PKCα抑制剂Calphostin C抑制TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞迁移

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)可以诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的迁移,但其促进迁移机制尚不清楚.研究使用Calphostin C抑制剂来抑制PKCα的活性,从而研究TNF-α诱导MSCs迁移的作用是否通过激活PKCα来完成.利用50,ng/m L的TNF-α处理MSCs,划痕实验和Transwell实验表明TNF-α可以诱导MSCs的迁移.加入PKCα的抑制剂Calphostin C后,可以抑制TNF-α对MSCs迁移或侵袭的诱导,并降低迁移标志基因MYL9(Myosin light chain 9,MYL9)、CYR61(Cysteine rich 61,CYR61)的表达.以上结果表明,PKCα抑制剂Calphostin C可以抑制TNF-α诱导的MSCs迁移.     

Graves病患者血中细胞因子的变化

目的:探讨白细胞介素6(IL-6),干扰素γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)在Graves病(GD)发病机制中的作用,寻找GD新的诊断指标.方法:用双抗体夹心ELISA法测定试验组68例GD患者和对照组29健康人IL-6、IFN-γ、TNF-α血中浓度,同时,用电化学发光法测定试验组和对照组成员促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4).结果:试验组GD患者血中浓度IL-6、IFN-γ、TNF-α均高于对照组(P＜0.05).FT3、FT4分别与IL-6、IFN-γ、TNF-α不相关(P＞0.05).结论:IL-6、IFN-γ、TNF-α参与了GD的发病,在GD发病机制中起重要的作用,在临床上似可作为诊断GD的参考指标.     

TNF-α、INF-γ和EPO与肿瘤伴ACD造血功能低下的相关性

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)和红细胞生成素(EPO)对肿瘤伴慢性病贫血(ACD)造血功能的影响.方法:检测肿瘤患者铁代谢参数;ELISA法检测患者血清TNF-α、IFN-γ和EPO水平;观察3种细胞因子及患者血清对骨髓红系集落生成单位(CFU-E)生成的影响.结果:肿瘤伴ACD患者血清EPO水平高于正常对照,而低于IDA患者;血清TNF-α、IFN-γ水平显著升高,且与血球压积、血清铁水平负相关;TNF-α、IFN-γ可抑制正常骨髓CFU-E生成,患者血清可抑制自身骨髓CFU-E生成,rhEPO可部分纠正细胞因子对CFU-E的抑制.结论:TNF-α、IFN-γ和EPO与肿瘤伴ACD造血功能低下有关.     

肿瘤微环境酸化下MDSCs通过ASICs促进TNF-α表达

为探讨肿瘤微环境酸化条件下髓源抑制细胞(MDSCs)中酸敏感离子通道(ASICs)与肿瘤坏死因子(TNF-α)表达之间的联系,用实时定量PCR方法检测了正常生理条件(pH 7.3)、酸性条件(pH 5.5)及加入ASICs抑制剂等不同处理后小鼠TNF-α表达含量的变化.结果表明:正常生理条件下,肿瘤组MDSCs中TNF-α的表达含量明显高于正常组,在酸化环境下其表达含量明显高于正常生理条件;加入ASICs非特异性抑制剂阿米洛利或双氯芬酸后,MDSCs中TNF-α表达含量明显受到抑制;加入ASICs亚基1抑制剂PcTx1后TNF-α含量明显降低,而加入布洛芬、ASICs亚基3抑制剂APETX2后,MDSCs中TNF-α表达含量无明显变化.故在肿瘤微环境酸化条件下,MDSCs通过ASICS亚基1促进MDSCs表达TNF-α.     

