基于整体柱的固定化胰蛋白酶反应器及其在水解β-乳球蛋白中的应用

采用胰蛋白酶水解β-乳球蛋白备受关注。然而,该酶成本高昂,无法在食品工业中得到广泛应用。固定化不仅可提高游离酶的稳定性还可通过重复使用降低其成本。本研究分别采用2.1与6 μm的大孔有机整体柱为载体,通过共价固定制备固定化胰蛋白酶反应器 (monolith based immobilized trypsin reactors, MITRs) ,并比较了不同还原剂对固定化得率及酶比活的影响。相较于氰基硼酸,以2-甲基吡啶硼烷为还原剂的固定化方案虽提高了酶的比活,但导致固载量减少了32—50%。此外,孔径大小对酶的比活无显著影响。MITRs可有效水解β-乳球蛋白,且水解效率随着循环流速的增加而提高。其中使用2.1 μm-MITR的水解产物主要为分子量小于3 KDa的小肽。在18次重复实用过程中,6 μm-MITRs表现出更高的稳定性。     

β-乳球蛋白IgG抗原决定簇的识别

以β-乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β-乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β-乳球蛋白IgG抗原决定簇,探讨牛乳过敏机理.结果表明,β-乳球蛋白IgG抗原决定簇有2条,它们在β-乳球蛋白中的氨基酸序列定位分别为aa22-36和aa127-141.结果表明通过特异性水解抗原决定簇实现牛奶脱敏的方法是可行的.     

HPLC凝胶过滤色谱法测定牛奶及其乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白

建立了一种基于凝胶柱高效液相色谱的分析方法,可以一次性定量分离牛奶及乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白.组分分离度达到1.0,达到基线分离,回收率大于90%,相对标准偏差0.4%~3.1%.该方法不需对样品进行离心,简化了操作程序,减少了有效成分的流失,提高了蛋白质的回收率,具有准确、灵敏和迅速等特点,可用于牛奶及其乳制品的质量控制和定量检测.     

胰蛋白酶的固定化及其应用研究

通过γ-（2,3-环氧丙氧）丙基三甲氧基硅烷将胰蛋白酶固定在硅胶载体表面制备固定化胰蛋白酶. 实验测试了pH值,温度,时间等因素对固定胰蛋白酶的影响,利用红外光谱、热失重等方法对固定化胰蛋白酶进行了表征;通过高效液相色谱法考察了在弱碱性条件下固定化胰蛋白酶与16种天然小分子物质的结合情况. 结果表明在25 ℃,pH=8.0,反应18 h的条件下,对胰蛋白酶在硅胶载体上的固定量最大;且固定化胰蛋白酶与黄酮类成分、生物碱类成分、萜类成分有良好的结合,对酸类及嘌呤类小分子物质不结合.      

固定化胰蛋白酶的制备及其性质研究

以EDTA-Sephadex G-50作载体,戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶进行固定化.IR光谱结果显示:该项生化技术使胰蛋白酶得到了有效的固定,并且实现了较好的纯化,同时研究了固定化胰蛋白酶的一些性质,最适温度60℃,最适pH8.0,热稳定性,pH贮存稳定性以及对盐酸胍的稳定性均明显高于天然胰蛋白酶.     

牦牛、犏牛乳中β-乳球蛋白多态及表达差异

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对麦洼牦牛(包括半奶牦牛)、犏牛及黑白花奶牛乳中β-乳球蛋白（β-LG)遗传变异体进行分析，结果显示β-LG在牦牛、半奶牦牛中BE型占优势，有少数EE型，没有发现A基因．犏牛中BE型占优势，有少数AB型．黑白花奶牛中AB型占优势有AA型，BB型、AB型，没有E基因．用酶联免疫方法测定牛乳中β-LG含量，在不同品种牛中存在总量和各基因型间的差异，各基因在不同牛种的表达存在着差异．     

固定化β-葡萄糖苷酶的酶学性质

以壳聚糖微球为载体构建了固定化β-葡萄糖苷酶,研究了固定化和游离β-葡萄糖苷酶的酶学性质.结果表明:固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适pH均为4.5;固定化β-葡萄糖苷酶的最适温度为60℃,比游离酶低5℃;固定化β-葡萄糖苷酶的pH稳定性和贮存稳定性明显高于游离酶,但热稳定性略低于游离酶;固定化和游离β-葡萄糖苷酶的表观米氏常数和米氏常数分别为0.52 mmol/L和2.4 mmol/L;固定化β-葡萄糖苷酶重复分批酶解10 g/L的纤维二糖,其操作半衰期为31 d左右.     

