平菇原生质体制备、再生及灭活研究

紫孢侧耳、糙皮侧耳和佛罗里达侧耳的原生质体制备与再生的最佳条件为：用１％溶壁酶＋０．５％蜗牛酶的混合酶液酶解培养３～４天的菌丝体，１．５小时后，原生质体产量均可达１０￣（１０）个／Ｌ；三种侧耳的最佳再生培养基分别为ＳＭ、ＭＰ和ＲＰ，再生率分别为０．６１％、０．６７％和０．７６％。随着紫外线对原生质体处理时间的加长，再生率逐渐下降，当处理４ｍｉｎ时，再生率接近零。     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究Ⅲ.诱变株的选育及其产酶条件的研究

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出发菌株，在原生质形成和再生的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌株５３－Ｇ３８－６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ．该诱变株最适产酶条件为：培养基由质量分数（ｗ／％）为胰蛋白胨１，酵母膏０．５，玉米粉５，Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ０．４，ＫＨ２ＰＯ４０．０３，Ｎａ２ＣＯ３０．１组成，ｐＨ自然，培养温度４２℃，培养时间４４～４８ｈ，ｗ／％为０．２的ＣａＣＯ３可提高酶的产量．酶作用的最适条件：６２℃，ｐＨ１０．０，ｐＨ在９～１０之间稳定     

茴香原生质体培养研究

以茴香（ＦｏｅｎｉｃｕｌｕｍｖｕｌｇａｒｅＬ．）幼苗茎切段在ＭＳ附近２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导产生愈伤组织，经４～５次继代后形成胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转至ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ的液体培养基中培养，形成胚性细胞悬浮系。悬浮细胞在含有１．５％纤维素酶、１％果胶酶、０．５％蜗牛酶的混合酶液中酶解得到大量的原生质体，原生质体用修改的ＫＭ８Ｐ培养基中做液体浅层培养。２天后细胞发生一裂，两个月后形成０．５～１ｍｍ大小的小愈伤组织，转入含琼脂糖的固体培养基中３周后形成２～３ｍｍ的愈伤组织     

碱性脂肪酶产生菌——扩展青霉K40原生质体的制备和 …

采用０．６％纤维素酶加０．６％蜗牛酶的混合酶由扩展青霉Ｋ４０中获得大量的原生质体,并比较了菌龄、二硫苏糖醇（ＤＴＴ）预处理方式、酶解时间、温度、ｐＨ、培养基成分及稳定剂等因素对原生质体的形成和再生的作用。选出制备原生质体的最适条件：０．６％纤维素酶＋０．６％蜗牛酶,在０．６ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ＋０．３％ＣａＣｌ２,ＤＴＴ预处理０．５ｈ,菌龄为１９～２０ｈ,ｐＨ５．４,２８℃酶解３～３．５ｈ,原生质     

黑曲霉(Aspergillus niger)原生质体电融会(Ⅰ)─黑曲霉原生质体形成与再生的研究

通过紫外诱变获得两株稳定的黑曲霉营养缺陷型Ｍｕ２（Ｍｅｔ－）和Ｄ１２（Ｃｙｓ－），并首次证实低温黑暗保存数小时对黑曲霉突变株具有稳定作用。系统地研究了菌龄、渗透压稳定剂、温度、酶的浓度和酶解系统等因素对黑曲霉原生质体形成的影响．采用２％溶壁酶加０．５％纤维素酶，获得了大量的原生质体。在显微镜下观察原生质体形成和再生过程， Ｍｕ２和 Ｄ１２再生率分别为 ５４％和 ３３％。原生质体在正弦交变电场（１ＭＨｚ，４５０ Ｖ／ｃｍ）作用下形成珠串，在高压电脉冲（强度 ９．０ ｋＶ／ｃｍ、时程 ２５ μｓ）触发下，发生融合。     

酵母菌原生质体形成与再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和预处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应．统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为对数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用．影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂．确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件     

