简便分离鉴定酵母细胞总RNA的方法

针对酵母具有细胞壁的特点,建立了一种简便,快速,有效分离鉴定酵母细胞总ＲＮＡ的方法,并对三种便于提取酵母细胞总ＲＮＡ的方法进行分析,所得取的总ＲＮＡ质量高,可用于进行分离ｍＲＮＡ,ＰＣＲ扩增以及ｄｏｔ或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

两种球形棕囊藻细胞总RNA提取方法的比较

不同植物细胞RNA提取的适宜方法各不相同.本实验分析、比较了QIAGEN试剂盒法和西曲溴铵(CTAB)法用于赤潮藻细胞总RNA提取的情况.结果显示,两种方法均可获得高质量的总RNA.比较而言,CTAB法比QIAGEN试剂盒更可取,适合藻细胞RNA的大量提取.     

萝卜叶片总RNA提取方法比较

获得高质量的RNA是进行RNA相关分子生物学实验和研究的前提.尽管目前已建立了多种真核生物总RNA的提取方法,但这些方法是否适用于提取萝卜(Raphanus sativus L.Var.radiculus Pers.)的总RNA还不清楚.本研究分别采用Trizol法、改进的异硫氰酸胍法和改进的SDS--酸酚法提取萝卜叶片总RNA,并通过分析所得RNA的电泳图谱、得率和纯度来判断这三种方法的优劣, 确定了提取满身红萝卜总RNA的最适方法.实验结果表明,Trizol法和改进SDS酸酚法提取的总RNA中蛋白质和DNA污染比较严重,不能用于下一步实验;而改进的异硫氰酸胍法提取的总RNA得率高、纯度高、完整性好、少降解,完全适合用于Northern blotting,小RNA分离、cDNA文库的构建等分子生物学实验.     

白术根茎的总RNA提取方法的比较

探讨提取白术根茎总RNA的最优方案。以新鲜白术的根茎为实验材料,采用三种方法提取其根茎总RNA。用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测RNA样品完整性,用RT-PCR方法验证RNA质量。用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的方法,获得了完整性最好、质量最高的总RNA样品。提取白术根茎总RNA的三种方法中,多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的方法最理想。     

体外诱导骨肉瘤特异性抗肿瘤的免疫实验

采用分离骨肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导DC细胞,Trizol法提取患者骨肉瘤细胞总RNA,用总RNA转染DC并诱导特异性CTL的扩增,用MTT法检测淋巴细胞的增殖和CTL的杀伤活性。探讨骨肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力。经骨肉瘤细胞总RNA转染的DC特异性表面标志及功能相关分子表达均上调,转染后的DC可显著刺激自体T淋巴细胞增殖,诱导的特异性CTL对靶细胞的杀伤率显著高于单纯淋巴细胞和未经转染的DC。说明骨肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗可在体外诱导出特异性抗肿瘤免疫。     

尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导尤文肉瘤患者特异性抗肿瘤免疫的实验研究

为了探讨尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,采用分离尤文肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导DC细胞,Trizol法提取患者尤文肉瘤细胞总RNA,用总RNA转染DC并诱导特异性CTL的扩增,用RT-PCR方法检测肿瘤总RNA加载的DC细胞的表达,用MTT法检测淋巴细胞的增殖和CTL的杀伤活性.结果RT-PCR测定显示尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC细胞可以呈递肿瘤特异性抗原,并特异性地表达其特有序列EWS-FLI1.经尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC特异性表面标志及功能相关分子表达均上调,转染后的DC可显著刺激自体T淋巴细胞增殖.诱导的特异性CTL对携带EWS-FLI1抗原的靶细胞的杀伤率显著高于LAK细胞和未经转染的DC.说明尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗可在体外诱导出特异性抗肿瘤免疫.     

