Caco-2细胞模型建立及其在纳米脂质体包裹胰岛素体外吸收研究中的应用

为建立Caco-2细胞模型，并用于纳米脂质体包裹胰岛素的体外吸收特性研究．通过Caco-2细胞培养于Transwell上，培养20余天，使其生长分化成单层小肠上皮样细胞，然后以单层细胞电阻，电镜观察小肠上皮结构的形成，碱性磷酸酶反应测定单层细胞极性以及对葡聚糖的通透特性等指标对该模型进行评估，并运用Caco-2细胞模型，对胰岛素和纳米脂质体胰岛素进行通透特性研究．结果表明，Caco-2细胞形成刷状缘及紧密连接结构，碱性磷酸酶活性集中在刷状缘侧，单层细胞电阻达到300～500Ω／cm^2，类似小肠上皮．纳米脂质体包裹后，胰岛素的通透量显著增加．说明纳米脂质体包裹可提高胰岛素的通透性，可以作为胰岛素口服用药的有效方法．     

转运葡萄糖苷类化合物的Caco-2细胞模型建立

建立转运葡萄糖苷类化合物的Caco-2细胞模型,为葡萄糖及葡萄糖苷类化合物肠道吸收研究提供基础。通过对Caco-2细胞最适培养基的选择、单层致密性的测定、单层通透性和细胞两侧碱性磷酸酶活性比的测定、单层亚显微结构的观察、细胞葡萄糖转运蛋白SGLT1和GLUT2的mRNA及蛋白表达水平的分析,建立可靠的细胞模型。研究表明:Caco-2细胞的最适培养基为添加体积分数15%血清的DMEM低糖培养基;Caco-2细胞在14～17d的跨膜电阻趋于稳定,苯酚红的表观渗透系数达到0.49×10-6~0.51×10-6cm·s-1,微绒毛分化成熟,细胞两侧碱性磷酸酶比值达到2.0以上。葡萄糖转运载体SGLT1的mRNA表达在14d时显著高于17d和21d,葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT2的蛋白表达在14、17、21d无显著差异(P<0.05)。Caco-2细胞培养14～17d即可建立可靠的肠细胞吸收模型,用于葡萄糖及葡萄糖苷类化合物吸收的体外研究。     

依那普利合用氢氯噻嗪倍他乐克治疗高血压166例疗效观察

目的：观察口服小剂量依那普利、氢氯噻嗪及小剂量倍他乐克治疗原发性高血压的临床效果．方法：实验组86例高血压患者，口服依那普利5mg，2次／d，氢氯噻嗪12．5mg，2次／d，倍他乐克12．5mg，2次／d；对照组80例高血压患者，口服依那普利5mg，2次／d．结果：实验组比对照组临床疗效显著提高．结论：联合应用小剂量依那普利、小剂量氢氯噻嗪及小剂量倍他乐克治疗高血压与单独应用依那普利可使治疗效果显著提高．     

氢氯噻嗪片溶出速率测定研究

用转篮法测得我国两家制药厂生产的氢氯噻嗪片参数分别为：A制药Kr＝0．0815，T50＝11，Td＝15，m=0.8,B制药厂Kr=0.1064,T50=5,Td=10,M=0.69.     

浅析替米沙坦氢氯噻嗪用于高血压治疗对血压变异性的影响

目的观察替米沙坦氢氯噻嗪在使用的过程中对于高血压患者所产生的影响。方法对于158例中度或者轻度的高血压患者进行调查,并对其进行分类,分别通过替米沙坦氢氯噻嗪胶囊进行治疗,用量为40~80mg,其中包含了12.5mg氢氧噻嗪。在进行8周的治疗之后,对于动态血压进行检测。结果治疗之前,对于非勺形高血压组来说,另一组在24个小时之内,日间以及夜间的收缩压和舒张压都有着明显降低的标准差。在治疗之后,两组在24个小时之间的标准差有一定的降低,但是并没有统计学意义。结论替米沙坦氢氯噻嗪对于高血压患者血压的变异有着降低作用。     

氢氯噻嗪药物共晶的制备、表征及量化计算

以氢氯噻嗪(HCT)作为药物活性成分(API),以烟酰胺、烟酸作为共晶形成物(CCF),在室温条件下制得2种药物共晶HCT·NCA(1)、HCT·NNA(2).通过X-射线单晶衍射测定了它们的晶体结构,并进行了元素分析、红外光谱、X-射线粉末衍射表征.此外,利用Gausian 03W程序,在B3LYP/6-31G(d)水平上对2种化合物进行了结构全优化,对其分子轨道能量、前线分子轨道、自然键轨道(NBO)等进行了量子化学计算分析.     

