Caspase-3抑制剂的筛选体系构建及药物筛选

Caspase-3是细胞凋亡途径中重要的靶蛋白,研究Caspase-3抑制剂或激活剂,对治疗心脑血管疾病、肿瘤等具有积极意义.利用原核表达系统高效表达Caspase-3,并以表达的粗酶构建基于Caspase-3抑制剂的体外高通量筛选模型,随后对实验室保存的960种放线菌次级代谢产物进行筛选,获得9株具备分泌Caspase-3抑制剂活性的菌株,随后进一步复筛,确认了2株具备分泌高活性的Caspase-3抑制剂的菌株pwh890和pwh891,均可抑制80%的Caspase-3活性.最后对pwh890分泌的次级代谢产物进行初步分离纯化,获得31.3mg纯度较高的抑制剂,为后续的抑制剂的结构解析和改造奠定基础.     

利用KS基因筛选Ⅱ型聚酮类化合物产生菌的方法研究

根据酮基合酶编码基因(ketoacyl synthase,KS)的同源性设计简并引物,并利用PCR技术快速筛选携带聚酮类化合物编码基因的放线菌菌株.试验筛选了33株放线菌菌株,检测获得PKSⅡ型阳性菌株16株.克隆并测序获得16条KS基因序列,进行BLAST同源性比对,与GenBank中已知的KS基因序列的相似度在89%~99%之间.提交GenBank,获得的各菌株KS基因登录号为FJ620885~FJ620889,FJ620892,FJ878801~FJ878810.抑菌实验表明,携带KS基因的16株放线菌中,13株具有抑制真菌活性,2株具有抑制革兰氏阳性细菌活性.系统进化树分析表明16株放线菌可以分为7个类群,其中,具有产生新型聚酮类化合物潜力的菌株8株,说明筛选出的KS基因具有一定的多样性.结果表明,利用PCR技术可以快速有效筛选Ⅱ型KS基因,为生物资源的开发利用奠定基础.     

微生物来源的人白细胞弹性蛋白酶抑制剂N01WA-735E

应用白细胞弹性蛋白酶抑制剂高通量的筛选模型对3 835株放线菌进行筛选,发现了阳性菌株N01WA-735.采用有机溶剂提取、硅胶柱色谱、Sephadex LH -20柱色谱和结晶等方法对该菌株的发酵产物进行了分离纯化,得到了活性单体化合物N01WA 735E,它对人白细胞弹性蛋白酶具有较强的抑制活性,其IC50为11.5 μmol/L.通过对N01WA 735E的理化性质和波谱数据进行分析,确定其结构与文献报道的化合物BE-52440A相同,该化合物对白细胞弹性蛋白酶的抑制活性尚未见报道.     

微生物来源的醛糖还原酶抑制剂F01-195A的研究

利用自建的高通量醛糖还原酶抑制剂的筛选方法,从数千株放线菌和真菌中筛选得到阳性菌株F01-195.对阳性菌株的发酵产物进行有机溶剂提取、硅胶柱色谱和ODS HPLC纯化,得到活性化合物F01-195A,其对醛糖还原酶有较强的特异性抑制活性,IC50为57.2μmol/L.通过对F01-195A的紫外、质谱、核磁等理化数据的分析,鉴定了其化学结构与化合物Flavomannin相同,Flavomannin已被报道作为了抗疟疾药物的先导化学物.     

3株致病疫霉拮抗放线菌复合发酵及其抑制机理

为提高拮抗放线菌控制马铃薯晚疫病的稳定性,采用涂布法和显微观察法对从土壤中筛选到的活体状态能显著抑制致病疫霉菌丝生长的3株放线菌进行了复合发酵方式及发酵条件的初步优化及抑菌机理的研究.结果表明:3株放线菌之间无明显拮抗作用;以培养种子液3 d、先接入NB8培养2 d后再接入NB11和NB12为最佳发酵方式,抑菌率最高可达97.7%,明显优于NB8(87.4%),NB11(20.0%)和NB12(28.2%)单独发酵液的抑制作用;当初始pH为自然值、28℃时,3株菌复合发酵后抑菌活性最高.复合发酵液对病原菌菌丝生长产生明显抑制作用,致使菌丝变形或孢子囊发生异常破裂.     

