甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox启动子的克隆及序列分析

甜菜M14品系是带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系,其染色体组成中除了包含18条栽培甜菜染色体外,还附加有白花甜菜第9号染色体,具有无融合生殖特性,无融合生殖能够固定杂种优势.在前期工作中,通过SSH、RACE等技术获得了甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox的eDNA全长.通过6种限制性内切酶分别酶切M14品系基因组总DNA,再与相应接头连接,构建了6个DNA步移文库.根据基因BvM14-MADSbox cDNA序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出该基因的上游DNA序列.经生物信息学分析,推测获得了BvM14-MADSbox基因上游1 718 bp的启动子序列,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CCAAT-box,和ARE、ERE、HSE、ABRE、CGTCA-motif等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件.该结果为今后BvM14-MADSbox基因的时空特异性表达调控机制奠定基础.     

ChsA启动子驱动的IPT基因植物表达载体的构建

为研究异戊烯腺苷类细胞分裂素与花衰老进程的相关性,本研究通过PCR方法从矮牵牛中克隆到花瓣特异性表达的矮牵牛查尔酮合成酶基因A（ChsA）的启动子PchsA,并以其取代植物表达载体pBI121中的组成型启动子CaMV35S,然后将IPT基因插入到PchsA启动子下游,测序结果显示花瓣特异性启动子驱动的IPT植物表达载体构建成功.     

基于组织特异性基因集权重的分析方法研究

基因集检验是分析高维基因组数据不可或缺的方法之一.虽然许多基因的表达和功能是组织特异性的,但是大多数基因集检验是以不区分组织类型的方式进行的.本文利用来自人类蛋白图谱中的组织特异性基因活性信息计算组织特异性基因的权重,并使用分子签名数据库中过滤后的基因集,生成了组织特异性基因集权重.为了证明这些权重的有效性,使用这些权...     

甜菜BvM14-CMO、BvM14-BADH基因的克隆、盐胁迫表达及生物信息学分析

以耐盐甜菜(Beta vulgaris)M14品系为试验材料,利用RT-PCR克隆获得甜菜M14品系甜菜碱合成相关基因胆碱单加氧酶基因BvM14-CMO和甜菜碱醛脱氢酶基因BvM14-BADH的cDNA全长。荧光定量PCR测试结果表明,200和400 mmol·L~(-1)NaCl盐胁迫下BvM14-CMO及BvM14-BADH在甜菜M14品系的叶和根中均显著上调表达。通过蛋白质互作数据库预测,得到了拟南芥CMO和BADH蛋白的互作蛋白。采用甜菜M14品系盐胁迫转录组数据库,对甜菜M14品系中CMO和BADH互作蛋白的同源基因进行盐胁迫表达聚类分析,发现甜菜M14品系中大部分预测获得的CMO和BADH互作蛋白基因与BvM14-CMO和BvM14-BADH基因在盐胁迫下的表达变化趋势一致,这些研究结果为进一步深入研究BvM14-CMO和BvM14-BADH基因的功能奠定了理论基础。     

甜菜M14品系Cystatin基因植物蛋白纯化表达载体的构建及转化烟草

植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂是一类具有提高植物对各种生物及非生物胁迫抗逆性的重要蛋白质。利用前期获得的甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的编码区序列构建了带有His标签的甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的植物蛋白纯化表达载体,并将其转化烟草,获得T0代阳性转基因植株,为下一步利用融合蛋白的His标签从转基因烟草中大量纯化甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂奠定了基础。     

甜菜BvM14-CCoAOMT基因的克隆、表达及生物信息学分析

以甜菜M14品系为试验材料,利用反转录PCR(RT-PCR)克隆获得了甜菜M14品系木质素合成相关基因咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因(BvM14-CCoAOMT)的c DNA全长。生物信息学分析结果表明,BvM14-CCoAOMT基因具有咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因家族的典型结构域;系统发育分析表明,BvM14-CCoAOMT基因与松叶菊(Mesembryanthemum crystallinum)CCoAOMT基因亲缘关系较近。荧光定量PCR结果表明,BvM14-CCoAOMT基因在甜菜M14品系的茎中表达量最高,盐胁迫下BvM14-CCoAOMT基因在甜菜M14品系茎和叶中均显著上调表达。亚细胞定位研究发现BvM14-CCoAOMT蛋白在细胞各个亚细胞部位均有分布。本研究为进一步深入研究BvM14-CCoAOMT基因的功能奠定了理论与材料基础。     

甜菜M14品系特异表达基因ESTs的生物信息学分析

甜菜M14品系具有无融合生殖特性,为了获得M14品系特异表达的基因,本实验室前期利用抑制消减杂交(SSH)和mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术对M14品系和能够进行有性生殖的栽培甜菜A2Y品系进行了基因特异表达研究,获得了298条M14品系特异表达基因的ES-Ts。对这些ESTs进行生物信息学分析并进行了GO分类,筛选出5条可能与基因表达调控和细胞周期调控相关的ESTs,为进一步获得这些基因的全长序列并研究其功能奠定了基础,也为今后能在甜菜M14品系中寻找并克隆与无融合生殖相关的基因提供了可靠的保证。     

