随机扩增多态性DNA技术在生命科学炽的应用

DNA分子标记是DNA水平上遗传变异的直接反映,随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,是新发展起来的一种DNA分子标记方法。文中详细阐述了RAPD技术的原理,进一步与限制性片段长度多态性（Restriction FragmentLength Polmorphism,RFLP)技术相比,得出它具有快速,简便和对材料要求不高等特点,最后讨论了RAPD技术在生命科学研究中各个方面的广泛应用,包括种基因组的分子谱图建、系统进化发育以及基因定位研究等。     

草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选

为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系,应用RAPD技术,从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点,并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。     

引物对甘薯品种聚类分析结果的影响

应用RAPD技术对10个供试甘薯品种的遗传关系进行了研究，探讨引物数量，多态性率和所用引物带型丰富度对聚类分析结果的影响。结果表明：聚类分析准确度与引物数量，引物的带型数有关，多态性率不是选用引物的主要标志。因此，在利用RAPD技术研究物种间遗传关系时，有必要保证一定数量的引物，且此物具有较多的带型。     

铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性基因分型研究

利用微量液体稀释法进行药敏检测和RAPD技术进行基因分型,调查了铜绿假单胞菌在临床各科中的流行情况,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.结果表明耐药谱分6型,Ⅰ型占44.5%,Ⅱ型占18.5%,Ⅲ型占7.4%,Ⅳ型占7.4%,Ⅴ型占11.1%,Ⅵ型(不定型)占11.1%;RAPD分9型,A型占51.9%,B型占7.4%,C型占7.4%,D型占7.4%,E型占7.4%,F型占3.7%,G型占3.7%,H型占7.4%,I型占3.7%.说明基因型A型、耐药谱Ⅰ型的铜绿假单胞菌是此次ICU医院感染暴发流行的菌株,其他型别为非流行相关菌株.比较结果还说明RAPD基因分型的灵敏性、特异性及可靠性优于耐药谱分型,在医院感染流行病学调查中具有较大的应用价值.     

云南鼠疫菌随机引物扩增DNA多态性指纹图谱分析

目的：分析云南不同地区、不同年代分离鼠疫菌的基因表型。方法：采用随机引物扩增技术（RAPD）对菌株进行分析。结果：共检测了28株鼠疫菌，除一株外，27株均显示有13条带型，并与假结核菌和小肠结肠炎菌有明显的区别。结论：云南家、野两型鼠疫菌株可能具有相同的随机引物扩增基因表征。     

葡萄的随机扩增多态性DNA研究

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)对11个样品进行了研究．这11个品种包含1个欧美杂交种，一个中国野生种(Vitis．piasezkii Var．pagnucii)，9个欧亚种(Vitis．vinifera L)．选择了多态性好的7个10碱基寡聚糖核苷酸作为随机扩增的引物，在琼脂糖凝胶电泳上产生了76条带，其中63条具有多态性．各引物产生的条带从6到13不等，平均为10．86条／模板，其中9条具有多态性，表明葡萄基因的多态性十分丰富．通过遗传相似性分析表明11个葡萄基因的Nei氏相似性系数分布为0．1027-1．1787，平均相似系数为0．459．通过非加权算术平均数聚类法，获得了11个葡萄品种之间的遗传关系树图，欧亚种群，东亚种群和欧美杂种在遗传关系树图上被成功地聚为3组．本实验发现欧亚种和欧美杂种亲缘关系较近，而和中国野生种亲缘关系远．在欧亚种中，520A和S04的遗传距离最近，其次是井川1010和美人指，最大的遗传距离发生在桑无核和其他欧亚种之间．     

高粱抗丝黑穗病基因的分子标记RAPD分析

丝黑穗病是影响我国高粱生产发展的主要病害之一,在高粱产区每年都有发生,发病率有时高达70 %,给生产造成很大损失,而选育抗病品种是最为有效的抗病策略.分别以高粱2381恢复系(抗病)、矮四恢复系(感病)的叶片为试材,采用CTAB法提取高粱基因组DNA,并应用RAPD筛选技术对高粱基因进行分子标记.在最佳的RAPD反应体系中共筛选了100个RAPD随机引物,筛选出来27个适宜引物,获得了稳定的RAPD扩增结果及多态性较好的DNA谱带.其中有6个引物对DNA扩增产生了差异谱带.     