东北梅花鹿肠道纤维素降解微生物的分离筛选

食草动物依赖胃肠道微生物分解利用天然木质纤维素物质。为获得高效纤维素降解菌，本文将东北梅花鹿粪便样品，经过研磨，重悬于羧甲基纤维素钠（CMC-Na）作为唯一碳源的富集培养基中，进行富集培养和筛选，用革兰氏碘液染色显示纤维素水解圈，通过纤维素水解圈直径（D）和菌落直径（d）比值，初步判断纤维素降解菌降解纤维素能力．筛选出106株纤维素降解微生物，包括72株细菌、22株真菌和12株放线菌．细菌16S rDNA和真菌ITS序列测序结果显示，这些纤维素降解菌主要集中分布于变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）和子囊菌门（Ascomycota）．本文提供了一种快速有效的反刍动物肠道纤维素降解微生物的筛选方法，为东北梅花鹿肠道微生物高通量测序结果提供实验数据支持．      

蒽环抗菌素4132产生菌的筛选(初报)

从放线菌群中筛选到的葸环类抗菌素(Daunomycin,Adriamvcin,Carminomycin,Aclacinomycin等)~[1,2],在临床上证明对白血病和部份实体瘤有肯定的疗效,並以其较低的心脏毒性而引人瞩目。我们在筛选新抗菌素的过程中,分离到一株4132放线菌,产生主要抑制革兰氏阳性菌的蒽环类抗菌素,对小白鼠艾氏腹水癌有明显抑制效果。     

凤丹根腐病拮抗放线菌的分离筛选及鉴定

为获得凤丹根腐病拮抗放线菌,丰富凤丹根际放线菌资源,采用稀释涂布平板法对1~5年生凤丹根际放线菌进行分离纯化,平板对峙法及抑制菌丝生长速率法进行拮抗菌筛选,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定。经分离纯化,得到83株凤丹根际土壤放线菌,有15株具有拮抗凤丹根腐病菌作用,抑菌直径大于15mm的放线菌有4株,其中菌株NL_(4-2)10~(-4)6抑菌直径达19. 67mm,发酵液抑菌率最大为84. 38%,抑菌效果最佳,鉴定为Streptomyces tauricus(公牛链霉菌),该菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠球菌的抑菌直径分别为11. 50mm、13. 67mm、15. 17mm。凤丹根际拮抗根腐病放线菌资源丰富,NL_(4-2)10~(-4)6具有广谱抑菌性,对凤丹根腐病具有良好的生物防治和开发应用潜力。     

汕头南澳海绵Halichondria sp.放线菌分离的研究

海绵相关微生物是药物开发的重要资源.本文利用6种培养基对汕头南澳普遍存在的海绵Halichondria sp.的共附生放线菌进行分离和培养,共得到36株放线菌.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这些放线菌分别属于Streptomyces、Nocardiopsis和Micromonospora属.抗菌活性筛选结果显示,分离菌株分别对Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis和Escherichia coli等的生长有抑制作用.同时分子方法筛选显示这些放线菌具有潜在产生聚酮类、角蒽环类和非核糖体多肽类的能力.本研究结果为海绵相关微生物在药物开发方面积累了基础数据.     

一株产生物活性物质放线菌的分离鉴定

基于16S rRNA序列分析,本文对塔什库尔干县土壤中的放线菌进行了初步分离和鉴定。通过平板培养法,对分离鉴定的放线菌菌株进行活性物质的分析和研究,从塔县土壤中分离得到8株放线菌,其中CT-1产生的活性物质能够抑制Bacillus subtilis。从8株放线菌选出3株16S rRNA的序列分析,推断放线菌CT-1,CT-3和CT-7菌株同属于内芽孢杆菌属(Paenibacillus)。实验表明,这3株放线菌虽然来源相同却有不同的生理生化特性。     

抗性小菜蛾乙酰胆碱酯酶对有机磷及氨基甲酸酯不敏感性研究

福州地区田间小莱蛾Plutella xylostessa L.已对水胺硫磷、克百威、敌敌畏和三唑磷产生高抗,抗性倍数分别为23.52、28.41、16.06和23.43倍.抗性小菜蛾幼虫体内AchE的Km和Vmax值分别为敏感185和0.63倍.水胺硫磷、甲基异柳磷、克百威、敌敌畏对敏感小菜蛾AchE的Ki值分别为抗性的58.75、30.33、198. 87和36.32倍.作者认为AchE对有机磷及氨基甲酸敏感性的降低应是小菜蛾对该类杀虫剂产生抗性的重要机制.     

