不同破壁方法获取海洋毕赤酵母提取物及其应用

以从红树林沉积物中分离的海洋毕赤酵母(Pichia guilliermondii) SY-19菌株为实验材料,制成质量分数分别为5.0%、7.5%及10.0%的细胞悬液,用蜗牛酶法、双酶法(甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶)及热碱法分组进行破壁处理12 h,每3 h检测1次酵母细胞数量及多糖、蛋白质、氨基氮和核酸等营养物质的含量,计算破壁率和得率,确定制备酵母提取物的最佳方法,并利用最优方法制备酵母提取物拌料,对经有害无机氮胁迫处理2周的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别以配合饲料、菌液拌料和酵母提取物拌料投喂3周,比较对虾的存活率及生长状况.结果表明:用双酶法、以质量分数5.0%的酵母悬液处理12 h,蛋白质、氨基氮和多糖的得率最高,营养保留效果最好;所制备酵母提取物作为饲料添加剂,对胁迫过的对虾经3周的恢复饲养,酵母提取物拌料饲喂的对虾的存活率、体质量最高(77.67%±4.62%,2.79±0.11 g),菌液拌料饲喂的次之(62.00%±9.90%,2.44±0.16 g),未拌料的最低(53.67%±12.91%,2.19±0.02 g),差异有统计学意义(P0.05).     

废弃菌体水解液作氮源发酵产腈水合酶的研究

工业生产中微生物细胞在发酵结束后常被作为废弃物丢弃,容易造成环境污染和资源浪费.对废弃细胞进行破壁处理,废弃菌体水解液可替代酵母膏作有机氮源用于发酵产腈水合酶.通过采用超声波、冻融、热碱3种方法破碎细胞,测定水解液中氨基氮含量的高低,确定选择热碱法为最佳细胞破碎方法.通过正交实验选出最优破壁条件为:N aOH加入量5g.L-1,水解温度100℃,水解时间1.5h.在最佳破壁条件下,细胞破碎液中氨基氮含量为24.5 g· L-1.并考察了酵母膏与水解液的不同配比对腈水合酶发酵酶活的影响,确定了酵母膏与废弃菌体水解液的最佳配比为3:2.实验结果表明:利用热碱法处理废弃菌体的水解液作为氮源部分代替酵母膏,发酵酶活为1 063万U·mL-1,而完全利用酵母膏作为氮源的发酵酶活为1 055万U·mL-1.     

双酶提取蒲公英根多糖工艺优化及其抗氧化性研究

以蒲公英根烘焙粉为原材料,研究了酶添加量、酶解温度和酶解时间在单酶和双酶协同酶解条件下对多糖得率和DPPH自由基清除率的影响,并采用响应曲面法优化了酶解工艺参数。结果表明,单酶法提取1g蒲公英根多糖的适宜条件为:料水比(g∶mL)1∶30,纤维素酶酶解温度50℃,酶添加量1.0mL;木瓜蛋白酶酶解温度60℃、酶添加量2.0mL。双酶法多糖提取率高于单酶法,影响多糖得率的工艺因素主次顺序为酶解时间、酶解温度、酶添加量。适宜的多糖提取条件为:料水比(g∶mL)1∶30,木瓜蛋白酶悬液(200U/mL)添加量1.98mL,纤维素酶悬液(200U/mL)添加量0.99mL,55℃提取1.9h,此时多糖得率为32.97%±0.13%,DPPH 自由基清除率为92.31%±0.25%。烘焙和酶解工艺可提高蒲公英根多糖得率和DPPH自由基清除率。     

短柄五加果实多糖对果蝇寿命、繁殖力及冷热胁迫下死亡率的影响

研究短柄五加果实多糖对果蝇寿命、繁殖力及冷热胁迫耐受力的影响。短柄五加果实多糖（0%、0.01%、0.05%、0.2%、1%）饲喂果蝇,统计其平均存活天数、平均寿命、最高寿命、繁殖力及在冷热胁迫下死亡率。1%短柄五加果实多糖显著延长果蝇半数死亡天数,平均寿命及最高寿命;0.05%多糖处理的果蝇在子代数量、冷热胁迫下存活率最高。短柄五加果实多糖可促进果蝇寿命延长,提高繁殖能力、增强耐冷/热胁迫能力。     