氯沙坦钾与氢氯噻嗪联合治疗高血压的应用

作为常见慢性病之一,高血压是导致心脑血管疾病的最危险因素之一,极易诱发心脑血管的并发症,致残、致死率极高。联合应用两种或两种以上的降压药物已成为降压治疗的基本方法。研究发现,固定复方制剂比降压药物联用具有组方剂量低、副作用小,使用方便及价格相对低廉等优势。氯沙坦钾氢氯噻嗪片剂是一种固定复方剂,由血管紧张素II受体拮抗剂和利尿剂组成,是这种组合的首例,其在1995年于法国上市,至今已经广泛应用20年,具有良好的疗效和耐受性。该文主要从联合用药和固定复方制剂方面阐述氯沙坦钾氢氯噻嗪治疗高血压的机理、治疗剂量、临床疗效以及同类药物间的对比,分析氯沙坦钾氢氯噻嗪治疗高血压的确切疗效,从而更好地指导临床用药。     

火焰原子吸收法测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中氯化钾含量

针对复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中钾含量的标志问题,采用马弗炉高温灰化、盐酸溶解残渣的前处理方式,采用火焰原子吸收法测定胶囊中钾含量。通过实验确定灰化温度为800℃,保持6 h,用盐酸溶解残渣,用NaCl作防电离剂。本方法线性范围为0.5~4.0 mg/L,线性方程为y=0.126 2x+0.001 3,相对标准偏差为0.39%,平均回收率达99.98%。该方法简便快速,准确度高,实用性强。     

两个Caco-2细胞系模型铁生物有效性评价效果研究

研究Caco-2细胞吸收转运模型(模型Ⅰ)和吸收转化模型(模型Ⅱ)对铁生物有效性的评价效果.用不同浓度,pH的硫酸亚铁溶液及稻米分别处理两种模型的Caco-2细胞单层22 h后,测定两种模型细胞铁吸收差异.结果表明Caco-2细胞铁蛋白形成量随铁浓度增加而增加,且模型I高于模型Ⅱ,当铁浓度≥25μmol.L-1时,差异达显著水平(p0.05);细胞铁蛋白形成量和转运铁量均与pH呈负相关,两模型间达到显著相关(p0.05).模型Ⅰ和模型Ⅱ均可用于膳食铁生物有效性评价,高铁浓度时,模型Ⅰ效果优于模型Ⅱ.     

固相萃取-高效液相色谱法测定水中氢氯噻嗪

为准确测定水体中的痕量氢氯噻嗪含量,建立了固相萃取（SPE）-高效液相色谱法（HPLC）联用的测定方法。首先,将采集的水样（1 000 mL）进行过滤并调节pH值后,通过活化后的HLB固相萃取柱进行净化;然后,用10 mL纯甲醇进行洗脱提取,氮吹至近干,用1 mL甲醇定容;最后,采用HPLC检测所得溶液。检测条件：色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇∶水（二者体积比为70∶30）,流速为1 mL/min,等度洗脱,检测波长为270 nm,采用外标法定量。结果表明:氢氯噻嗪质量浓度为0.1~50.0 μg/L时,待测物的质量浓度和色谱峰面积成正比例线性关系,线性方程为A=221.49c+3 915,R²=0.999 7[WT];供试品在24 h内放置稳定,平均回收率为99.90%（RSD值为1.8%,n=5）,精密度为1.1%。所建立的方法操作简便,具有较高的精密度,检出浓度低,采用的流动相配制简单,对环境污染小,可用于水环境中痕量氢氯噻嗪的检测、分析及风险评估。     

甘草酸18位差向异构体不同配比和浓度对Caco-2细胞P-gp功能的影响

研究甘草酸18位差向异构体18α-甘草酸(18α-Gly)与18β-甘草酸(18β-Gly)不同配比和浓度对结肠癌(Caco-2)细胞P-糖蛋白(P-gp)功能的影响,选择最佳浓度比例.建立细胞模型,选择甘草酸总浓度为1∶10∶30∶60∶120∶240 μmol/L,18α-Gly与18β-Gly物质的量比分别为10∶0、8∶2、6∶4、5∶5、4∶6、2∶8、0∶10,根据细胞存活率,选择合适浓度比例,利用流式细胞仪测定细胞内荧光强度,寻找荧光强度最大的浓度比,即对P-gp抑制作用最强,P-gp功能最弱.研究结果表明甘草酸总浓度为1 μmol/L时,随着18α-Gly比例的减少,荧光强度逐渐减弱,P-gp诱导作用逐渐增加.甘草酸总浓度为10 μmol/L和60 μmol/L时,随着两者物质的量比的变化,荧光强度变化明显;当总浓度为10 μmol/L,n(18α-Gly)∶n(18β-Gly)=4∶6时,荧光强度较强,抑制作用明显;当总浓度为60 μmol/L,两者物质的量比为5∶5时荧光强度最强,抑制作用最强.     