酵母嗜杀质粒融合转移──Ⅰ．融合转移系统的建立

以嗜杀酵母ＥＲＲ１和啤酒生产酵母ＡＳ２４２０出发菌株，建立了供体菌ＭＫ２－３：Ｋ＋Ｒ＋Ｌｅｕ－ρ＋（ｎ）和受体菌ＡＳ２４２０－１：Ｋ－Ｒ－ｌｅｕ＋ρ°（２ｎ）．对原生质体制备再生条件的研究结果表明两株菌的原生质体制备条件不尽相同；同一菌株原生质体形成与再生的最佳条件也不相同．有利于融合再生的原生质体制备条件是ＭＫ２－３：菌龄３０ｈ，蜗牛酶解量３０ｇ／Ｌ酶解时间３０ｍｉｎ，此时原生质体形成率为８０％，而再生率达１７．１％，这些条件对嗜杀活性无影响，再生菌落的嗜杀活性率达１００％；而ＡＳ２４２０－１；菌龄２４ｈ，蜗牛酶量２０ｇ／Ｌ，酶解时间３０ｍｉｎ，原生质体形成率为８１％，再生率为１８．１％．对四种渗透压稳定剂的再生效果实验表明甘露醇效果最佳，氯化钾次之，考虑到廉价，氯化钾是很好的代用品，在３０％ＰＥＧ６０００及Ｃａ２＋条件下进行原生质体融合，融合率可达８．９×１０－６，对其中的融合子ＭＡＲ４的遗传性状及嗜杀活性的稳定性检测，ＤＮＡ含量及细胞大小测定，ｄｓＲＮＡ质粒的提取及电泳结果分析和发酵性能测定，结果表明融合子ＭＡＲ４具有较高的嗜杀活性并可以稳定遗传，有与供体菌ＭＫ２－３嗜杀质粒ｄｓＲＮＡ相同的电泳行为，     

SD－5菌株原生质体形成与再生条件的研究

探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ再活化５ｈ，以ＳＭＭｐＨ６．５作酶解缓冲液，溶菌酶浓度０．６ｍｇ／ｍｌ，３４℃处理６０ｍｉｎ．     

Ba＿（1－x）Sr＿xTiO＿3（0≤X≤1）固溶体的合成及性质研究

本文用四氯化钛、氯化钡、氯化锶分别作为钛、钡、锶源，用草酸作沉淀剂，首先在６５℃反应制得Ｂａ＿（１－Ｘ）Ｓｒ＿ＸＴｉＯ（Ｃ＿２Ｏ＿４）＿２·４Ｈ＿２Ｏ先驱物，在５Ｏ℃烘干后，再于８００℃的烧１小时，得到Ｂａ＿（１－Ｘ）Ｓｒ＿ＸＴｉＯ＿３白色粉末。经Ｘ─射线衍射分析证明，当ｘ分别为０和１时，产品分别为四方晶系钛酸钡和立方晶系钛酸锶，其它为由四方晶系向立方晶系过渡的固溶体。晶胞参数计算可知，该固溶体为完全互溶固溶体，结果符合Ｖｅｇａｒｄ定律。电镜形貌分析证明粒度为０．３～０．５μｍ。制陶试验证实，ＢａＴｉＯ＿３纯相掺锶后，居里点普遍前移，介电常数均有所提高，当产品组成为Ｂａ＿（０．９）Ｓｒ＿（０．１）ＴｉＯ＿３时，居里点前移２０℃，介电常数为７４００，比钛酸钡纯相的介电常数提高了４倍。     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

利用紫外线诱变原生质体筛选四环素高产菌株的研究

以金色链霉菌为出发菌株，经溶菌酶作用制备原生质体，然后以紫外线对原生质体进行诱变处理，在再生培养基上再生培养，获得再生突变株，将其中的单菌落以琼脂挖块法进行初筛获得第２０号菌株，其相对效价为１．２８４。     

他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

新西兰青霉(Penicillium novae-zeelandiae)原生质体的制备与再生研究

利用酶对新西兰青霉菌的菌丝进行酶解获得原生质体,探究了影响原生质体制备和再生的因素,包括酶种类,酶浓度,菌丝培养时间,酶解时间和温度,pH,二硫苏糖醇(DTT)预处理等.结果显示最佳酶解条件为:菌丝体培养48h,用0.05mol·L~(-1) DTT预处理0.5h,以0.8mol·L~(-1)氯化钠作为稳定剂,31℃条件下经Lywallzyme(10mg·mL~(-1))酶解4h,原生质体数量达到4.75×107 g~(-1),再生率为18.0%.     