运动员骨骼肌组织提取总RNA的新方法

为了寻求一种从微量组织中高效又简便的提取骨骼肌总RNA方法,实验对常用RNA提取方法Trizol法进行了改进和简化,提取的总RNA质量进行了电泳和光密度值检测.实验结果显示,运动员微量骨骼肌组织提取的总 RNA 28S、18S和5S三条带清晰可见, RT-PCR 扩增的β-actin 参照基因条带具有特异性,说明该方法从微量组织可有效、简便地提取骨骼肌总 RNA,提取总 RNA 的得率和纯度均符合分子生物学进一步实验要求,为运动相关基因的分子生物学调控机制等研究提供了一定的方法参考.     

样品保存温度和时间对总RNA提取的影响

目的:保障提取总RNA质量的前提下探索一种保存样品的适宜方法。方法:Trizol法(试剂盒)提取缺血复灌后肾组织总RNA。缺血45分钟后再灌注的大鼠肾脏,按照不同保存方法将样品分成四组,第一组液氮处理后立即提取总RNA;第二组-20℃冻存1天后提取总RNA;第三组-20℃冻存1周后提取总RNA;第四组液氮处理后1周后提取总RNA,然后检测各组RNA含量。结果:第一组RNA含量最多,第三组提取总RNA的含量最少。结论:提取总RNA的肾组织样品最佳保存方法是获得组织后立即提取总RNA,或者经液氮处理后保存在-20℃,一周后仍可获得较多含量的总RNA。     

利用RT-PCR法对木槿病叶初步检测

本试验利用不同方法对木槿病叶进行总RNA提取效果比较 ,同时用RT PCR方法 ,用广谱性植物病毒TMV、CMV、PXV和PVY的外被蛋白基因设计的引物对染病木槿的花叶病和皱缩病检测 .结果显示 :磁珠式固态样本总RNA快速分离纯化的方法提取的RNA比较完整 ,而Sangon(上海生工 )Trizol法提取总RNA和BioDev(博大泰克 )高效Trizol试剂提取总RNA相比较较差 ;不同模板浓度对PCR反应产物的影响较大 ;探讨了四种病毒对木槿的感染情况 ,分析得知 ,木槿的花叶病和皱缩病可能不是由于其中的病毒引起的 .本文虽然没有证明了木槿是由何种病毒引起的 ,但是对木本植物病毒的检测工作翻开了新的一页 ,并且对我国更多的木本植物的病毒检测将有更重要的意义 .     

湘文一号抗虫棉幼叶总RNA提取技术研究

棉花抗虫Bt基因克隆技术第一步就是从抗虫Bt基因特异性表达的幼叶中提取总RNA,基因的表达可以在RNA产生的不同阶段进行调控,纯化完整的总RNA是进行基因表达研究和从cDNA克隆新基因的基础.对比分析了CTAB-licl法、改良异硫氰酸胍一步法、Trizol一步法和试剂盒提取方法4种RNA提取技术,经琼脂糖凝胶电泳谱带结果检验和紫外分光光度计检测,发现前2种方法很难提取到理想的RNA,而后2种提取的RNA完整性较好,但用RNA Out试剂盒提取的RNA更加适用于反转录cDNA.     

预处理对于不同酵母细胞膜渗透性以及酶促磷酸化合成ATP的影响

酵母用于酶促磷酸化合成ATP主要受酵母细胞膜渗透性限制。显然,不同的预处理对不同菌株酵母细胞膜的渗透性有不同的影响。冷水浸洗的啤酒酵母和日晒干燥的面包酵母,其细胞膜的渗透性稍有提高,酶促磷酸化反应可在细胞内进行。因而可提供固定化细胞的条件,用于工业生产ATP。烘干的面包酵母和冰冻的白酒酵母,其细胞膜的渗透性大幅度增加,致使酶促磷酸化反应既不能在细胞内,也不能在细胞外进行,实验还证明,葡萄糖对白酒酵母细胞中的已糖激酶释放有促进作用,因而可用以提取酶液,或进一步制成固定化酶,工业生产ATP。     

