苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析

免疫抑制因子A (Immune Inhibitor A, InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt 4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt 4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOF MS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前已开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA. InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.     

如何防治转Bt基因棉害虫

<正> 1.加强监测。要特别注意监测转Bt基因棉没有抗性的棉蚜、棉盲蝽、棉红蜘蛛等害虫,及时掌握发生的虫情进行防治。棉铃虫随着棉株的生长,毒杀作用降低,要特别注意三、四代棉田幼虫存活量。一般掌握棉田百株三龄幼虫达10-15头时,应及时施药防治。 2.保护天敌。由于转Bt基因棉棉田施药次数减少,害虫天敌种群增加,化防时要选用对天敌杀伤力小的蚍虫啉、虫螨克、     

转Bt基因抗虫棉中后期管理

由于转Bt基因抗虫棉中后期生长发育特点与常规棉不同,其栽培管理技术也不相同.根据其中后期生育特点,采取相应的配套技术措施进行管理,是实现高产、优质、高效的关键.     

转Bt基因抗虫棉中后期管理

由于转Bt基因抗虫棉中后期生长发育特点与常规棉不同，其栽培管理技术也不相同。根据其中后期生育特点，采取相应的配套技术措施进行管理，是实现高产、优质、高效的关键。     

抗虫棉害虫防治策略

<正> 近几年,转Bt基因抗虫棉(下称抗虫棉)在民权县得到大面积推广。主要品种为新棉33B、荷棉3号。由于抗棉铃虫效果好,缓解了棉铃虫防治的压力,减少了防治成本和农药的使用量。但由于抗虫棉的大面积推广种植,使棉田生态环境发生了很大变化,引起害虫种群及为害程度的变化。     

喂食Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠类胰蛋白酶的影响

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化中起着重要作用而受到广泛研究.本研究提取了棉铃虫4龄幼虫的中肠BBMV蛋白,利用SDS-PAGE分析鉴定到喂食Cry1Ac毒素24 h后,棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的表达量呈明显下降趋势.该下降趋势很有可能是作为一种昆虫对Bt毒素作用的早期反应,通过影响Bt毒素在中肠中的酶解活化过程,从而为昆虫提供即时保护.     

两种取食刺激物对AcNPV和Bt增效的作用

取食刺激物使害虫幼虫在初期摄入更多的活性成分能提高病毒感染效果.室内以蜂蜜和新鲜小白菜汁分别添饲银纹夜蛾幼虫;测定了其对AcNPV和Bt的增效作用,结果表明:在中低浓度AcNPV时,蜂蜜和新鲜小白菜汁液刺激银纹夜蛾幼虫初期取食,其感染后前3 d的粪便量比只有AcNPV处理的增加34.51%～79.60%,幼虫死亡率提高8.89%～13.33%,LT50缩短1.4～2.7 d.蜂蜜提高了Bt对银纹夜蛾幼虫的死亡率,但死亡速度未见明显加快.     

转cry1Ab/Gc基因玉米的不同转化事件Bt蛋白表达和抗虫性分析

分析不同转化体Bt蛋白表达量和评估其抗虫性,进而筛选优异转化事件是转基因玉米新品种培育研究中的重要环节.为分析转cry1Ab/Gc基因玉米中Bt蛋白表达特性与抗虫性的关系,筛选优秀转化事件,研究以三个转化事件HG-1、HG-2、HG-3为试验材料,利用ELISA检测、玉米螟生测等技术,在室内和田间详细分析心叶期和抽丝期玉米抗虫蛋白表达量,并评估抗虫性.研究结果表明,同一转化事件不同组织或器官Cry1Ab/Gc蛋白含量存在显著差异,均表现为叶茎根;不同时期叶片Cry1Ab/Gc蛋白含量存在显著差异,表现为抽丝期心叶期;不同转化事件间,心叶期转化事件HG-1的叶片、抽丝期转化事件HG-1和HG-2的茎中Cry1Ab/Gc蛋白的含量明显高于其他材料.室内和田间亚洲玉米螟生测试验结果表明:不同转化事件抗虫性差异显著,转化事件HG-1在心叶期和抽丝期亚洲玉米螟抗性显著高于其他两个玉米转化事件,与该时期Cry1Ab/Gc蛋白高表达的试验结果一致.本研究结果证实不同玉米转化事件Bt蛋白表达量显著差异,心叶期和抽丝期Bt蛋白表达量与亚洲玉米螟抗性呈正相关,可以作为抗虫转基因玉米优秀转化体初步筛选的重要技术指标,具有可操作性强、技术稳定性好、节省时间等优势,为抗虫转基因玉米新品种培育研发提供数据参考.     

抗虫春棉——中植棉2号

审定编号 豫审棉2007004 选育单位 河南省新乡县七里营新植原种场 品种来源 中植372导入Bt杀虫基因 特征特性 中植棉2号为单价转基因抗虫常规春棉品种,生育期131天。该品种出苗整齐度好,前期长势强,中后期长势稳健;植株塔型,平均株高109.7厘米,果枝较长,茎秆茸毛多;     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定

已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.     

