ING5在食管鳞癌中的表达及意义

为分析ING5的表达与食管鳞状细胞癌的发生之间的联系,在不同分期的食管鳞癌患者的癌组织中,通过RT-PCR的方法对ING5的表达水平进行检测.结果发现,RT-PCR检测到食管鳞癌组织ING5mRNA表达下调,ING5mRNA表达的下调可能与食管鳞癌的发生密切相关.     

UFC1基因在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达

为探讨泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)基因在乳腺癌组织及相对应的癌旁正常乳腺组织中的表达,以及与临床病理特征之间的关系,分别应用RT-PCR法、Western-blot法、免疫组织化学检测20例乳腺癌患者的乳腺癌组织及其对应的癌旁正常乳腺组织...     

甜菜硝酸还原酶全长基因的克隆及其在缺氮胁迫下表达与活性分析

用50 mmol·L-1KNO3溶液处理的甜菜幼苗提取总RNA,通过RT-PCR法从甜菜总RNA中分离得到一个硝酸还原酶基因,其cDNA长2 760 bp,包含了完整的基因编码序列,与已公布的硝酸还原酶基因序列相似性达99%.同时利用活体测定法检测了经缺氮胁迫不同时间后甜菜叶中NR活性,并利用NR片段引物进行半定量RT-PCR,检测了基因的表达量.结果表明,随着缺氮处理时间的延长,甜菜叶中的NR活性随诱导时间增加活性逐渐降低,在缺氮处理1 h,其活性便有明显的降低;而NR的mRNA受缺氮胁迫下调表达,暗示着NR基因的表达与氮诱导相关.     

D-氨基葡萄糖盐酸盐对小鼠淋巴细胞增殖及相关基因表达的影响

研究D-氨基葡萄糖盐酸盐( GAH)对小鼠淋巴细胞c-fos mRNA,NF-kB mRNA,p38 MAPKmRNA表达的影响,并在分子水平上进一步探讨GAH对小鼠淋巴细胞增殖的作用机制.利用RT-PCR法检测GAH作用后小鼠淋巴细胞c-fos mRNA,NF-kB mRNA,p38 MAPK mRNA表达水平的变化...     

程序性细胞死亡因子5(PDCD5)在子宫内膜癌中的表达分析

为探究程序性细胞死亡因子5(Programmed cell death factor 5,PDCD5)在子宫内膜癌中的表达及功能,收集2014年6月—2016年6月行手术治疗的50例子宫内膜癌组织、50例正常增生期子宫内膜组织与50例子宫内膜不典型增生组织病例,利用免疫组化方法分析PDCD5蛋白的表达。结果显示,子宫内膜癌组织、正常增生期子宫内膜组织与子宫内膜不典型增生组织的PDCD5蛋白阳性表达率分别为46.00%、82.00%、64.00%,比较组间数据差异显著,P0.05。研究表明PDCD5对子宫内膜癌疾病的潜在诊断价值重大,PDCD5的表达下调与子宫内膜癌的发生发展具有十分紧密的关联性。     

气道高反应大鼠水通道蛋白与呼吸道粘液分泌的相关性研究

为观察气道高反应大鼠肺组织AQP4和AQP5的表达对呼吸道粘液分泌量和质的影响,取24只SPF级Wister大鼠随机分为3组:正常对照组；气道高反应组；气道高反应+糖皮质激素治疗组；每组8只.各组依次检测大鼠的气道粘液分泌总量、肺组织AQP4和AQP5的表达量、肺组织MUC5B的表达量,分析AQPs(AQP4、AQP5)的表达和粘液分泌量、MUC5B的表达之间的关系.结果显示,气道高反应组大鼠AQP4、AQP5的表达明显低于正常对照组,气道高反应组大鼠的气道粘液分泌总量和MUC5B的表达明显高于正常对照组,较气道高反应组经糖皮质激素治疗后肺组织AQP4、AQP5含量增多,MUC5B表达有下降,气道粘液分泌总量减少.以上结果提示,在气道高反应过程中,AQPs(AQP4、AQP5)的表达下调可增加粘蛋白MUC5B的表达和气道粘液分泌量.     

SLP-2基因在乳腺癌细胞系中的表达及对MCF-7细胞增殖的影响

人的SLP-2基因在乳腺癌组织的高表达与病人的存活率相关.为了研究SLP-2在乳腺癌中的功能,应用免疫印记的方法检测SLP-2在不同乳腺癌细胞中的蛋白表达水平,发现随着细胞癌化程度的增强其表达也增强.成功构建p CMV-Myc-SLP-2重组质粒,证明了其在MCF-7细胞的表达,MTT实验结果表明SiRNA转染乳腺癌细胞MCF-7可以抑制细胞增殖,同时发现SLP-2在乳腺癌细胞系中表达量与HER2/nue呈负相关.这些结果为深入研究乳腺癌的发生和发展奠定了基础.     