酵母ZDNA重复顺序的分子克隆研究

为了对酵母分子生物学理论研究及实际应用的探讨,进行了酵母DNA分子克隆。采用重组DNA技术及放射性分子探针杂交法从克隆库中检测出两大类含有ZDNA重复顺序的重组子。第一类是含有端粒区ZDNA重复顺序及自主复制顺序的重组子。这些重组子对端粒区灼整合转化研究对开拓基因工程的应用具有重要意义。第二类是含有染色体内部分散的ZDNA重复顺序的重组子。这些重组子对研究内在ZDNA的结构和功能有重要的理论价值。按实验结果计算,在酵母基因组中大约存在有100个ZDNA重复顺序片段。     

两株产人参皂苷糖苷酶酵母菌株的18S rDNA和ITS序列分析

对两株产人参皂苷糖苷酶的酵母菌株进行核糖体18S rDNA和ITS序列克隆测定,获得了长度分别为1 477和1 478 bp的18S rDNA序列和长度分别为791和727 bp的ITS序列,对获得的基因序列进行比对及同源性分析,结果显示,两株酵母菌的18S rDNA序列的相似性达100%,而ITS序列的相似性则为66%,均与NCBI数据库中登录的啤酒酵母的相应序列同源性最高.从GenBank中选取部分不同种属的酵母菌ITS序列,以ITS为对象构建系统发育树,从分子生物学角度确定了两株酵母菌为酵母菌属的不同种类.     

酸乳饮料中杂菌的变化及作用

对酸乳饮料中的微生物进行分离鉴定,除两种发酵剂乳酸菌——嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)以外,其中酵母主要是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisive);细菌主要有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)和大肠埃希氏菌(E．coli);霉菌主要有黑曲霉(Aspergillus niger)和桔青霉(Penicillum citrinum)。在酸乳饮料腐败变质过程中,其中的微生物数量、酸碱度及含糖量存在一定的变化规律。     

啤酒废酵母的综合利用研究进展

分析了啤酒废酵母中的有效成分及研究利用现状,同时对啤酒废酵母的破壁问题进行了讨论.     

酵母提取剂的选择

本文以酵母提取液中蛋白质含量和氨基酸态氮含量为指标,系统地比较了不同酵母提取剂如氯化钠、乙醇、中性蛋白酶、β淀粉酶、鸡蛋清及溶菌酶等对酵母自溶和酶解的影响.得出氯化钠和乙醇是提取酵母提取物最有效的提取剂的结论.     

双元载体提供组蛋白H3/H4拷贝1的elp3Δ菌株的构建

人Elongator是在转录中有功能的组蛋白乙酰转移酶(HAT)复合物,为研究其催化亚基Elp3功能,构建了酵母组蛋白H3/H4拷贝1的双元表达载体pRS316CFT,通过PCR介导的基因敲除,获酵母基因组H3/H4缺失由双元载体提供单拷贝H3/H4的elp3Δ菌株.敏感性实验表明该载体提供H3/H4可维持酵母正常生长.本工作为构建H3/H4乙酰化位点突变菌株,用功能互补在体内研究人Elp3 HAT活性功能奠定了基础.     

利用TAP标记分析酵母糖基磷脂酰肌醇转酰胺基酶复合物

糖基磷脂酰肌醇(GPI)转酰胺基酶复合物将GPI脂连接到新合成的蛋白质上,在酵母中包括GAA1,GPI8,GPI16,GPI17,CDC91五种亚基,皆为必需基因.采用含TAP标记转酰胺基酶亚基的酵母细胞株,利用TAP法在自然状态下提取、纯化分离蛋白复合物的优势,鉴定与靶蛋白相关联的蛋白.对Gp i8p,Gp i16p,Gp i17p进行了研究.实验结果表明,酵母只含一个拷贝的Gp i8p,Gp i16p,Gp i17p亚基,为进一步研究转酰胺基酶复合物的功能和作用机制提供了线索.     

Requirement of either of a pair of ras-related genes of Saccharomyces cerevisiae for spore viability

Cells of the yeast, Saccharomyces cerevisiae, containing disruptions of either of two genes that are members of the ras oncogene family are viable, but haploid yeast spores carrying disruptions of both genes fail to grow.