银杏花粉不同破壁方法的比较分析

试验比较了匀浆机破壁、高压细胞破碎仪破壁、温差破壁、酶法破壁等4种破壁方法对银杏花粉的破壁效果。结果表明：匀浆机破壁法优于其他破壁方法,且操作简单,能达到破壁要求。匀浆机破壁的最佳工艺参数为：转速15 000 r/min、花粉(g)与水(mL)的配比即料液比1∶50、时间10 min,破壁率达99.6%。     

葛根中黄酮提取工艺的优化及抗氧化作用

以时间、温度和料液比3个单因素进行正交实验,确定葛根中黄酮提取的最佳条件.结果表明,提取的最佳条件为:m(料)∶V(液)=(1∶40)g/mL,60℃浸提3h,葛根粗提率为82%,黄酮提取率最高为18.04%.以模式生物秀丽隐杆线虫(线虫)为模型,考察质量浓度分别为1,2,5 mg/mL黄酮提取物对线虫的抗氧化作用.结果表明,在35℃培养12h,1mg/mL黄酮提取物喂食线虫的存活率较对照组有显著提高,即黄酮提取物有明显的抗氧化作用.     

HCG β抗肿瘤核酸疫苗的纯化工艺

对HCGβ抗肿瘤核酸疫苗的预处理和层析纯化工艺进行了研究。用碱裂解法对湿菌体进行预处理,当菌体湿重（g）∶悬浮液体积（mL）∶裂解液体积（mL）∶中和液体积（mL）为1∶2∶2∶2,碱裂解时间为8-12 min时,质粒的产量最高,可达32.94 mg/g。用Sepharose 6 FF凝胶过滤层析去除RNA和蛋白质,再用Plasmidselect亲和层析捕获超螺旋质粒DNA,质粒DNA的得率为48.3%。用L-Histidine-agarose亲和层析可从澄清的碱裂解液中一步分离纯化超螺旋质粒DNA,质粒DNA得率为51.62%。经琼脂糖核酸电泳检测,HCGβ抗肿瘤核酸疫苗超螺旋质粒DNA的纯度为100%电泳纯。     

松花粉提取物对大鼠实验性高脂血症的预防功能研究

目的 观察松花粉提取物对大鼠实验性高脂血症的预防功能,为松花粉提取物的应用提供实验依据.方法 Wistar大鼠84只,随机分为正常对照组、松花粉提取物0.3、0.15和0.075 g/kg组、辛伐他汀2 mg/kg组、溶媒对照组及高脂模型组.正常对照组,饲喂正常饲料;各给药组在饲喂高脂饲料同时,灌胃（ig）给予相应的药物,溶媒对照组灌胃等容积的葡萄籽油;高脂模型组饲喂高脂饲料同时,灌胃等容积蒸馏水.实验周期为8周,末次给药后12h,检测血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C含量.结果 松花粉提取物各组动物血清中TC、TG和LDL-C含量显著低于高脂模型组（P ＜0.05-0.01）;松花粉提取物0.3 g/kg和0.15 g/kg组动脉粥样硬化指数低于高脂模型组（P＜0.05）.结论 松花粉提取物对高脂饲料诱发的大鼠实验性高脂血症有一定的预防功效.     

