人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

单克隆抗体亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗体的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱纯化得到ＩｇＧ纯品,分子量为１５０ｋＤ（重链５５ｋＤ,轻链２０ｋＤ）,与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗－体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。尿激酶粗品经单抗－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化后,所得尿激酶制品比活为９×１０－４～１．７×１０－３ｍｏｌ／ｓ·ｍｇ－１,纯化倍数为１５～３０倍,酶活性回收率在５０％以上。     

单克隆抗本亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗本的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ纯化得到ＩｇＧ纯品，分子量为１５０ＫＤ，与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达、复性及分离纯化

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ—ＰＡ）。ＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中，在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％．以醋酸钟显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ—ＰＡ表达条带，进行复性处理．Ｒ性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ—ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ—ＰＡ．     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

脱落酸受体及其基因的分子免疫学研究(英文)

发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋白,并用１％琼脂糖凝胶电泳时,发现其中存在约３００个核苷酸的ｒＲＮＡ分子。用识别ＡＢＡ结合蛋白的抗体筛选ｃＤＮＡ表达文库,从２００,０００个独立噬斑中获得１２０个编码玉米１７ｓＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆和１个ｃＤＮＡ编码结合蛋白的ｃＤＮＡ克隆（２４ｃＤＮＡ）。２４ｃＤＮＡ有１０７５个碱基对,含编码２５４个氨基酸的开放阅读框架。其二,制备了识别抗ＡＢＡ单克隆抗体的独特型抗体（ａｎｔｉ－Ｉｄ）,它具有模拟并竞争ＡＢＡ的能力。用上述两类免疫探针定位了植物细胞中的ＡＢＡ结合蛋白。发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋?     

ConA—Sepharose 4B的制备及其对血浆糖蛋白的亲和效率

报道了ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的制备方法，经测定Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ对ＣｏｎＡ的偶联效率达８５％，该亲和凝胶对血浆糖蛋白有亲和吸附．其亲和效率为１．８ｍｇ（蛋白／ｍｌ凝胶）．     

人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化

将插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｂｅ的人红细胞生成素受体ｃＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶解,分离得到的基因片段,插入到经ＥｃｏＲＩ和ＲａｍＨＩ消解的表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ中,得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ。重组质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ含有ｔａｃ启动子,ＥＰＯＲ膜外结构域基因５端与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）编码基因融合,阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ｈＥＰＯＲ,重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱一步纯化,能除去绝大部分杂蛋白,基本达到纯化的效果。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫杂交分析显示,重组表达产物确系人红细胞生成素受体     

黑曲霉单宁酶的纯化及部分性质研究

黑曲霉在五倍子单宁的诱导下产生单宁酶。通过（ＮＨ４）２ＳＯ４分形沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０凝胶过滤,从黑曲霉的发酵液和菌丝中纯化得到凝胶电泳均一的单宁酶。酶作用的最适温度为３０℃,最适ｐＨ值为５．５,在温度１０－３０℃和ｐＨ４－６之间保持稳定,金属离子对单宁酶没有的激活作用,Ｆｅ＾２＋和Ｍｎ＾２＋则对酶有抑制作用。     

河田鸡线粒体DNA物理图谱

运用差速离心法、蛋白酶Ｋ及ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化河田鸡（ＧａｌｕｓｇａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓＨｅｔｉａｎｂｒｅｅｄ）的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）．用１１种限制酶对其进行单酶切分析,结果表明,ＡｖａＩ、ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｐａＩ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ和ＳｔｕＩ在河田鸡ｍｔＤＮＡ上分别有５、２、４、５、１、３、４、３、３和＞９个酶切位点,Ｓｃａｌ在不同个体河田鸡ｍｔＤＮＡ上检测出两种限制性格局,分别有２和３个酶切位点．此外,还用ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｐａＩ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ和ＳｃａＩ进行双酶切,构建了ｍｔＤＮＡ的物理图谱     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子的纯化和鉴定

牛碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＲ）ｃＤＮＡ在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，高压均质破碎菌体后，上清液以Ｈｅｐａｒｉｎ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ亲和层析、Ｃ１８反相ＨＰＬＣ分高纯化得到一分子量为２．２５×１０￣４的蛋白质，其等电点为９．３４，并能与抗牛ｂＦＧＦＭｃＡｂ反应；其氨基酸组成与ｂＦＧＦ文献值一致；活性分析结果表明此蛋白质不仅能促进ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞增值，ＥＤ＿（５０）＝０．８５ｎｇ／ｍｌ，而且能促进鸡胚尿囊膜微血管增生，所得蛋白为具有生物活性的重组碱性成纤维细胞生长因子。     