广西北部湾局部海域海洋沉积物细菌多样性及生物活性评估

为有效探究海洋新型天然微生物资源,本研究以广西北部湾局部海域海洋沉积物样品为研究对象,采用高通量测序技术和纯培养分离方法分析海洋沉积物样品中细菌群落组成及多样性,利用双层琼脂扩散法检测纯培养菌株的抗菌活性,通过PCR扩增法筛选基因组中含有7种功能基因的阳性菌株。高通量测序结果显示：海洋沉积物中检测到1407个操作分类单元（Operational Taxonomic Units,OTUs）;在门水平上,变形菌门（Proteobacteria）的物种丰度最高,其次是厚壁菌门（Firmicutes）和酸杆菌门（Acidobacteria）。纯培养分离纯化鉴定出278株菌,分布在3门5纲16目24科31属,其中YIM 150853为1个潜在新分离单元。生物活性评估实验表明,76.34%的纯培养菌株至少对1种指示菌有抑制作用,其中链霉菌YIM 150601、YIM 150634抑菌谱广、抑菌活性强,放线菌的功能基因检出率高于非放线菌。广西北部湾局部海域海洋沉积物中蕴藏着丰富的细菌资源,纯培养菌株具有抗菌及合成生物活性产物的潜力,是开发新型天然产物的新菌源。     

1株碱杆菌属菌株的分离和鉴定

 从新疆采集的盐土样品中分离到1株革兰氏阳性、严格好氧、产孢、嗜盐细菌菌株YIM 012,对其进行了系统分类学研究.菌株YIM 012为杆菌,生长最适温度为28~45℃,最适pH 7.0~8.0,并能在70~250g/L的盐质量浓度中生长良好.其DNA的G+C的摩尔分数为39%,16S rRNA基因序列分析结果显示,该菌株与碱杆菌属Alkalibacillus salilacus(DSM 16460^T)亲缘关系最近,相似性达到99.6%,但与同属其它2个有效种间相似性低于96%.杂交结果显示其与A. salilacus亲缘关系低于20%,并且在生理生化方面也有差异.综合分析,确定该菌株为碱杆菌属的1个新种,将其命名为嗜盐碱杆菌(Alkalibacillus halophilus).     

1株嗜碱放线菌的生理学特性研究及其鉴定

 对从青海茶卡盐湖岸土样中分离到的1株生理较特殊的嗜碱放线菌YIM80305的生长pH范围,不同碱性物质KOH,K₂CO₃,NaOH,Na₂CO₃对其生长的影响,耐NaCl,KCl特性进行了研究.同时从形态,细胞壁类型,16SrDNA等方面进行了鉴定.结果发现YIM80305对Na⁺碱性物质有一定依赖性,对K⁺敏感,YIM80305可能是Streptomyces属的1个新种.     

几种离体动物细胞抗菌肽的诱导及抗菌活性的初步研究

分别选取几种离体培养的昆虫细胞、哺乳动物细胞和肿瘤细胞,用热灭活的大肠杆菌DH5a诱导细胞产生抗菌肽,诱导的上清液经三氯乙酸沉淀提取诱导蛋白,采取抑菌圈法测定其抗菌活性．对从不同种细胞中诱导产生的抗菌肽的抗菌活性进行比较,发现581、SF-9、Vero、293、PK-15和IBRS-2细胞均能产生抗菌活性物质,其中Vero细胞产生的抗菌肽活性最强．经Tricine—SDS—PAGE、银染后发现,各种细胞产生的抗菌肽分子量为7000左右．     

