水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达(简报)

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD．它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病．RGD 序列是纤维蛋白原等粘附因子上以 Arg-Gly-Asp 为核心的小肽序列,通过与活化血小板上纤维蛋白原受体 GPⅡb/ Ⅲa 结合而导致血小板聚集．因此外源 RGD 序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成．RGD 序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂．本文首次报道重组水蛭素 HV3与 RGD 序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果．     

环前列腺素和凝血(口恶)烷在心血管疾病中的临床应用

一、缺血性心脏病与前列腺素、凝血(口恶)烷(thrombaxane)缺血性心脏病的发病及加重与动脉硬化、血栓形成和冠状动脉痉挛的关系是十分重要的。所以具有强血管扩张作用和血小板凝集抑制作用的环前列腺素和相反的具有强血管收缩作用及血小板凝集作用的凝血(口恶)烷 A_(TXA_2)两种物质与缺血性心脏病的关系已引人重     

RGD对人纤维肉瘤细胞HT1080增殖、黏附及转移影响的研究

利用合成的RGD(Arg-Gly-Asp)三肽研究了其抑制人纤维肉瘤细胞HT1080的增殖、黏附及转移作用.采用MTT法检测了不同浓度的RGD对HT1080细胞增殖及黏附纤维粘连蛋白(fibronectin)能力的影响;采用细胞划痕法研究了RGD对HT1080细胞在纤维粘连蛋白中迁移能力的影响.结果表明,合成的RGD能抑制HT1080细胞的增殖,并具有抗肿瘤细胞黏附、抗转移的活性.     

水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的小肽序列[3],通过与活化血小板上纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa结合而导致血小板聚集.因此外源RGD序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成[4].RGD序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果.     

七鳃鳗口腔腺重组蛋白rLj-RGD3对人肝癌HepG2细胞活性的影响

七鳃鳗口腔腺含有RGD功能基因,为了确认其表达蛋白在抑制肿瘤方面的功能,在前期获得带有组氨酸标签的分子量为14．5 kD 的基因重组蛋白 rLj‐RGD3基础上,研究了不同浓度rLj‐RGD3对HepG2细胞的增殖、凋亡、黏附、迁移、侵润的影响．结果显示：rLj‐RGD3能显著抑制HepG2细胞的增殖,IC50为3．8μmol／L ,诱导HepG2细胞发生凋亡,有效抑制 HepG2细胞黏附玻蛋白（VN）,抑制 HepG2细胞的迁移,且抑制率达58％,明显抑制以 bFGF 为趋化剂的 HepG2细胞穿透 Matrigel 的侵润行为．以上研究表明,rLj‐RGD3具有典型的RGD毒素蛋白抑制肿瘤细胞的功能,能够应用于抗肿瘤基因工程药物开发,具有重要的应用意义．     

人参皂甙-R_(g3)、-R_(h1)和-R_(h2)对实验性大鼠扩散型血管内凝血的作用

20(S)、20(R)型人参皂甙—Rg_3,20(S),20(R)人参皂甙—Rh_1和—Rh_2已从红参中分离出来。研究了这些皂甙对凝血酶诱导的纤维蛋白原转变为纤维蛋白的作用及其对血小板的凝集作用。 20S、20R型人参皂甙—Rg_3,能抑制胶原和二磷酸腺苷诱导的血小板凝集。20S型人参皂甙—Rg_3,20S、20R型人叁皂甙—Rh_1能抑制凝血酶诱导纤维蛋白原转变成纤维蛋白。前文报道了得自人参正丁醇提出物中的人参皂甙—Ro、—R_(b1)、—Rb_2、—Rc、—Re、—Rg_1和—Rg_2对血凝系统和纤维蛋白原系统均有明显的影响。最近,Kitaga,W、etal,从红参中分离出20(S)型人参皂甙—Rg_3,20(R)型人参皂甙—Rh_1,人参皂甙Rh_2。Odajima etal报导了人参皂甙—Rh_2能抑制肿瘤细胞的增生。本文作者已报道了人参乙酸乙酯提出物中的皂甙对血小板凝集和凝血酶诱导的纤维蛋白原转变成纤维蛋白的抑制作用。此文报告20(S)、20(R)—人参皂甙Rg_3,20(S)、20(R)—人参皂甙Rh_1和人参皂甙Rh_2对血小板凝集和纤维蛋白原转变成纤维蛋白的影响。     

黄酮类天然药物有效成分治疗糖尿病及其并发症研究进展

黄酮类天然药物有效成分通过抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶、拟胰岛素作用、抗炎、抑制醛糖还原酶和抑制蛋白糖基化等途径防治糖尿病，并能抵抗血小板凝集、微血管病变等糖尿病并发症。本文就近年来黄酮类药物抗糖尿病及其并发症的研究状况作一综述。     

