骆驼刺高效离体植株再生体系的建立

通过对络驼刺（Ａｌｈａｇｉ ｐｓｅｕｄａｌｈａｇｉ Ｄｅｓｖ）不同外植体来源、不同培养基及激素配比的比较,建立骆驼刺培养高效再生植株实验体系。表明骆驼刺下胚轴切段在含１．５￣２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５￣１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的ＭＳ培养基中１００％诱导愈伤组织,在含１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和１．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的ＭＳ培养基上愈伤组织分化成苗,转至含２．０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ和０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的ＭＳ培养基上成根得到完整再生植株,组织学观察表明植株再生主要为器官发生途径,染色体稳定遗传。     

水母雪莲愈伤组织的多态性及其再分化条件的研究

以水母雪莲（Ｓａｕｓｓｕｒｅａ ｍｅｄｕｓａ Ｍａｘｉｍ．）的幼叶外植体,接种ＭＳ补加０．２～０．４ｍｇ／ＬＮＡ、０．２～４。０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的不同组合的培养基上培养３周,即形成大量的原始愈伤组织,其中以ＭＳ＋２。０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ培养基上的诱导效果最好,诱导率可达１００％。水母雪莲原始愈伤组织呈多态性,经继代培养可分离出白色水状、淡黄绿色致密的各紫红色疏松的３种愈伤     

荞麦的组织培养及植株再生

荞麦（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｏｅｎｃｈ．）无菌苗下胚轴切段在含不同激素配比的ＭＳ培养基上进行愈伤组织诱导,发现在 ２． ０ ｍｇ／Ｌ ２． ４－Ｄ与 １． ５ ｍｇ／Ｌ ６ ＢＡ组合时,可１００％地诱导出愈伤组织。愈伤组织在含 １．５ｍｇ／Ｌ ６ＢＡ和１．５ ｍｇ／Ｌ ２．４－Ｄ的激素条件下继代培养１代后转入含２ｍｇ／Ｌ ６ ＢＡ和１ｍｇ／Ｌ ＫＴ的 ＭＳ培养基上,计有８０％以上可分化出苗。转入０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的 １／２ＭＳ培养基上则可诱导出根。研究建立了荞麦离体诱导高频率再生植株的实验体系。     

雪兔子叶的组织培养及植株再生

以雪兔子无菌苗的幼叶为外植体,接种到ＭＳ补加ＮＡＡ（１．０－２．０）ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ（０．１－１．０）ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导愈伤组织,其中以ＭＳ＋ＮＡＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的诱导效果最好,经６周培养即可形成大量的黄绿色愈伤组织,诱导率可达１００％,经２－３次继代培养后,将生长发良好的愈伤组织转接到ＭＳ附加６－ＢＡ（０．５－２．０）ｍｇ／Ｌ、ＩＡＡ（０．０５－０．１）ｍｇ／Ｌ、Ｎ     

球茎甘蓝花托花柄组织培养及其植株再生

球茎甘蓝花托、花柄在ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ培养基上培养,诱导形成愈伤组织．愈伤组织在ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ３ｍｇ／Ｌ的分化培养基上培养,能分化出芽．花托在附加６－ＢＡ和ＧＡ３的ＭＳ培养基上培养,能直接出芽．花柄在附加６－ＢＡ或６－ＢＡ和ＧＡ３的ＭＳ培养基上培养,能直接出芽．芽通过继代培养,能再生植株     