Nodal在宫颈组织标本中的表达及临床意义

通过检测Nodal在宫颈临床标本中的表达,探索Nodal与宫颈癌发生、发展进程是否相关。收集正常宫颈(NC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈浸润癌(ICC)组织标本,利用免疫组织化学检测并统计Nodal在宫颈组织中的表达。结果显示:Nodal在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润癌组织中的阳性表达率分别为46.81%(22/47)、50%(2/4)和79.41%(54/68),经χ~2检验,Nodal表达在正常宫颈和宫颈浸润癌之间有明显差异,具有统计学意义(P0.001);免疫反应评分(IRS)分析也发现,Nodal的IRS评分呈现逐渐上升趋势,NC(3.574±0.520)、CIN(4.250±2.72)和ICC(6.912±0.490),方差分析结果显示具有统计学意义(P0.001)。结果表明:Nodal的表达在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润癌中的表达逐渐上升,Nodal在宫颈癌发生、发展过程中可能起着一定的作用。     

IGF1/2在金鱼的不同胚胎发育时期与不同组织中的分化表达

胰岛素样生长因子(insuline-like growth factors,IGFs)是一类具有胰岛素样代谢和促进有丝分裂功能的多肽,包括IGF1和IGF2,对调节垂体生长激素合成和分泌起着重要的作用,同时还参与了细胞的增殖、生长、分化等过程.利用RT-PCR在mRNA水平上检测了IGF1/2基因在金鱼不同组织和不同胚胎发育时期的表达.结果表明,IGF1基因在肝脏中的表达量最高,在大脑、肌肉及精巢的表达量相对较低;IGF2基因在脾脏中的表达量最高,在肾脏、卵巢及精巢的表达量相对较低.IGF1/2基因在不同发育时期基本上呈现由低到高的趋势.研究表明,IGF1/2基因在金鱼的不同组织和胚胎发育过程中可能具有重要的作用,但其具体机制还有待于进一步研究.     

复方苦参联合5-氟尿嘧啶调控细胞周期蛋白D1抑制乳腺癌生长作用的研究

为了解苦参联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡及对Cyclin D1表达的影响,采用流式细胞术观察联合用药组(复方苦参+5-Fu)和对照组(二甲基亚砜DMSO+5-Fu)处理后MCF-7细胞凋亡的情况;采用免疫印迹法(Western Blot)观察两组MCF-7细胞Cyclin D1的表达;采用CCK-8细胞增殖实验观察两组MCF-7细胞增殖情况;采用RT-PCR观察两组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA的表达;建立裸鼠荷瘤模型,并观察两组肿瘤组织中Cyclin D1的表达.结果联合用药组处理的MCF-7细胞凋亡(12.7%)高于对照组(6.2%),差异显著.联合用药组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的蛋白表达均低于对照组;联合用药组MCF-7细胞的增殖能力低于对照组(P0.05);裸鼠荷瘤后,联合用药组的直径为(79.8±10.3)mm,明显小于对照组的直径(176.7±26.2)mm(P0.05).说明苦参可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞中Cyclin D1的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖,加速MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与抑制Cyclin D1的表达有关.     

一个与鸭繁殖性能相关卵巢差异表达基因的分离分析

本文用mRNA差异表达显示技术,分离分析了繁殖准备期金定鸭（Anas platyrhynchos domesticus）和绿头野鸭（Anas platyrhynchos）卵巢差异表达基因.通过卵巢组织RNA提取、反转录、mRNA差异显示PCR扩增、PAGE和银染检测扩增产物、差异带回收纯化、T载体连接转化和克隆测序分析,获得一个可能与鸭繁殖性能有关的卵巢差异表达基因片段,片段大小882bp.同源性分析表明,其序列与发情期羊卵巢cDNA（同源性为96%）、褐家鼠睾丸cDNA（同源性为83%）有很高的同源性.基因家族摸体分析表明,该序列的部分片段分别与Sox-5基因、转录因子USF基因、性别决定因子SRY、Cdx A基因都有90%以上的同源性典型摸体.由上述分析,我们推测该cDNA片段与鸭繁殖性状有关.     