莲心中总黄酮的提取工艺优化研究

以莲心为原料,以总黄酮得率和提取物得率为指标,考察提取温度、乙醇体积分数、提取时间和料液比4个主要因素,通过单因素和正交试验,研究莲心中总黄酮的最佳提取工艺。研究结果表明,莲心中总黄酮的最佳提取工艺为:乙醇体积分数70%,提取温度90℃,料液比1∶30,提取时间2.5h;在此工艺条件下,总黄酮得率1.669%,提取物得率30.748%。     

2-脱氧葡萄糖对酵母虾青素积累及酶法提取的影响

2-脱氧葡萄糖是一种酵母细胞壁合成抑制剂,红发夫酵母培养中添加0．0005％—0．002％（w／v）的2-脱氧葡萄糖可使生物量基本保持不变,但能促进虾青素积累,在增加虾青素产量的同时缩短酶法提取的时间。当添加浓度为0．002％时,虾青素含量可提高到对照组的113．7％,若采用胞壁溶解酶对红发夫酵母破壁提取虾青素,作用12h提取率可达94．7％。同时,2-脱氧葡萄糖应在红发夫酵母培养的前36h添加。     

自然发酵乳及传统开菲尔粒中酵母菌的多样性研究

研究自然发酵乳和内蒙古牧区传统开菲尔粒中酵母菌的多样性,目的是探寻酵母菌的主要菌群和种属类型,为筛选可发酵低酒度发酵乳的酵母菌奠定基础。该研究首先进行稀释涂布和划线分离出酵母菌株、然后进行菌落形态和细胞形态的初步分类,再进行5.8SrDNA-ITS区域RFLP分子鉴定,将分离到的130株酵母菌区分为10种形态类型、6种分子类型,分别为马克思克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)、隐球酵母菌(Cryptococcus sp.)、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)、陆生伊萨酵母菌(Issatchenkia terricola)和季也蒙毕赤酵母菌(Pichia guilliermondii)。其中马克思克鲁维酵母菌、酿酒酵母菌和季也蒙毕赤酵母菌为优势菌群,具有酿造低酒度发酵乳的潜力。     

莱菔子中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定

运用微波技术提取莱菔子总黄酮和多糖,用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果表明：莱菔子中总黄酮含量为0．60％,平均回收率为100．3％,RSD=1．04％(n=5)。多糖含量为12．73％,平均回收率为101．54％．RSD：0．46％(n=5)。运用微波技术从莱菔子中联合提取总黄酮和多糖,其反应速度加快,提取效率提高。     

发酵法提纯大豆糖蜜中低聚糖的菌株筛选

 大豆糖蜜是大豆浓缩蛋白生产的副产物,是脱脂豆粕乙醇萃取液经浓缩后形成的一种棕色黏稠的浆状物,含有多种功能性成分,主要有大豆低聚糖、大豆异黄酮等生理活性物质,对人体健康有着许多有益的作用。本文运用发酵法消化大豆糖蜜中的单糖和多糖,提高功能性多糖浓度,达到糖原纯化的目的,对1种乳酸菌、4种酵母菌进行筛选试验,筛选出消耗蔗糖最多,同时水苏糖、棉子糖等低聚糖保留率最高的1种酵母菌,即酿酒酵母C。其最佳发酵条件为,糖蜜初始糖浓度9%,初始pH值6.5,接种酿酒酵母C的接种量3%,在30℃的条件下发酵24h。大豆糖蜜发酵液中各糖分的保留率为：蔗糖0%,功能性低聚糖60.90%,果糖和葡萄糖含量24.46%,发酵的重复稳定性高达95%以上。     

高效产絮突变体Enterobacter sp. W16-c的筛选及其产絮特性

采用原生质体融合-紫外诱变技术分离得到高效絮凝剂产生菌Enterobacter sp. W16-c,并对其产絮特性和影响因素进行分析。结果表明:Enterobacter sp. W16-c的絮凝能力比出发菌提高13.91%;突变菌株发酵产絮最适碳源为蔗糖,最适氮源为酵母膏,最佳初始发酵pH值为5～9;金属离子Fe2+、Na+对Enterobacter sp. W16-c的产絮效果有促进作用;在最佳发酵条件下所产絮凝剂的絮凝率可达96.2%;Enterobacter sp. W16-c的主要成分为多糖;Enterobacter sp. W16-c是一株产絮性能稳定的高效产絮突变菌株。     

酵母提取物对水母雪莲悬浮培养合成紫丁香苷的影响

研究了酵母提取物诱导的水母雪莲悬浮培养时紫丁香苷生产和相关次级代谢酶的活性.酵母提取物促进了紫丁香苷的生产,最优的添加方法是在培养15 d时添加1.5%的酵母提取物.最大紫丁香苷产量达671.9 mg/L,是对照实验的3.25倍.诱导子处理后G6DPH、PAL和POD活性显著增加,当处理6 h后酶活性达到最大值.     