生防菌株A-29的鉴定及其活性成分分析

生防菌株A-29分离自山东省科学院中试基地内的番茄根际土中。利用通用引物27f和1492r扩增A-29的基因组DNA获得1492bp的16SrDNA序列片段,登录号为EU430264,同源性与直丝紫链霉菌（Strep-tomyces viridocyaneus）YIM30997（AF513223）达98.9%。生理生化特性测定中,除吲哚反应和木糖利用2项不同外,其它指标A-29与S.viridocyaneus完全相同,故将菌株A-29鉴定为S.viridocyaneus。菌株A-29的无菌发酵滤液具有广谱抗性,在PDA平板上对供试的8种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对黑斑链格孢的抑制效果最好,抑菌圈半径为7.0mm。分别利用二氯甲烷和乙酸乙酯浸提法提取发酵上清液中的活性成分,采用气相色谱-质谱联用仪对提取液进行定性分析,菌株A-29各提取液中可检测到的化学成分种类主要有：有机酸类、酯类、苯及其衍生物、烷烃、酮类、杂环化合物等,结合文献报道：上清乙酸乙酯提取液中可能的活性成分为：（S）-（＋）-2′,3′-Dideoxyribonolactone、2-Vinyl-9-[3-deoxy-.beta.-d-ribofuranosyl]hypoxan-thine;上清二氯甲烷提取液中可能的活性成分为：2-（Phenyl-piperidin-1-yl-methyl）-cyclohexanol、10-Methoxy-nb-.alpha.-Methylcorynantheol。     

3株抗灰霉病放线菌的分离和鉴定

 从云南永胜、中甸采集的土壤样品中分离到3株放线菌菌株YIM31658,YIM31679,YIM31777.具有很强的抗灰霉病活性,防效均达到100%.通过对其进行形态特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等多相分类研究,确定其分属链霉菌属和链孢囊菌属.     

具抗肿瘤活性中度嗜盐菌YIM 80186的分离和系统发育分析

 从青海盐碱土壤样品中分离到1株中度嗜盐放线菌YIM 80186,该菌株的代谢产物具有很强的抗肿瘤和抗菌活性.菌株YIM 80186在添加20~100 g/L NaCl的培养基上生长良好,而在未添加NaCl的多数培养基上生长微弱.最高能耐受200 g/L NaCl.气生菌丝和基内菌丝丰富,白色至黄白色.气生菌丝产生直的或弯曲的孢子链,基内菌丝发育良好,断裂.生长pH范围6.0~10.0,最适pH 7.5~8.0.通过对其进行的包括形态、生理生化特性、细胞化学以及基于16S RNA基因序列的系统发育分析等方面的多相分类研究,该菌株具有拟诺卡氏属的典型特征,初步鉴定其为拟诺卡氏菌属的1个潜在新种.     

喜树果内生真菌的分离与鉴定

从喜树(CamptothecaacuminataDecne.)果实中分离、纯化得到5株内生真菌,经初步鉴定,分别属于半知菌亚门的匙孢霉属(MystrosporiumCda.)、鲜壳孢属(ZythiaFr.)及无孢类群(MyceliaSterilia)。其内生真菌经摇瓶培养后,采用薄层层析(TLC)法对其菌丝体提取物进行分析,初步表明WZ001菌株可能产生喜树碱(Camptothecin,CPT)的类似物。     

不同运动训练强度对大鼠胃肠道神经递质的影响

目的探讨不同强度运动对大鼠胃肠道神经递质的影响。方法选取成年雄性SD大鼠48只,随机分成3组,即安静对照组、低强度运动组、高强度运动组。各组给予8周不同强度的运动后,测定各组大鼠胃排空率、肠推进率、胃窦组织和十二指肠组织AChE、NOS阳性面积率。结果低强度运动组的胃排空率、肠推进率、胃窦组织和十二指肠组织AChE与安静对照组比较有显著性升高趋势(P<0.05),NOS与安静对照组比较无显著性差异;高强度运动组胃排空率、肠推进率、胃窦组织和十二指肠组织AChE和NOS与安静对照组比较显著性降低(P<0.05),与低强度运动组相比明显下降(P<0.05)。结论低强度运动使大鼠胃排空和肠推进增强,高强度运动对使大鼠胃排空和肠推进有抑制作用,ACh和NO神经递质在其中发挥着重要作用。