Comparison of intestinal absorption of two insulinmimic vanadyl complexes using Caco-2 monolayers as model system

Intestinal absorption of two oxovanadium complexes, vanadyl acetylacetonate (VO(acac)2) and bis-(maltolato)-oxovanadium (VO(ma)2), has been compared using Caco-2 monolayers as a model system. The two compounds are similar in chemical structures but different in glucose-lowering effects. Our experimental results show that they are both transported via passive diffusion with apparent permeabilty coefficients (apical→basolateral) of (82.0 ± 6.7) ×10-7 and (14.6 ± 0.7) ×10-7 cm·s-1, respectively. This suggests that absorptivity of VO(acac)2 is much higher than that of VO(ma)2. This difference may be related to the metabolism of either compound, or its ligand, or both in the course of the transport. However, This difference in absorption will cause the great difference in bioavailability, which might account for better efficacy of VO(acac)2 than VO(ma)2 as the insulin-mimic agent.     

Permeation of vanadium（Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ）-dipicolinate complexes across MDCK cell monolayer and comparison with Caco-2 cells

The permeation and eytotoxicity of three insulin-mimetic vanadium（Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ）-dipicolinate complexes were studied using the MDCK cell monolayer in comparison with the Caeo-2 cells. On MDCK cell monolayer, the apparent permeation coefficients （Papp） were estimated to be （7.5±1.0）×10^-6, （1.0±0.2）×10^-6, （1.7±0.4）× 10^-6cm/s for V（Ⅴ）, V（Ⅵ）, and V（Ⅲ）-dipie complexes, respectively. The permeability of V（Ⅴ）-dipie complexes is much better than the others, which is in agreement with its better hypoglycemie effect in animal tests. On Caeo-2 cell monolayer, Papp were found to be in the range of 1-3×10^-6 ends and not to be affected by excessive amounts of dipieolinate ligand. By contrast, the permeability in the AP→BL direction across the MDCK monolayer increased greatly in the presence of free ligands, suggesting existence of active transport mechanism of vanadium complex anions on the MDCK cells. The eytotoxieity of the three complexes was found similar and the IC50 were measured in the range of 0.6-0.9 mmol/L for MDCK cells and 1.6--2 mmol/L for Caco-2 cells. The cytotoxicity of three vanadium complexes was conceivably in consistence with their permeability, suggesting that the toxicity, permeation and cellular metabolism of vanadium complexes are closely related.     

Permeation of vanadium(III,IV,V)-dipicolinate complexes across MDCK cell monolayer and comparison with Caco-2 cells

In resent years, great attention has been paid to the in-sulin-mimetic property of various vanadium compounds. Although the mechanism of the hypoglycemic effect of vanadium compounds has not been elucidated, the major problems limiting further clinical applications for inor-ganic vanadium compounds include low oral absorption (<10%)[1] and gastrointestinal stress[2―5]. Hence, a series of vanadium complexes with organic ligands have been syn-thesized, such as bis(maltolato) oxovanadium(IV) (V…     

Construction and application of L929 cell model expressing human bcl-2 protein

Recombinant eucaryotic expression vector pLXSN/s-bcl-2 has been constructed by cloning human bcl-2 cDNA containing the full-length open reading frame into the vector pLXSN in sense orientation, and a mammalian cell model expressing human bcl-2 protein has been established by electroporating the recombinant vector into mouse L929 cells. bcl-2 expression in L929 cells has no effect on the cell growth and survival under normal culture conditions, but it can enhance the survival of the cell in the challenge of some apoptosis-inducing stimuli, including tumor necrosis factor α(TNF α) and staurosporine (STS).     

胡椒碱对脂多糖和金黄色葡萄球菌抑制人结肠腺癌细胞系表达防御素的拮抗作用

目的:研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)和灭活金黄色葡萄球菌(SAC)菌体抑制人结肠腺癌HT-29和Caco-2细胞表达防御素(Defensin)的影响.方法:WST-1法检测PIP对HT-29和Caco-2细胞增殖的作用;定量PCR(qRT-PCR)检测人α防御素DEFA5(HD5)和DEFA6(HD6),人β防御素HBD-1以及胰岛再生源蛋白(Reg)Reg IIIγ等mRNA的表达水平.结果:PIP处理可剂量依赖性地抑制HT-29和Caco-2细胞的增殖,半数抑制浓度IC50分别为328.5μmol/L和155.1μmol/L,表明PIP对细胞的毒性较小;定量PCR检测显示,PIP处理对LPS或SAC下调HT-29和Caco-2细胞DEFA5和DEFA6 mRNA表达水平具有显著的拮抗作用,对DEFB1和Reg IIIγmRNA的表达没有明显影响.结论:胡椒碱可能通过拮抗病原体诱导细胞表达防御素的抑制作用,进而发挥其抗肠炎作用.     

辛伐他汀对C2C12细胞中utrophin基因表达的影响

本文采用MTT法,观察不同浓度辛伐他汀(0,1,3,10,30 and 100μmol/L)对C2C12细胞活力的影响,并通过定量RT-PCR方法对utrophin和TNF-α基因的mRNA的表达进行了研究.随着辛伐他汀浓度和作用时间的增加,C2C12细胞的活力在降低;不同浓度辛伐他汀对utrophin和TNF-α的mRNA表达具有影响作用,为阐明辛伐他汀的肌毒性作用机理提供了新的思路.