表达胰岛素的毕赤酵母生长动力学及诱导策略

对本实验室构建的一株重组巴斯德毕赤酵母基因工程菌的生长及诱导进行了研究,结果表明生长阶段菌体的生长与限制性基质甘油残留浓度的关系符合Monod关系式,细胞最大生长比速率为0.204h^-1,饱和常数为24.3g/L。经参数推导得理论最大细胞对甘油得率为0.497g/g,以及菌体生长维持系数为0.007g/g·h,后者说明此株工程菌有高密度发酵的潜力。诱导阶段补加酵母提取物、大豆蛋白胨和微量元素能有效提高目的蛋白产量。在发酵罐上罐试验中,目的蛋白产量达256mg/L,蛋白产量是摇瓶发酵蛋白产量的5倍多。     

柱层析循环联合法提取双刺参胶囊中的总皂苷及多糖

探索柱层析循环法联合提取双刺参胶囊中总皂苷及多糖的工艺条件,并对总皂苷体外活性进行研究.以提取液中总皂苷及多糖提取率为指标,通过对提取溶剂、吸涨率、浸泡平衡时间、洗脱流速等因素的考察确定提取的最佳工艺.结果显示,总皂苷及多糖提取溶剂分别为40%乙醇溶液和纯水、吸涨率分别为3.8 mL·g－1和3.6 mL·g－1、浸泡平衡时间均为2 h、接样速率为0.4 mL·min－1.在此条件下,总皂苷及多糖经过2轮连续提取,提取率均在95%以上,浸膏中总皂苷及多糖的含量分别为18.05%和48.37%.体外抗氧化试验表明,双刺参提取物具有一定的抗氧化能力.利用柱层析循环联合法提取总皂苷及多糖,提取温度低、乙醇用量少、能源消耗低、方法简单,为双刺参胶囊的进一步研究奠定了基础.     

紫外分光光度法测定啤酒酵母水溶性多糖的含量

采用紫外分光光度法对啤酒酵母中水溶性多糖的含量进行测定,发现啤酒酵母水溶性多糖在波长489nm处有最大吸收峰。葡萄糖浓度在1.55~13.286μg.mL-1(r=0.9989)范围内、线性关系良好,平均回收率在6.1%,RSD为2.3%。     

动态磁场对微生物的作用

采用动态磁场探讨磁场作用下微生物的存活规律.研究结果表明:动态磁场处理后酵母菌大部分死亡;动态磁场对霉菌的影响比对酵母菌更大,约80%的霉菌孢子因为磁场的作用而不能萌发;动态磁场处理细菌因为种类的差异而有所不同,但大部分细菌均失活.动态磁场对微生物的作用造成了细胞结构的破坏,使细胞内的物质(如核酸)泄漏到菌液中.因此,磁场处理技术应用于工业生产中的微生物控制是可能的.     

毕赤酵母YPS1基因的失活对减少重组人血清白蛋白降解的作用

重组人血清白蛋白在毕赤酵母系统的分泌表达产物除了完整的重组人血清白蛋白外,还存在一约45 ku大小的主要降解片段,直接影响了重组人血清白蛋白的产量和后续的纯化研究.为了减少重组人血清白蛋白的降解,采用同源重组的方法,使毕赤酵母中蛋白酶基因YPS1失活,构建获得蛋白酶缺陷型菌株,研究YPS1基因失活后对重组人血清白蛋白降解的影响.结果表明,毕赤酵母YPS1基因的失活有效地减少了重组人血清白蛋白的降解,完整的重组人血清白蛋白在总蛋白中的比例由原来的60%提高到88%,降解片段由原先的40%降低到10%左右.