日本七鳃鳗Lj-RGD3毒素肽的3种单RGD模体突变体的克隆表达及其抑制Lewis细胞活性研究

为了评价Lj-RGD3 3个不同位点RGD模体的存在是否对该蛋白功能具有必要性及影响程度,采用全序列合成的方法合成了3种基于Lj-RGD3的RGD缺失突变体基因,并成功对其进行了pET23b载体的构建及重组蛋白的表达和纯化.将这3种分别保留第1位、第2位、第3位RGD模体的重组蛋白各命名为rLj-113、rLj-114和rLj-115.比较了这3种重组蛋白对Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并对其是否能引起Lewis肺癌细胞凋亡进行了测定.结果显示,rLj-113、rLj-114和rLj-115对Lewis的增殖半抑制浓度IC_(50)值分别为2.73,2.75,2.53μmol/L,并且以剂量依赖的方式抑制Lewis小鼠肺癌细胞的增殖;突变体蛋白还能抑制以bFGF(basic fibroblast growth factor)为趋化剂的Lewis小鼠肺癌细胞的迁移及侵袭.综上可知,rLj-RGD3蛋白的RGD模体的位置并不影响其在抗Lewis小鼠肺癌细胞的生物活性,而保留单RGD模体的突变体rLj-113、rLj-114、rLj-115仍然具有抑制Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及诱导Lewis细胞凋亡的生物学活性.     

南美白对虾血蓝蛋白血细胞凝集活性初探

以采自汕头的南美白对虾为研究对象,采用亲和层析、PAGE、SDS-PAGE、Western-blotting、血细胞凝集实验和糖抑制实验等方法探索南美白对虾血蓝蛋白的血细胞凝集活性.结果发现,血蓝蛋白对实验所选用的鱼、鸡、鼠和人等4种红细胞均具有显著的血细胞凝集活性,凝集活性大小为5~10mg/L,而且其凝集反应可被α-半乳糖、-αD葡萄糖、甘露醇和N-乙酰神经氨酸等4种糖所显著抑制.由此推测,血蓝蛋白确实具有血细胞凝集活性,这对进一步研究血蓝蛋白的免疫学功能具有重要意义.     

野亚麻蝇(Parasarcophaga Similis)幼虫凝集素的细胞凝集和糖抑制作用

野亚麻蝇幼虫凝集素的测定结果表明:它对人的A、B、O、AB血型红细胞,以及兔、豚鼠、大鼠、小鼠、鸽子的红细胞有凝集作用,其中对豚鼠红细胞凝集活性最高;但对牛、绵羊、鸡、鸭、龟、蛙、鳝鱼、鲤鱼、泥鳅的红细胞无凝集作用。对小鼠淋巴细胞凝集作用的浓度为18.75μg/ml,而对大鼠淋巴细胞凝集浓度则为150μg/ml,对牛的淋巴细胞无凝集活性。对肿瘤细胞的凝集作用很不相同,可凝集小鼠的S180、SP2/0、u14、LⅡ细胞,但不能凝集小鼠艾氏细胞,大鼠W256细胞、人Hela细胞和MGC80—3胃癌细胞。该凝集素对兔红细胞的凝集作用可被D—半乳糖,N—乙酰氨基半乳糖抑制。     

Molecular characterization of a K+ channel blocker in the scorpionButhus martensii Karsch

K⁺ channel blockers of scorpion venoms are of important value in studying pharmacology and physiology of specific K⁺ channel of cells. Based on the amino acid sequences of BmP01 previously characterized as a small-conductance Ca²⁺-activated K⁺ channel blocker, two “back to back” degenarate primers have been designed and synthesized for inverse PCR strategy, its full-length cDNA has been cloned from the venom gland of the Chinese scorpionButhus martensii. The cDNA is composed of 3 parts: 5′ UTR, ORF and 3′ UTR. The flanking sequence of translation initiation codon ATG is AAAATGA, which is highly conserved in scorpion Na⁺ channel toxin and protozoan genes, suggesting that these genes may have followed a common mechanism for translation initiation. The 3′ UTR contains poly(A) signal AATAAA. The open reading frame encodes a precursor of 57 residues with a signal peptide of 28 residues and a mature peptide of 29 residues. The signal peptide is rich in hydrophobic amino acid residues and its length is significantly different from that of the determined scorpion Na⁺ channel toxin. The deduced amino acid sequence of mature peptide is completely consistent with BmP01 previously determined by primary structure analysis.     

一种运用灰色预测模型预测蛋白质一级结构的方法

将氨基酸残基的疏水值与氨基酸残基一一对应，得到代表氨基酸残基序列的疏水值序列，再对此疏水值序列运用灰色预测模型预测未知的氨基酸残基疏水值，从而达到间接预测氨基酸残基的目的。     

The signal sequence of nascent preprolactin interacts with the 54K polypeptide of the signal recognition particle

Hydrophobic signal sequences direct the translocation of nascent secretory proteins and many membrane proteins across the membrane of the endoplasmic reticulum. Initiation of this process involves the signal recognition particle (SRP), which consists of six polypeptide chains and a 7S RNA and interacts with ribosomes carrying nascent secretory polypeptide chains. In the case of aminoterminal, cleavable signal sequences, in the absence of microsomal membranes it exerts a site-specific translational arrest in vitro. The size of the arrested fragment (60-70 amino-acid residues) suggests that elongation stops when the signal sequence has emerged fully from the ribosome. However, a direct interaction between the signal sequence and SRP has not previously been demonstrated and has even been questioned recently. We now show for the first time a direct interaction between the signal sequence of a secretory protein and a component of SRP, the 45K polypeptide (relative molecular mass (Mr) 54,000). This was achieved by means of a new method of affinity labelling which involves the translational incorporation of an amino acid, carrying a photoreactive group, into nascent polypeptides.     