β2-微球蛋白在过敏性紫癜患儿早期肾损伤中的临床意义

探讨尿微量白蛋白（MA）和尿β2-微球蛋白（β2-MG）在过敏性紫癜（HSP）患儿早期肾损伤中的意义;选取30例因过敏性紫癜入住兰州市西固区医院的患儿,以时间分辨免疫法检测30例HSP患儿尿中MA和β2-big的水平,同时选取25例同龄正常儿童尿液作对照;30例HSP患儿尿中MA及β2-MG均较正常对照组明显升高（P〈0．05）;β2-MG和MA为早期诊断HSP肾损伤的尿标志性蛋白。两者联合应用可提高其早期诊断的阳性率。     

胰蛋白酶在两种载体上的固定化效果比较

以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化最适条件大致相同,最适交联剂浓度为2%,胰蛋白酶浓度为3%,最佳交联时间为10h,交联温度和固定化温度均为10℃.纤维素微球和片状载体在相同条件下酶固载量分别达到145mg/g和112.6mg/g,活力回收率分别为17.3%和14%.两种载体相比,纤维素微球作为固定胰蛋白酶的载体效果更佳.     

两种不同方法固定化β-葡萄糖苷酶的研究

以自制的壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,考察了壳聚糖浓度对微球制备的影响,并采用吸附-交联法和交联-吸附法两种方法对β-葡萄糖苷酶固定化进行了研究.结果表明:(1)当壳聚糖:2％乙酸溶液=1∶20(w/w)时,最适合制球,成球粒径平均约为1.5mm.(2)采用交联-吸附法时固定率为43％,储存5天后剩余酶活力为67％,10天后剩余酶活力为52％,采用吸附-交联法时固定率为32％,储存5天后剩余酶活力为60％,10天后剩余酶活力为43％.因此,优化的固定化β-葡萄糖苷酶的方法为交联-吸附法.     

海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的制备及其性质研究

在活性炭、明胶等8种固定化载体筛选的基础上研究了以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化β-葡萄糖苷酶的条件,并对固定化酶的酶学性质及其在催化制备大豆异黄酮活性苷元染料木素中的应用进行了研究。β-葡萄糖苷酶在0.20%戊二醛溶液中交联2 h后再与20 g/L海藻酸钠混合,然后逐滴加到4 g/LCaCl2溶液中,固化1 h后过滤、洗涤得固定化β-葡萄糖苷酶,固定化酶的酶活回收率为83.67%。固定化酶的最适温度、热稳定性、pH值稳定性以及与底物的亲和力都有所提高,最适pH值基本不变。该固定化酶重复使用6次后其活力仍保持90.94%,染料木苷转化率达60.02%。     

绵羊β-乳球蛋白基因调控序列的分离、克隆及序列分析

根据绵羊β－乳球蛋白基因调控区ＤＮＡ序列设计了两个引物，以绵羊基因组ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增，得约９００ｈＰ的ＤＮＡ片段插入到ｐＵＣ１８质粒的ＸｂａＩ／ＫｐｎＩ位点之间．ＰＣＲ产物的克隆经双酶切、ＰＣＲ检测和序列分析证明是绵羊β－乳球蛋白基因的调控序列．序列分析结果表明该克隆片段与绵羊β－乳球蛋白基因相应ＤＮＡ序列相比有很高的一致性．研究结果为指导异源基因的表达和进一步利用乳腺特异表达的转基因动物生产医用蛋白提供了有效的调控序列．     

类风湿性关节炎与血清β_2-微球蛋白的关系

为探讨类风湿性关节炎(RA)与血清β_2-微球蛋白(β_ 2-MG)的关系,我们采用放免法对28例RA患者空腹外周血β_2-MG水平进行了测定,并与20例正常人作了对照。结果:RA患者β_2-MG(mg/L)水平:晚期(4. 97±1.21,n=14)、中期(3.66±1.37,n=8)、早期(2.87±1.04,n=6)均比对照组(1.64±0.48,n=20)明显增高(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且与病情严重程度呈正相关。提示测定β_2-MG可了解RA时机体免疫状况,并对病情的轻重加以判断。     