GAS41基因在斑马鱼胚胎发育中的时空表达谱

为了深入研究GAS41在胚胎发育中的作用机理,应用生物信息学软件分析了斑马鱼GAS41基因的序列特征;采用RT-PCR、整体原位杂交和整体免疫组织化学方法检测其在斑马鱼胚胎发育中的时空表达谱.结果显示斑马鱼GAS41蛋白与人类、小鼠、大鼠同源蛋白都有91.2％的同源性,具有高度的保守性.RT-PCR结果表明GAS41在检测的成体组织中均有表达,表达丰度相当.而GAS41在胚胎受精后一直持续表达,其中受精4h后表达量升高.整体原位杂交和免疫化学结果显示GAS41特异性表达于胚胎头部,尤其是中脑、间脑(眼部)、小脑和后脑表达明显.这些都提示GAS41是一个高度保守基因,在斑马鱼中枢神经系统发育过程中可能起重要作用,同时也为GAS41在胚胎发育调控中的作用机制提供实验基础.     

桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞自噬的影响

通过不同梯度浓度的桦木酸处理SGC-7901细胞,研究桦木酸对细胞自噬相关基因表达的影响,从而确定桦木酸在胃癌细胞内与自噬的关联．将人胃癌SGC-7091细胞分为5组,其中3组设置桦木酸的浓度梯度分别为10,20,30mg/L,使用经典抗癌药物氟尿嘧啶（5-Fu）作为阳性对照组,使用0 mmol/L桦木酸为阴性对照组,每组3个复孔,处理细胞48 h,用q RT-PCR和Western blot方法检测桦木酸对人胃癌SGC-7091细胞自噬相关基因mRNA和蛋白表达的影响,使用免疫荧光法定位并检测SGC-7091细胞内的LC3蛋白．与阴性对照组相比,梯度桦木酸处理组的细胞中LC3-Ⅱ,Beclin 1mRNA和蛋白的表达均显著升高（P<0.01）,LC3-Ⅰ蛋白的表达明显降低（P<0.05）．同时激光共聚焦的结果显示高浓度桦木酸诱导LC3蛋白在细胞质内的聚集现象．在设置的梯度浓度范围内,桦木酸能诱导人胃癌SGC-7091细胞发生自噬,且呈剂量依赖性,浓度升高诱导效果也升高．     

大鼠睾丸特异表达新基因Lrrc18的克隆及表达谱分析

运用数据库消减杂交(Digital Differential Display,DDD)分析方法,从大鼠睾丸组织中分离出了一个新基因-Lrrc18(GenBank登录号:BC081908).该基因定位于大鼠染色体16p16区带,gDNA在染色体上跨度40 900 bp,含6个外显子,编码一个含256个氨基酸的蛋白,带有4个LRR(leucine-rich repeat domain)结构域.Northern杂交结果显示Lrrc18只在睾丸中表达.对出生后3~56 d不同时期的大鼠睾丸的Lrrc18基因的表达进行检测,结果表明在大鼠出生后21 d时开始在睾丸组织中可检测到Lrrc18的mRNA表达,以后其表达量逐步上升,到42 d时达到最大值.该结果提示:Lrrc18基因在精子的发生过程中可能起重要作用.     

辛基酚下调AIB1、C-erbB2表达并降低乳腺癌发病的研究

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,其危险因素与雌激素、环境因素改变和某些基因突变有关.研究探讨出生早期大鼠接触辛基酚(OP)对乳腺癌发病的影响及乳腺癌中AIB1、C-erbB2表达的影响.雌性SD大鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)、OP20组、OP40组、OP80组,Gen组.d22-d28皮下注射OP式Gen,d220处死大鼠.Con组未发生肿瘤,OP20、OP40、OP80、Gen和Mod组的乳腺癌发生率分别为57.14%、28.57%、52.38%、23.81%和66.67%;与Mod组相比,OP40组和Gen组大鼠乳腺癌组织中AIB1和C-erbB2mRNA明显降低并维持一定时间.研究提示OP40能降低DMBA诱导乳腺癌的发生,原因可能与下调乳腺癌中AIB1和C-erbB2表达有关.     

心脏高表达基因ZNF425在肺癌中功能的探究

为研究ZNF425与肺癌之间的关系,先利用生物信息学的方法研究ZNF425与肺癌的相关性。基于癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库、癌症和正常基因表达谱公共数据库(GEPIA)中ZNF425与肺癌两种亚型肺腺癌(LUAD)和肺鳞状细胞癌(LUSC)的数据进行后期运算分析,发现在癌组织中ZNF425表达降低,这种现象在肺癌Ⅲ期尤为明显。同时数据显示ZNF425高表达患者生存率更高。再利用人类肺癌样本免疫组化证实了生物信息学的分析结果,与癌旁组织相比,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ期癌症组织中的ZNF425显著下调。最后,构建ZNF425过表达质粒在肺癌A549细胞系瞬时过表达ZNF425后,WB显示A549细胞中的JNK和P38活性受到抑制。因此,推测ZNF425可能具有抑制早中期肺癌的功能,而且这种能力与MAPK信号通路具有相关性。     