巴西铁的茎组织培养

以巴西铁（Ｄｒａｃａｅｎａ　ｓａｎｄｅｒｉｅｎａ）茎段为接种材料，ＭＳ为基本培养基，吲哚乙酸（ＩＡＡ）、茶乙酸（ＮＡＡ），２，４－二氯苯氧乙酸（２．４－Ｄ）、６－苄氨基嘌呤（６－ＢＡ）、６一糠基氨基嘌呤（６－ＦＡ）、吲哚丁酸（ＩＢＡ）、生根粉（ＡＢＴ１）、玉米素（ＺＴ）为附加成分，进行诱导、分化、生根试验。诱导结果表明：ＩＡＡ不起作用，２，４－Ｄ有较好的促进作用，０．５ｍｇ／Ｌ（２，４－Ｄ）＋２ｍｇ／Ｌ（６－ＢＡ）组合，诱导率高达９０％。分化结果表明：ＮＡＡ、６－ＢＡ效果较好，６－ＦＡ作用不明显，ｌｍｇ／ＬＮＡＡ＋４ｍｓ／Ｌ（６－ＢＡ）＋２ｍｓ／ＬＺＴ组合，分化率最高．达８１．１％。生根结果表明：ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ（６－ＦＡ），ＭＳ＋０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２ｍｇ／ＬＩＢＡ，ＭＳ＋０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ（６－ＦＡ）＋ＡＢＴ１三种培养基均发根，生根率７０％以上，根粗，但有点脆，若培养基中加入活性碳产生的根则细而韧。     

播娘蒿子叶及下胚轴诱导再生植株的研究

用揪娘嵩种子,在附加６－ＢＡ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上获得无菌苗,幼苗的下胚轴在含６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上的出愈情况最佳,将来自下胚轴的愈伤组织培养了含有６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上分化出的丛生芽状态最好,最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ。     

播娘蒿子叶及下胚轴诱导再生植珠的研究

用播娘蒿种子,在附加６－ＢＡ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上获得无菌苗,幼苗的下胚轴在含６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上出愈情况最佳,将来自下胚轴的愈伤组织培养于含有６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上分化出的丛生芽状态最好,最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ．     

番红花离体培养下花柱－柱头状物的诱导及植株再生

番红花花被和花柱，在含４ｍｇ／ＬＫＴ，３ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．６ｍｇ／Ｌ４ＰＵ－３０的ＭＳ培养基中可定向再生红色花柱－柱头状物，花被的诱导频率大于花柱；长度为２２～６６ｍｍ的花芽具有较高的诱导频率（３４．４％）．番红花球茎在含１．４ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．６ｍｇ／ＬＫＴ或０．８ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的Ｂ５和ＭＳ培养基上，均能诱导出颗粒状愈伤组织，愈伤组织在附加０．６～１．４ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上，既可形成小球茎，也能长出完整植株     

风信子子房的组织培养

通过组织培养技术可以从风信子（ＨｙａｃｉｎｔｈｕｓｏｒｉｅｎｔａｌｉｓＬ．）子房诱导出完整植株．在我们的研究中,ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ较适于诱导愈伤组织和芽．适于芽生长的培养基是ＭＳ＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ２ｍｇ／Ｌ．ＭＳ（不加任何外源激素）培养基适于诱导生根     

发根农杆菌A4对荞麦的遗传转化

用发根农杆菌Ａ４对荞麦的下胚轴和子叶进行离体转化,得到ＲｉＴ－ＤＮＡ表达的发状根。不同的培养环境对发状根的和生长有一定的影响,表现为发状根在液体培养基上比在固体培养基上生长更为迅速,且在培养基中含一定浓度的Ｃｕ＾２＋有助于发状根的形成。     

发根农杆菌对苦马豆转化及植株再生的初步研究

用发根农杆菌A4转化苦马豆子叶和下胚轴外植体，获得转化发根．将发根转移到MS无激素培养基上，发根能够持续生长，并于继代40天后自发形成不定芽．将不定芽转移到1／2MS无激素培养基，长出不定根，形成再生植株．再生植株表现出典型的发根综合症，初步判断再生植株为转化植株．     

超声波辅助的发根农杆菌对黄瓜的遗传转化

由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积,提高农杆菌对外植体的转化频率。用野生型发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes)A4菌株感染黄瓜（Cucumis sativus L.) 无菌苗的子叶和下胚轴,建立了黄瓜的发根遗传转化体系。同时,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的添加与否等影响因素进行了研究。结果表明,采用外植体在添加0．5mg/L NAA和2mg/L 6-BA的MS培养基上预培养4d,超声波处理2s,共培养3d,在预培养共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果,发根诱导率为94．7％。乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显。冠瘿碱检测表明,发根确定能合成农杆碱。     