应用少数引物对3个绵羊类群的RAPD分析

对3个不同绵羊类群（波德代，无角陶赛特，藏陶杂种羊）的共11个样本DNA进行了RAPD分析。结果表明，无角陶赛特羊与藏陶杂种羊2个种群间遗传距离最小，为0．1102；波德代羊与藏陶杂种羊2个种群间遗传距离最大，为0．2989；无角陶赛特羊与波德代羊2个种群间遗传距离为0．1655。     

丁(鱼岁)遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

利用RAPD分子标记技术对15个丁鱼岁养殖个体的遗传多样性进行分析.选用20个随机引物对其基因组DNA进行PCR扩增,有16个引物可以扩增出稳定且清晰的条带,其中S103、S104和S105为多态引物.16个引物共扩增出65个DNA位点,片段大小在200~3 000 bp之间,其中多态性位点6个,多态位点比例为9.23%.个体间遗传距离在0~0.067 4之间,平均遗传距离为0.028 6.结果显示,丁鱼岁养殖群体的遗传多样性水平较低.     

铜绿假单胞菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的建立随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法检测铜绿假单胞菌（PA）,调查铜绿假单胞菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据。方法对2008—2009年分离的180株铜绿假单胞菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析。结果标本主要来自ICU、烧伤科、呼吸内科等。从痰液标本中分离的铜绿假单胞菌占58．9％,其次伤口分泌物标本占18．9％、中段尿16．7％,其它类型标本占5．5％。抗菌谱分型分为5型。180株铜绿假单胞菌用RAPD分型共得178株,分型率98．9％（178／180）,分为9种类型：Ⅰ～Ⅸ。结论RAPD分型技术对铜绿假单胞菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同。     

六种蝗虫基因组DNA多态性的RAPD标记研究

运用随机扩增多态 DNA技术对斑翅蝗科 Oedipodidae中三属六种蝗虫基因组DNA进行了多态性比较 ,共扩增出 2 2条特异性片断 ,分子量大小为 650～ 1 990 bp之间 ,并根据各种间片段共享度构建了 UPG聚类关系图 .研究结果表明 ,大垫尖翅蝗和甘蒙尖翅蝗的片段共享度为 0 .375;红翅皱膝蝗和鼓翅皱膝蝗的片段共享度为 0 .2 86;亚洲小车蝗和黄胫小车蝗的片段共享度也为 0 .2 86     

淤泥湖和梁子湖团头鲂遗传多样性的研究

采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对淤泥湖和梁子湖的团头鲂进行了遗传分析,在所用20个10碱基随机引物中,除OPP－1、OPP－13外,其余18个引物都能对团头鲂扩增出稳定的RAPD谱带,其中OPP－7、8、9、12、15、17等6个引物在团头鲂不同个体间扩增出多态性片段,用这些引物对团头鲂进行遗传分析,结果表明,淤泥湖团头鲂个体间的遗传相似度在0．9543－0．9718之间,平均值为0．9617;梁子湖团头鲂个体间的遗传相似度在0．9541－0．9622之间,平均值为0．9589;淤泥湖和梁子湖团头鲂个体间的遗传相似度在0．9395－0．9614之间,平均值为0．9541。     

水杉自然居群遗传多样性的RAPD研究

用随机扩增多态性方法对四川、湖南、湖北交界处的２７个水杉样本进行了基因组ＤＮＡ多态性分析．１１个随机引物共获得ＲＡＰＤ谱带１２１条,多态性谱带占５３％．聚类分析结果表明：水杉个体间的遗传距离与这些个体的地理分布相关,即相同产地个体间的遗传距离较小,不同产地个体间的遗传距离较大．与松柏目其它类群相比,水杉居群的遗传多样性程度高于银杉（３２％）,而在所处的大类群中则处于中等水平．初步结果表明,尽管孑遗物种水杉的自然种群的目前分布范围和个体数目非常有限,但是它仍然保持着中度的遗传多样性水平．可推测,孑遗植物的遗传多样性水平具有一定的变异范围     

RAPD技术在绿脓杆菌DNA分析中的应用

RAPD技术是近几年发展起来的克隆识别技术,以一条含17个碱基的随机引物对10株绿脓杆菌的DNA进行PCR扩增,经电泳,得到了8种DNA指纹图谱,重复实验,结果稳定,证明该技术适用于DNA多态性分析及分子流行病学研究。     

空间环境对植物影响的研究进展

从蛋白质和基因水平分别介绍空间微重力、强电离辐射、亚磁场及空间综合因素对生物性状和遗传变异的影响,并对今后空间诱变育种的前景和存在问题加以概述。     

铁皮石斛不同繁殖代数遗传稳定性RAPD的研究

研究铁皮石斛单蒴果种子内不同无性繁殖代数的遗传稳定性.利用从100个随机引物筛选出23个稳定性较好的10碱基引物,对来自单蒴果的7代无性繁殖种苗进行RAPD检测.发现7代无性繁殖的组培苗内代代之间遗传距离很小,但代数相差越大其遗传距离就越大,在0～0.043 5范围内.其中在1～3代未探查到变异,但从第4代始,有部分引物RAPD带型发生变化,但变化甚微.23个稳定引物只探查到了7个变异位点.铁皮石斛组培过程中种内存在一定的变异,但变异甚微,所以建立铁皮石斛稳定的无性快繁体系是切实可行的.     