小克银汉霉原生质体的制备与再生

目的　为了利用微生物发酵生产γ 亚麻酸,研究了小克银汉霉原生质体制备与再生的条件。方法　利用液体振荡培养法,对酶解系统、渗透压稳定剂、菌丝培养时间、酶解温度等因素对小克银汉霉原生质体制备与再生的影响等进行了实验。结果　原生质体的产量可达到5.3×106个/mL,原生质体的再生率达到1.85%。结论　①用2%的蜗牛酶酶解28℃培养24h的菌丝,以0.7mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,酶解前以0 3%β 巯基乙醇处理30min,便可制备大量的小克银汉原生质体;②用含0.8mol/LKCl的高渗双层培养基包埋制备的原生质体,可得到较高的原生质体再生率。     

含铁和铬雷尼镍用于合成间苯二甲胺

在间苯二甲腈加氢制间苯二甲胺的雷尼镍催化剂中引入Ｆｅ和Ｃｒ后,降低了反应温度,明显加快了吸氢速度、间苯二甲胺的摩尔收率超过了８０％。实验结果表明经过简单再生后,可以恢复该催化剂的初始活性。     

活性炭负载杂多酸催化合成乙酸乙酯的研究

研究了以负载杂多酸催化合成乙酸乙酯的反应,探讨了不同催化剂、原料配比、催化剂用量、反应时间及催化剂重复使用次数等对酯化率的影响.研究发现,负载杂多酸催化剂对乙酸乙酯的合成具有催化活性高、选择性强、不腐蚀设备、不污染环境、可重复使用等特点.在SiW12/C催化剂用量为乙酸质量的6%时,回流3 h.酯化率可达94.4%.     

γ-亚麻酸菌株少根根霉原生质体形成与再生

用 6mg/m L纤维素酶 + 3mg/m L蜗牛酶 + 1 mg/m L溶菌酶作为混合酶酶解 2 8℃培养 2 6h的菌丝。以含 0 .6mol/L NH4Cl磷酸缓冲液 ( p H6.0 ) ,+ 0 .0 2 mol/L Mg SO4· 7H2 O+ 0 .4mmol/L Ca Cl2 作为渗透压稳定剂 ,酶解前以 0 .3% β-巯基乙醇处理 35 min,从少根根霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了观察 ,获得了制备原生质体的最适条件。并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验     

重组葡萄糖脱氢酶的表达及辅酶再生应用研究

为解决异源表达酮还原酶域EryKR1的重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(pET28a-eryKR1)催化环己酮还原时消耗的氢供体NADPH再生的问题,构建了克隆枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因gdh的重组菌E.coli BL21(pET28a-gdh),其中的gdh基因经Nucleotide BLAST功能分析显示与枯草芽孢杆菌9902的gdh基因序列(登录号为EF626962.1)的一致性达到100%。SDS-PAGE检测显示该重组菌经IPTG诱导后可以高效表达出葡萄糖脱氢酶(GDH),其表达量占全菌可溶性蛋白质的64%。GDH粗酶液的比酶活为137.90U/mg。通过气相色谱检测添加了E.coli BL21(pET28a-gdh)的E.coli BL21(pET28a-eryKR1)环己酮还原反应体系中的环己醇含量,结果显示加入重组GDH的双重组菌耦合反应体系中环己醇的产率为82.21%,是未添加GDH的反应体系对应值的3.23倍,表明重组GDH可以为EryKR1还原环己酮系统解决辅酶再生问题。     

Screening and characterization of a high taxol producing fungus by protoplast mutagenesis

The preparation,regeneration and mutagenesis of the taxol-producing fungus UV40-19 protoplasts werediscussed in the experiment.Totally 42 strains displayed hygromycin resistance.Six strains were found tobe positive mutants when screened on plate containing 90/ig/mL hygromycin.One hereditarily stablestrain UN0.5-6 was obtained,which raised the taxol yield from(376.38 ± 8.41)μg/L to(493.12 ± 11.36)μg/L.The optimal conditions for the preparation,regeneration and mutagenesis of the taxol producingfungus UV4...     

盐酸和硫酸再生D113树脂的技术指标分析

研究以周期制水量、工作交换容量和酸耗作为衡量指标时,分别用盐酸和硫酸再生D113树脂的最佳工艺条件和2种酸再生效果的比较,结果表明,用硫酸再生D113弱酸树脂比HCl再生有更好技术经济指标。