P0.01),可明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数(P0.01),可提高热板致小鼠疼痛的痛阈值(P0.05或P0.01)。说明复方威茯无明显的急性毒性作用,有明显的抗炎镇痛作用。     

黄粉虫的营养保健作用

为了解黄粉虫油脂和去油虫渣的营养保健作用,将黄粉虫油脂和去油虫渣掺入饲料,饲喂初成年的ICR小鼠,测定了其对小鼠的学习记忆能力和抗疲劳能力的影响;同时研究了黄粉虫全虫干粉对皮下注射了D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响。结果表明:分离后的黄粉虫油脂和油渣均能提高小鼠的抗疲劳能力;但仅黄粉虫油渣可促进其学习能力。饲料中掺入黄粉虫幼虫干粉,使其在饲料中的质量分数为0.05和0.10,可抑制D-半乳糖致衰老小鼠体重的降低,显著提高其脾脏和胸腺的脏器重量,增强免疫力;但对血清抗氧化能力无明显的改善作用。     

Enhancing cellular immune response to HBV M DNA vaccine in mice by codelivery of interleukin-18 recombinant

OBJECTIVE: To investigate the effect of interleukin-18 (IL-18) on immune response induced by plasmid encoding hepatitis B virus middle protein antigen and to explore new strategies for prophylactic and therapeutic HBV DNA vaccines. METHODS: BALB/c mice were immunized with pCMV-M alone or co-immunized with pcDNA3-18 and pCMV-M and then their sera were collected for analysing anti-HBsAg antibody by ELISA; splenocytes were isolated for detecting specific CTL response and cytokine assay in vitro. RESULTS: The anti-HBs antibody level of mice co-immunized with pcDNA3-18 and pCMV-M was slightly higher than that of mice immunized with pCMV-M alone, but there was not significantly different (P>0.05). Compared with mice injected with pCMV-M, the specific CTL cytotoxity activity of mice immunized with pcDNA3-18 and pCMV-M was significantly enhanced (P<0.05) and the level of IFN-Gamma in supernatant of splenocytes cul-tured with HBsAg in vitro was significantly elevated (P<0.05) while the level of IL-4 had no significant difference (P>0.05). CONCLUSION: The plasmid encoding IL-18 together with HBV M gene DNA vaccines may enhance specific TH1 cells and CTL cellular immune response induced in mice, so that IL-18 is a promising immune adjuvant.     

乙酰氨基己酸锌的急性毒性试验和Ames实验

目的与方法:本文研究乙酰氨基己酸锌对小鼠的急性毒性作用以及用鼠伤寒沙门氏菌突变株的回复突变性检测乙酰氨基己酸锌是否具有致突变性.结果与讨论:结果表明,乙酰氨基己酸锌的小鼠腹腔注射的半数致死量LD50=364.69mg/kg;在加与不加S9的条件下,对TA97,TA98,TA100和TA102的致突变作用为阴性.     

人心房成纤维细胞体外组织块贴壁培养与鉴定

从建立体外循环将进行心脏手术的风湿性心脏病患者体内无菌下取心脏停跳前右心耳组织，采用组织块贴壁法进行心房成纤维细胞的分离培养，通过光学显微镜观察培养后的细胞形态，并通过免疫细胞化学的方法鉴定所分离培养的细胞。贴壁4—6d后可见长梭形贴壁生长的细胞游离出组织块，细胞生长迅速，2—3d后即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，胞体较大，细胞浆透明，细胞核较大，呈椭圆形，无自发性搏动。免疫细胞化学检测显示所培养细胞波形蛋白呈阳性反应。通过组织块贴壁法顺利分离人心房成纤维细胞。     

细胞石蜡包埋切片技术的应用

目的:研究使用蛋清甘油作为支撑物的石蜡包埋制片技术用于基于细胞的形态学检测的可行性.方法:针对人胃癌BGC-823培养细胞、临床送检宫颈TCT检查细胞、胃癌标本残碎细胞液等细胞学材料,运用蛋清甘油作为支撑物进行石蜡包埋制片,进行HE染色及免疫细胞化学染色,并将染色效果与细胞爬片、细胞甩片及细胞涂片染色效果进行对照分析....