细胞粘附肽Arg-Gly-Asp的合成与生物活性检测

采用固相多肽合成法合成Ag-G ly-Asp(RGD)三肽,以天门冬氨酸计RGD三肽收率为75%,采用MTT法进行合成肽RGD抑制人纤维肉瘤细胞HT1080转移机理方面的研究,证实了人工合成的RGD肽能抑制人纤维肉瘤细胞HT1080与纤维连接蛋白(FN)的粘附。     

野桑蚕漆酶基因克隆、序列分析及转录表达谱研究

利用RT-PCR方法,克隆了野桑蚕Bombyx mandarina漆酶基因,获得了其cDNA序列.该序列长2 317bp,含有一个2 295bp的完整开放阅读框,有8个外显子,7个内含子,编码一个由764个氨基酸残基组成的蛋白质,其蛋白质的分子量和等电点分别为84 340.91和6.61.推导的氨基酸序列与其它鳞翅目昆虫(Laccase)基因相应氨基酸序列有较高的同源性,该序列具有它们的漆酶基因所共有的典型特征.组织特异性表达分析表明了该基因仅在野桑蚕的表皮、头部、中肠和血液中有表达.这些结果为进一步研究野桑蚕漆酶基因的功能提供了分子基础.     

大熊猫肌红蛋白的纯化及一级结构的研究

本文从大熊猫骨骼肌分离纯化了肌红蛋白,鉴定了纯度,测定了分子量及氨基酸组成。确定了该蛋白的N端及C端氨基酸。采用CNBr裂解的方法,用HPLC分离得到4个肽段,分别测定了大熊猫肌红蛋白1—52位,56—77位及132—153位氨基酸的排列顺序。大熊猫肌红蛋白共含153个氨基酸,本文已完成了96个氨基酸的序列测定。用此结果与食肉目有关动物已知肌红蛋白的氨基酸顺序进行比较,获得了有意义的结论。     

Expression and anti-apoptotic mechanism of Spodoptera littoralis Nucleopolyhedrovirus P49 protein

A novel cloned Spodoptera littoralis Nucleopolyhedrovirus (SlNPV) p49 gene is able to suppress apoptosis of insect cells Sf9 triggered by virus. The amino acid sequence of P49 expressed in baculovirus expression system is the same as predicted, indicating that the expression of P49 is correct. Metabolic labeling revealed that p49 was able to be expressed both in the early and late phases after the viral infection, and only in the late phase was the expression driven by polyhedra promoter, but the amount of expression was higher than that of wtSlNPV. In summary, the early gene of SlNPV p49 as well as p35 of AcMNPV is able to be expressed in the late phase, but its promoter is weaker compared with polyhedra promoter. In vitro, P49 can be cut by Bm caspase and human caspase-3, yielding 10 and 40 ku fragments. Purified P49 blocks the substrate cleavage by Bm caspase and human caspase-3, showing that P49 inhibits downstream caspases in the apoptotic pathway.     

At3g13600截短型蛋白的原核表达载体的构建

拟南芥基因At3g13600编码一种钙调素结合蛋白,序列分析表明,该基因cDNA序列全长1 818 bp,编码一个具有606个氨基酸残基的多肽,推测分子量为68.9 kD;在At3g13600蛋白的N端存在IQ钙调素结合构象.为了从实验上进一步研究该蛋白的钙调素结合特性,通过逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)扩增含...     

中国对虾抗菌肽成熟肽的cDNA克隆

利用RT－PCR、嵌套PCR（Nested PCR)和3’－RACE等方法，从中国对虾血细胞中克隆到1种抗菌肽基因片段，称为中国对虾肽（Chp）基因。此基因片段长543bp，开读框共有156个碱基，编码52个氨基酸。该基因所编码的氨基酸序列对应于凡那对虾抗菌肽成熟肽的序列，与其一致性为52－59％，相似性为61－73％，分子量为5652．4Da，理论等电点为9．76，带正点荷的氨基酸（Arg-Lys）为8个，不含带负电荷的氨基酸。上述这些特征（分子量较小，带正点荷）均为抗菌肽的普遍特征。     

中华补血草金属硫蛋白基因的克隆及高盐处理下的表达模式分析

以中华补血草叶片为材料,提取其总RNA并反转录cDNA,并以cDNA为模板,克隆得到包含该基因完整开放阅读框的cDNA序列,序列分析表明,该基因开放阅读框长249 bp,编码82个氨基酸;该蛋白含有14个半胱氨酸,主要分布在蛋白质的N端和C端,呈CC,CX,CXXC形式排列.预测该蛋白分子质量为8 133.1 D;等电...