用柱色谱纯化牛红血球超氧化物歧化酶

比较了几种初步纯化超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的方法,并进行了优化组合。研究了用软基质阴离子交换柱（ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ）和凝胶柱（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ）分离纯化ＳＯＤ的工艺条件。利用建立的方法纯化了来自牛血的超氧化物歧化酶,整个工艺过程总活性回收率为６５％,比活为５４２９Ｕ／ｍｇ,纯化倍数提高至６１倍。     

长吻Wei肝脏线粒体DNA的研究

采用密度梯度离心法及ＤＮａｓｅ Ｉ、ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化了长吻Ｗｅｉ肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔ ＤＮＡ）。用９种限制性内切酬谢ｍｔ ＤＮＡ进行了分析。Ｘｈｏ Ⅰ，Ｂｇｌ Ⅱ、ＥｃｏＲ Ⅰ、Ｐｓｔ Ⅰ、Ｂｇｌ Ⅰ、ＢａｍＨ Ⅰ、Ｈｉｎｄ Ⅲ、Ｓａｌ Ⅰ在长吻Ｗｅｉ ｍｔＤＮＡ分子上分别具１、３、３、２、１、２、４、７、０个切点。ｍｔ ＤＮＡ分子量约１０．３１×１０＾６道尔顿，大小为１６．６９ｋｂ。根据     

核酸的分子静电势（I）──C－DNA的分子静电势

对于序列聚（ｄＧ－ｎｒ）和聚（ｄＡ－ｄＴ）来说，本文介始了Ｃ－ＤＮＡ活性位置的分子静电势（ＭｏｌｅｃｕｌｅｒＥｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃＰｏｔｅｎｔｉａｌ）的计算方法和结果［１］．描述了双螺旋表面外壳（ＳｕｒｆａｃｅＥｎｖｅｌｏｐｅｓ）上势的分布，并将其与Ｂ－ＤＮＡ有关结果［２－４］作了比较．     

人胰岛素样生长因子—Ⅰ的基因克隆,融合表达及产物纯化

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法,以ＩＧＦ－ＩｃＤＮＡ为模板,扩增ＩＧＦ－Ｉ的基因。在序列测定确证后,将其定向克隆到载体ｐＥｘＳｅｃＩ上,构建了ＩＧＦ－Ｉ融合表达载体ｐＥｘＩＧＦ,经ＩＰＴＧ诱导表达后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：含有重组表达质粒的菌株可表达出约３２．５８％的２６ＫＤ融合蛋白,且主要以可溶性形式存在。经ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析一步纯化后,可获得纯度约９０％的融合蛋白,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ分析,免疫学活性呈阳性反应。     

豇豆幼叶多胺氧化酶的分离纯化

依次经粗提、φ为３５ ％ ～６０％ 硫酸铵分步沉淀、φ为７０ ％ 丙酮沉淀、ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃｌ４Ｂ柱层析和羟基磷灰石柱层析等步骤后首次从豇豆幼叶得到电泳均一的、亚基相对分子质量约为７０ ０００ 的多胺氧化酶． 纯化倍数为４７３３, 产率为１３１ ％ ． 该酶在０１ ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（ｐＨ７０ ～７５） 中较为稳定, 冷冻（ － １５ ℃） 贮存则可保持２０ ｄ 内不失活     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼肝脏线粒体ＤＮＡ进行了分析，其分子太小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔＩ，ＢａｍＨＩ，ＸｂａＩ，ＢｇｌＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＢⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点。根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱。     

绿色乳杆菌α－羟基戊二酸脱氢酶的纯化和特性研究

本文对绿色乳杆菌（Ｌ．Ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）Ｂ１７５产生的α－羟基戊二酸脱氢酶用硫酸铵盐析；ＤＥＡＥ—纤维素柱层折；超滤浓缩；苯基琼脂糖凝胶（ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ）疏水层析等方法纯化，使酶的纯度提高１１７倍。通过ＨＰＬＣ和等电聚焦测得该酶的分子量约为６６，０００，等电点为４．２。酶催化作用的最适ｐＨ５．５，最适温度为６０℃，对α—酮戊二酸和ＮＡＤＨ的Ｋｍ值分别为０．１４×１０（－３）Ｍ和０．０３×１０（－３）Ｍ。     

两种尿激酶原变体（Ala^175→Ser,Tyr^187→His,Lys^300？…

利用定点突变方法,构建了尿激原变体基因ｍｕｋ１（Ａｌａ＾１７５→Ｓｅｒ,Ｔｙｒ＾１８７→Ｈｉｓ,Ｌｙｓ＾３００→Ｈｉｓ）及ｍｕｋ２（Ａｌａ＾１７５→Ｓｅｒ,Ｔｙｒ＾１８７→Ｈｉｓ）。两种尿激酶原变体在大肠杆菌ＢＬ２１中表达得到包涵体,经体外变复性,ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析,Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ吸附除支双链尿激酶,得到的蛋白均为银染一条带。用人工合成的发色底物Ｓ２