白头翁汤调控溃疡性结肠炎NKT细胞表达转录因子IL-13的信号通路的作用研究

初步探究白头翁汤调控溃疡性结肠炎(UC)NKT细胞表达转录因子白细胞介素-13(IL-13)的信号通路和转录因子的作用机制。实验采用白头翁汤灌胃对C57BL/6小鼠噁唑酮结肠炎模型进行治疗。根据小鼠疾病活动指数DAI、组织病理学判断白头翁汤及其阳性对照美沙拉嗪的疗效。采用HE染色观察白头翁汤对结肠黏膜NKT细胞浸润的影响,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测组织中IL-13的mRNA表达水平和mRNA浓度,采用Western blot方法检测白头翁汤对结肠黏膜NKT细胞表达转录因子IL-13的信号通路和转录因子以及对结肠上皮屏障的影响。结果显示：小鼠噁唑酮结肠炎模型构建成功后,小鼠体重出现明显的下降,DAI评分升高,经白头翁汤治疗后,小鼠体重下降减缓,并且小鼠的DAI评分降低(P<0.05);另外,白头翁汤改善了小鼠噁唑酮结肠炎模型的病理结构变化,组织损伤程度明显降低。Western blot检测发现,白头翁汤导致IL-13信号通路相关蛋白表达呈现不同程度的升高和降低,并且也改变了结肠上皮组织细胞连接蛋白的表达。HE结果印证相关蛋白表达的...     

HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.     

青春期大鼠接触雌激素下调乳腺癌中NF-κBP65表达

为观察青春期大鼠接触雌激素如辛基酚（OP）或三羟异黄酮对乳腺癌中NF-κB的影响,通过免疫组织化学、RT-PCR、Western blotting和电泳迁移率改变实验（EMSA）等方法观察雌激素影响大鼠乳腺癌中NF-κB P65的改变.结果表明NF-κB P65在细胞胞浆和胞核中均有表达,在乳腺癌组织中以胞核表达多见.与模型组（mod）比较,给予40 mg/kg辛基酚（OP40）或500 mg/kg三羟异黄酮（GEN）处理的大鼠乳腺癌中NF-κB P65 mRNA表达明显降低,且细胞核中NF-κB P65蛋白表达也明显减少,NF-κB DNA结合活性明显降低.OP及GEN降低大鼠乳腺癌发病可能与减少NF-κB P65核转位、降低NF-κB的DNA结合活性有关.     

槲皮素对脂多糖诱导人脑微血管内皮细胞的作用机制

为研究槲皮素对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导人脑微血管内皮细胞(Human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)的作用机制,体外培养HBMEC,用LPS诱导HBMEC造模,将细胞分为正常组、模型组、槲皮素组及依达拉奉组,采用噻唑蓝法检测LPS诱导炎症因子变化的时间和槲皮素对HBMEC增殖能力的影响,用实时定量PCR法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α) mRNA、趋化因子C—C基元配体20(chemokine C—C motif ligand 20,CCL20) mRNA和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8) mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测TNF-α,CCL20和IL-8的含量,用蛋白免疫印迹法检测p-NF-ΚB p65,NF-ΚB p65,p-IKKα和IKKα的蛋白表达。结果发现,与正常组比,1 mg·L-1的LPS组细胞活力明显下降(P0.01);模型8 h组TNF-αmRNA,CCL20mRNA,IL-8 mRNA表达显著上升(P0.01);槲皮素各给药组(12.5,25,50,100,200,400μmol·L-1)细胞活力变化不明显。与模型组相比,200μmol·L-1槲皮素组的模型细胞增殖明显(P0.01);槲皮素组和依达拉奉组TNF-αmRNA,CCL20 mRNA,IL-8 mRNA表达和TNF-α,CCL20,IL-8的含量显著下降(P0.05);槲皮素组蛋白数量比n(pNF-ΚBp65)/n(NF-ΚBp65),n (p-IKKα)/n (IKKα)显著减小(P 0. 01),而依达拉奉组n (p-NF-ΚBp65)/n (NF-ΚBp65),n(p-IKKα)/n(IKKα)无明显变化。说明槲皮素具有抑制LPS诱导HBMEC的损伤作用,可能是通过下调IKKα/NF-ΚB p65信号通路减少炎症相关因子TNF-α,CCL20和IL-8的表达。这为槲皮素应用于脑血管病变引起的帕金森病临床防治提供了实验依据。