甘薯毛状根植株再生研究

用发根农杆菌Ｒ１０００菌株感梁甘薯（渝薯３４品种）,获得转化毛状根,从毛状根中选择出了５个无性系,当毛状根培养在含有２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋１ｍｏｌ／Ｌ玉米素的ＭＳ培养基上诱导出了愈伤组织,当愈伤组织培养在含有１ｍｇ／ＬＫＴ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ的培养基上,３周以后获得了再生植株,用随机及增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记检测出了再生植株的多态笥。     

发根农杆菌介导云南萝芙木的遗传转化

用发根农杆菌A4分别感染云南萝芙木幼嫩的真叶和茎段,诱导出毛状根,并对毛状根进行了离体培养, PCR检测转基因毛状根和HPLC检测毛状根中利血平的含量．结果表明:这两种外植体的转化频率及诱导出的毛状根差异极大,幼嫩的真叶叶片比茎段更适合作转化外植体用．PCR检测结果表明,诱导毛状根的基因rolB和 rolC整合到云南萝芙木基因组中,HPLC含量检测表明毛状根中利血平的含量比自然根中利血平的含量有显著的增加,因此可以作为利血平来源生产的有效途径之一．     

发根农杆菌A4转化黄瓜获得发状根再生植株

研究以黄瓜栽培品种津研四号为试材,比较了培养基中添激素对自然生根及发状根诱导的影响。无菌苗子叶及下胚轴经发根农杆菌Ａ４侵染后２周诱导出发状根,发状根在无激素的ＭＳ筛选培养基上能够自主生长,在附加ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的筛选分化培养基上分化出不定芽,ＧＵＳ染色表明转化植株呈阳性反应。     

怀牛膝毛状根诱导及培养体系的建立

以牛膝叶片为外植体,研究了不同发根农杆菌、培养基、乙酰丁香酮(AS)对毛状根诱导率及其生长的影响.结果表明,发根农杆菌不同菌种对牛膝叶片转化率有显著影响,3个供试菌种中ATCC15834菌株诱导率最高;在1/2MS无激素固体培养基上毛状根的诱导率及生长状况均优于MS培养基;100μmol·L-1 AS可以有效提高毛状根诱导率.毛状根从叶片形态学下端中脉切口处形成的愈伤组织上产生,能在无外源激素的培养基上自主生长.PCR扩增结果显示发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已在牛膝毛状根基因组中插入、整合并得到表达.建立了牛膝毛状根诱导培养体系,为利用毛状根大规模生产药用成分奠定了基础.     

盾叶薯蓣毛状根的诱导与薯蓣皂甙元的生产

报道盾叶薯蓣形成毛状根诱导的方法及不同毛状根系间生长速率与薯蓣皂甙元含量的差异．结果表明,盾叶薯蓣的幼叶和茎段难被R1601、A4和LBA9402等发根农杆菌菌株诱导出毛状根,但愈伤组织则比较容易;34%的被R1601菌株感染、并在添加200μmol／L乙酰丁香酮的共培养基上培养3d的愈伤可以在30d内形成毛状根;不同的毛状根系在生长速率与薯蓣皂甙元含量方面存在显著差异．     

芸芥发状根的诱导及其植株再生体系的建立

通过发根农杆菌R1000介导的遗传转化建立了芸芥发状根的诱导、培养及植株再生体系.研究了影响发状根诱导及生长的各种因素,通过PCR对所得发状根进行了分子水平的鉴定.结果表明:发根农杆菌R1000的rol B基因已被成功地转入并整合到该发根培养物的基因组中.     

转乙肝病毒表面抗原基因烟草发根的获得

构建了乙肝病毒表面抗原基因（HBsAg）植物表达载体,通过冻融法将HBsAg 基因转入到发根农杆菌LBA1314中,采用叶盘法将HBsAg基因导入到烟草中,获得了转基因烟草发根.对转基因烟草发根的GUS检测结果表明：转HBsAg基因烟草发根可以染成蓝色,而非转基因烟草的根没有染色反应.这说明gus基因在转HBsAg基因烟草发根获得了表达.