几丁质酶基因在转基因烟草中表达效率的检测

采用氨基葡萄糖法检测转基因烟草植株叶片几丁质酶活力，结果表明几丁质酶基因在转基因植株中酶活力增强，与β—1,3-葡聚糖酶基因的协同作用下酶活性最强，几丁质酶活力的测定对外源基因表达效率的检测是可行的．     

拟南芥胚胎发生基因LEC1对水稻胚胎发育的遗传学效应

从拟南芥的球型胚-心型胚期荚果cDNA中,通过特异引物PCR,克隆到胚胎发生调控基因LECl.将克隆的目的基因构建到植物表达载体pWM101中,将其置于35S启动子下游,并通过PCR和酶切实验验证,获得了在植物中组成型表达LECl的表达载体.提取表达载体质粒,用Nhe Ⅰ酶切质粒,使其成线型,通过花粉管通道法分别转化可育系水稻0099和不育系金23A.转基因的不育系金23A结种子,但胚乳发育缺陷,将胚乳缺陷的种子安于无激素的1/2 MS培养基中培养,其中有一株发芽,长成外观正常的植株,另一株则只长出根.提取其DNA,以特异引物P35S和P2进行检测,为阳性转基因个体.不经授粉,从不育系获得具萌发能力的种子,说明LECl基因在单子叶的农作物水稻中能促进胚胎发生.通过叶片基因组DNA特异引物PCR分子检测,证明从可育系水稻0099也获得阳性转基因植株.     

CCoAOMT基因反义表达载体的构建及转化苎麻的研究

采用RT-PCR的方法,克隆烟草木质素合成关键酶咖啡酰甲基转移酶(CCoAOMT)基因并测序．构建CCoAOMT基因反义表达载体,通过农杆菌介导法对苎麻进行遗传转化,得到转基因植株．采用PCR方法对其进行分子检测．为利用基因工程技术,创造适合我国国情的环保型低木质素苎麻转基因新品种奠定了基础。     

MADS-box基因cDNA片段在甜菜染色体上的定位

以甜莱MADS-box基因cDNA片段为探针,采用Southern杂交证实了其在甜菜基因组中为低拷贝序列;利用荧光原位杂交技术(FISH)将其初步定位在二倍体栽培甜菜(Beta vldgaris)A2Y的第2号染色体上.研究成功地实现了小片段低拷贝的功能基因在甜菜染色体上的定位,为今后甜菜遗传物理图谱的构建提供了有效可行的方法.     

C_3启动子克隆及荧光素酶报告基因载体构建

为克隆C_3基因启动子序列,构建C_3基因启动子荧光素酶报告基因载体,运用PCR的方法从血液中提取到的基因组DNA中获得目的基因,双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体上,构建C_3基因启动子报告基因载体.构建的pGL3-Basic-C_3-promotor重组质粒和内参质粒SV40瞬时转染Hela细胞,检测荧光素酶活性.结果表明,PCR扩增出C_3基因启动子片段;双酶切及测序鉴定重组体构建正确;转染Hela细胞后经双荧光素酶报告基因检测确定重组体有启动子活性.成功构建了C_3启动子报告基因载体,在细胞系中进行初步活性分析得知所克隆的C_3基因调控序列包含启动子活性区域.     

一种具时滞的基因表达模型的稳定性分析

给出了一种具有双时滞的基因表达模型.分别以滞量和蛋白质降解率与mRNA降解率的比例系数为参数,通过对模型的线性部分特征方程根的分布分析,讨论了平衡点的稳定性,详细地研究了该基因表达模型的动力学性质,从而说明了该模型始终处于稳定的状态.并且通过数值仿真例子对结论进行了证明.结论在基因表达调控中有很重要的理论意义.     

Bacillus subtilis碱性果胶酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

针对实验室筛选获得的Bacillus subtilis,设计2对引物扩增出编码碱性果胶酶基因pelG1和pelG2,酶切后分别连接到大肠杆菌分泌表达载体pET-22b(+)多克隆位点上得到重组载体,在BL21( DE3)中表达并进行了分析.     

三线闭壳龟的生物学特性及人工养殖

文章介绍了三线闭壳龟(Cuora trifasciata)的生物学特性及人工养殖技术,并分析了目前的饲养现状及存在的主要问题,提出了相应的对策.     

对跳箱分腿腾跃恐惧心理的探讨

体操教学过程中,女学生易对跳跃项目产生紧张、恐惧心理,导致技术动作无法完成或变形,影响体育课教学质量.通过对实验班采用放松训练、内心演练法、默念暗示等心理训练手段,减轻了学生紧张、恐惧的心理情绪,增强了自信心和勇气,提高动作完成的速度与质量.     

钢筋混凝土连续箱梁温度收缩应力计算

提出了钢筋混凝土连续箱梁温度收缩应力计算的一种模式,并对这种计算模式作了详细阐述,为工程技术人员采取适当工艺和养护方法来控制混凝土早期裂缝的发生提供了一种依据.