棉花吐絮期主要栽培措施

麦套转Bt基因春棉，每年都有早衰发生，但轻重不同。棉株早衰，造成减产减收。如何防止棉株早衰，应抓好以下关键措施预防。     

杀蚊苏云金芽孢杆菌Cry4Aa和Cry4Ba晶体蛋白结构的计算机对比分析

运用生物信息学软件对苏云金芽孢杆菌毒素Cry4Aa和Cry4Ba的基本参数、一级结构、二级结构、三级结构和跨膜区进行了预测比较.它们在一级结构上有较大差异,但二级结构和跨膜区相似,三级结构中各毒素的结构域Ⅱ、Ⅲ之间基本相似,结构域Ⅰ之间差异较大.Cry4蛋白之间的结构相似性和差异性与其作用机理和杀虫特异性有关.为分析杀蚊蛋白作用的分子机制、定点突变及研究高效的Bt生物杀虫剂有效控制蚊虫提供参考.     

响应面法优化苏云金芽胞杆菌YC-10发酵培养基

为获得杀线虫Bt菌株YC-10最佳培养基配方,以发酵液中伴胞晶体蛋白浓度为评价指标,利用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法对YC-10的培养基配方进行室内摇瓶优化筛选.实验结果表明:大豆饼、玉米粉、氯化钙和磷酸氢二钾为4个显著影响因子,YC-10最优培养基配方为:黄豆饼25.73 g/L,玉米粉12.57g/L,CaCl_20.25 g/L,K_2HPO_40.43 g/L,ZnSO_40.20 g/L,MgSO_40.20 g/L,MnSO_40.25 g/L,FeSO_40.25 g/L.     

双流板坯连铸机扇形段液压系统实际应用及优化

介绍双流板坯连铸机扇形段液压回路工作原理及特点,并根据使用过程中出现的问题(驱动、夹紧动作不同步;管路泄漏频繁;管路拆装不方便;驱动缸断;铸坯鼓肚等)对双流板坯连铸机扇形段液压原理及液压管路布局进行了优化。     

4种观叶花卉水培营养液的效果比较

选择４种名贵观叶花卉（银皇帝、富贵竹、粉黛、白掌）采用水培技术,对其营养生长所需４种营养液（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）的组万万分及含量进行了比较观测。结果：营养液Ｂ、Ｃ对银皇帝、富贵竹、粉黛及白掌均适宜;营养液Ａ对白掌较为适宜;除Ｃ、Ｄ营养液对白掌的叶片增宽有明显地抑制作用外,对其它株的效果差异不十分明显。     

改进的直觉模糊集的熵的公式

对直觉模糊熵计算公式存在的不合理性及不全面性进行分析、补充与改进,在考虑犹豫度和模糊度的影响下,提出一个新的直觉模糊熵计算公式,其能够反应直觉模糊集的直觉性和模糊性,全面描述直觉模糊集的不确定程度,弥补了现存直觉模糊熵公式的缺陷;实例分析验证了所提熵公式的正确性及合理性。     

印刷操作中墨色不一致的影响因素及解决方案

<正>印刷墨色均匀一致是印刷产品质量控制的基本内容,而印刷墨色不一致则是印刷过程中的常见质量问题。纵观印刷工艺过程,产生印刷墨色不一致的原因是多方面的,有工艺技术不当、原材料特性不良及操作技术不当等方面的原因。本文,笔者从输墨量、油墨的稀稠及印刷的压力等操作技术方面分析印刷墨色不一致的原因,     

四种澳大利亚果蜡对芦柑的保鲜效应

本文研究了室温条件下4种澳大利亚水果蜡液--Castke875,Castke873,Citrus Clear及Carnauba Citrus对芦柑的保鲜效应．结果袁明：4种果蜡均能减少芦柑维生素C和,总酸的损耗,降低果实的失重率,但对总可溶性固形物和还原糖的影响都不明显．除此之外,Carnauba Citrus对保持果实外观品质及风味具有良好的作用,可有效延长保鲜时间;Citrus Clear其它效果不明显;Castke 875,Castke873两种果蜡则加速了果实的枯水、褐变、腐烂．因此,认为Carnauba Citrus的保鲜效果最好．     

涂料科技之花

<正> 郑州油漆厂最近有几项科技成果通过鉴定: 一、醇溶性真空镀铝漆醇溶性真空镀铝涂料是以萜烯树脂及乙醇作溶剂的真空镀铝涂料,它不但在质量方面能与过氯乙烯型真空镀铝涂料相媲美,而且不污染大气,对直接操作工人的毒性很小,不影响人体健康,是目前一种比较理想的真空镀铝涂料。     

离心泵叶轮的汽蚀破坏及设计优化

<正>由于使用环境所限,水泵发生汽蚀不可能完全避免。本文中,笔者主要讨论离心泵的汽蚀及相关问题。衡量泵性能的主要参数有流量Q、扬程H、转速n、汽蚀余量NPSHr及功率P和效率η。汽蚀对泵的安全稳定运行有着巨大的威胁,因此如何避免泵在运行中出现汽蚀就成为水泵设计和运行中的重点问题。