二甲亚砜在聚合酶链反应扩增载脂蛋白E基因中的作用

目的：探讨二甲亚砜（DMSO）在聚合酶链反应（PCR）中扩增人类载脂蛋白E基因中的作用。方法：在不同质量分数DMSO的存在下,以PCR技术增人类载脂蛋白E基因片段。限制性内切酶酶切检测扩增产物。结果：在质量在分数5%-10%的DMSO下,可以成功地扩增到人类载脂蛋白E基因的第4外显子片段。结论：在DMSO作用下,PCR扩增增强了特异性。扩增的人类载脂蛋白E基因片段可以进行基因限制性片段多态性的分析。     

三江黄牛Bola-DRB3基因第二外显子的PCR-RFLP多态性研究

用PCR-RFLP方法,对三江黄牛和黑白花奶牛的MHCⅡ类基因座位Bola-DRB3基因第2外显子的遗传样性进行了研究.结果表明:①三江黄牛HaeIII酶切出现3种基因型,即SS、RS、RR,由S和R两个基因控制,RR为优势基因型,R为优势基因;RsaI酶切出现4种基因型,即XX、XM、LM、MM,由X、M和L三个复等位基因控制,LM为优势基因型,M为优势基因;两种内切酶在三江黄牛Bola-DRB3基因的第二个外显子上有150、202、65、180等酶切位点,且4个位点的碱基存在多态性,表现为多碱基突变;经χ2适合性检验,HaeIII和RsaI酶切位点的χ2值分别为7.0802、14.1358,差异显著(p<0.05),说明三江黄牛Bola-DRB3基因第2外显子的4个酶切位点的碱基突变未达到Hardy-Weinberg平衡状态,存在选择、基因突变、近交、遗传漂变等因素的影响.②黑白花奶牛HaeIII酶切出现4种基因型,即JJ、KI、IJ、KJ,由J、K和I三个复等位基因控制,JJ为优势基因型,J为优势基因;RsaI酶切出现3种基因型,即LL、MM、LM,由L和M两个基因控制,LM为优势基因型,M为优势基因;HaeIII和RsaI两种内切酶在黑白花奶牛中也有多个酶切位点,在150、48、65、202位上有碱基多态性,表现为多碱基突变;经χ2适合性检验,RsaI酶切位点的χ2值为3.456,差异不显著(p>0.05),处于Hardy-Weinberg平衡状态;HaeIII酶切位点的χ2值为18.4211,差异显著(p<0.05),未达到Hardy-Weinberg平衡状态.③用两种酶在三江黄牛中共检测到7种基因型,且与黑白花奶牛在酶切位点上具有较多的差异,说明三江黄牛具有丰富的遗传多样性;这一结果与张成忠、赖松家等从血液蛋白、染色体、mtDNA等水平上的研究结果一致,也同三江黄牛的育成历史和所处生态条件一致.综上所述,三江黄牛具有丰富的遗传多样性,今后应加强对三江黄牛遗传多态性以及起源、演化和分类的研究,为这一畜种资源的进一步开发利用和保护提供理论基础.     

小儿肾病综合症肾素-血管紧张素系统基因多态性研究

目的:探讨肾素-血管紧张素系统基因多态性与小儿肾脏疾病的关系及其意义。方法:用PCR方法检测4 0例肾病综合症患儿及5 0例正常对照组儿童的肾素-血管紧张素系统基因多态性。结果:①血管紧张素M2 35T基因多态性MM、MT、TT基因型肾病组分别为37 5 %、2 7 5 %、35 0 % ;对照组分别为6 6 0 %、18 0 %、16 0 % ,差异有显著性(P <0 0 5 )。②血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ基因多态性AA、AC、CC基因型肾病组分别为4 5 0 %、2 7 5 %、2 7 5 % ,对照组分别为6 8 0 %、2 0 0 %、12 0 % ,差异无显著性(P >0 0 5 )。③血管紧张素转换酶基因多态性Ⅱ、DI、DD基因型肾病组分别为4 5 0 %、4 2 5 %、12 5 % ,对照组分别为4 6 0 %、4 4 0 %、10 0 % ,差异无显著性(P >0 0 5 )。其中难治性肾病组(2 0例)与非难治性肾病组(2 0例)比较、激素敏感组(2 9例)与激素耐药组(11例)比较,血管紧张素M2 35T基因多态性、血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ基因多态性、血管紧张素转换酶基因多态性差异均无显著性(均P >0 0 5 )。结论:血管紧张素M2 35T基因TT型可能与小儿肾病综合症的发病密切相关;血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ基因多态性、血管紧张素转换酶基因多态性与小儿肾病综合症的发病无关,未能证实肾素-血管紧张素系统基因多态性与疗效有关