壳聚糖固定化β-葡萄糖苷酶酶学性质研究

采用交联吸附法将β-葡萄糖苷酶固定在壳聚糖上,方法简便易行.固定化酶的最适反应温度为50℃,相比于游离酶上升了10℃,且固定化酶提高了游离酶的热稳定性.固定化酶最适pH值为6.0,与游离酶相比上升了1.0,更耐碱.固定化酶对化学试剂稳定性增强,贮藏稳定性有显著提高.固定化酶优化了游离酶的部分酶学性质,具有一定应用价值.     

甲基对硫磷分子印迹整体柱的制备及其在固相萃取中的应用

以甲基对硫磷为模板分子,采用原位逐步聚合法制备了具有良好识别性能的分子印迹聚合物(MIP)整体柱,系统考察了甲基对硫磷与其结构类似物在该柱上的选择性分离富集特性.用聚合物整体柱固相萃取了蜂蜜中的甲基对硫磷.结果表明,聚合物整体柱对模板分子产生了印迹效应,对甲基对硫磷有明显的选择性.本文以采用C18色谱柱,以甲醇-水(体积比为85:15)为流动相,流速为1.0mL/min,吸收波长为270nm,可在15分钟实现甲基对硫磷的测定.     

尿微量白蛋白和β_2-微球蛋白在过敏性紫癜患儿早期肾损伤中的临床意义

探讨尿微量白蛋白(MA)和尿β2微球蛋白(β2-MG)在过敏性紫癜(HSP)患儿早期肾损伤中的意义;选取30例因过敏性紫癜入住兰州市西固区医院的患儿,以时间分辨免疫法检测30例HSP患儿尿中MA和β2-MG的水平,同时选取25例同龄正常儿童尿液作对照;30例HSP患儿尿中MA及β2-MG均较正常对照组明显升高(P<0.05);β2-MG和MA为早期诊断HSP肾损伤的尿标志性蛋白.两者联合应用可提高其早期诊断的阳性率.     

梁-柱支承的张拉膜结构整体找形分析

用力密度法对梁-柱支承的张拉膜结构进行找形分析．在找形过程中考虑了膜体与梁-柱构件之间的相互作用．文中推导了结构体系的整体找形公式,其中梁-柱结构分别采用了小变形理论和有限变形理论建立模型,并编制了相应的找形分析程序．通过算例对这种带梁-柱支承的膜结构整体找形问题进行了分析和讨论,结果证明了文中方法的可行性．     

新型手性HPCE 整体柱拆分氧氟沙星

采用双-(6-氧-间羧基苯磺酰基)-β-环糊精手性HPCE整体柱对药物氧氟沙星手性拆分,在高效毛细管电泳仪上,考察了缓冲液浓度、pH值、分离电压、进样量对分离度的影响.结果表明:在pH 4.0,浓度为50 mmol/L的Tris-磷酸缓冲液中进样20 s,工作电压25 kV,检测波长254 nm条件下,氧氟沙星对映体得到基线分离,分离度达到7.72.氧氟沙星对照品浓度在(2～6)×10-9 g/L,前峰峰高与浓度的线性相关系数r=0.9804,后峰峰面积与浓度的线性相关系数r =0.9872.     

分子印迹整体柱的制备及应用

分子印迹技术是最近才得到迅猛发展的一种新技术,它结合了高分子化学、生物化学、等学科的知识,是合成预定选择性固定相的新兴技术;整体柱是新型的色谱固定相技术.二者的结合集成了各自的特色,是当前的前沿课题.本文就分子印迹整体柱制备及应用进行了综述.     

硅胶整体柱的制备

研究了硅胶整体柱的制备工艺及温度、pH值对凝胶化过程的影响,探讨了凝胶形成的机理.结果表明,以四甲氧基硅烷及聚乙二醇为原料,采用改进的溶胶-凝胶工艺制备的硅胶整体柱,具有微米级鞍形骨架、微米级大孔和纳米级中孔,适合于对大分子量的样品进行高效、快速的分离.