2型糖尿病患者性别、肥胖对血中RBP4和TNF-α的影响

目的:检测不同性别2型糖尿病患者正常体重组和肥胖组的血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,探讨两者与体脂,糖类、脂类代谢,胰岛素敏感性等的相关性.方法:采用HOMA-IR评价各组胰岛素敏感性,测定受试者的体重指数(BMI),腰臀比(WHR),检测空腹状态下血清RBP4、TNF-α、血糖、HbA1c、血脂和胰岛素水平.结果:超重或肥胖者,RBP4及TNF-α浓度均比体重正常者高;男性RBP4浓度均比女性高,TNF-α浓度无性别差异.RBP4与TNF-α显著正相关.Pearson相关分析:不论性别,血清RBP4和BMI、WHR、TG及HOMA-IR均有显著正相关(P<0.05).而TNF-均与腹内型肥胖、脂代谢有关,TNF-α     

肝肾综合征患者血浆TNF-α、NO及内毒素水平变化

目的:探讨肝硬化合并肝肾综合征(HRS)患者血浆一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及内毒素的改变.方法:本研究共分3组,即肝硬化合并HRS组33例;肝硬化无HRS组29例;正常对照组30例.应用ELISA双抗体夹心法测定血浆TNF-α,亚硝酸盐还原酶法测定血浆NO,采用鲎试验检测血浆内毒素,并分析血浆内毒素与一氧化氮、肿瘤坏死因子-α的相关性.结果:肝硬化合并HRS组与正常对照组比较血浆NO、TNF-α、内毒素水平差异有非常显著性意义(P＜0.01),与肝硬化无合并HRS组比较差异有显著性意义(P＜0.05),肝硬化无合并HRS组与正常对照组比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).肝硬化合并HRS患者血浆内毒素与NO、TNF-α存在正相关,相关系数分别为0.84和0.88,P值均＜0.001.结论:肝肾综合征(HRS)患者体内血浆内毒素、NO、TNF-α均明显升高,并可能参与了肝肾综合征(HRS)产生的重要病理生理改变.     

银屑病TNF-α及c-myc表达的变化及意义

目的 探讨银屑病的免疫机制,为银屑病的临床诊治及新药研制提供实验依据.方法 利用细胞培养技术培养HaCaT细胞,采用ELISA法检测银屑病外周血TNF-α及c-myc的表达情况以及TNF-α刺激后c-myc在银屑病HaCaT细胞中的表达情况.结果 与正常对照组比较,银屑病组外周血血清中TNF-α及c-myc的水平明显升高(P<0.01);80 ng/mL的TNF-α可刺激HaCaT细胞高分泌c-myc蛋白,组间比较差异具有统计学意义(P<0.01).结论 TNF-α是通过影响c-myc的分泌在银屑病发生、发展过程中起重要作用的.     

黄芪多糖对脂肪细胞释放肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-6的影响

目的:探讨黄芪多糖对脂肪细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的抑制作用及机制.方法由3T3-L1细胞诱导分化成熟的脂肪细胞随机分为实验组和对照组.实验组脂肪细胞以0.1g·L-1黄芪多糖培养基干预,对照组脂肪细胞普通培养基培养.ELISA法测两组脂肪细胞及培养基中TNF-α、IL-6蛋白的含量,及逆转录-聚合酶链反应检测两组脂肪细胞TNF-α蛋白和IL-6蛋白mRNA水平.结果实验组脂肪细胞及培养基中TNF-α、IL-6蛋白的含量低于对照组(P=0.000),而且实验组脂肪细胞TNF-α蛋白和IL-6蛋白mRNA水平低于对照组(P=0.000).结论:黄芪多糖可抑制脂肪细胞释放炎症细胞因子,控制脂肪组织的慢性炎症反应.     

两种方法建立大鼠骨性关节炎模型中软骨细胞变化比较

为了比较常规手术法及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)干预法构建大鼠骨性关节炎模型的差异,探寻骨性关节炎前期动物研究中简捷有效的模型建立方法。通过选取36只SPF级SD大鼠雄性随机分为健康对照组(control group)、假手术组(sham-operated group)、手术组(operated group)和TNF-α干预组(TNF-αgroup),4周后取材,培养提取的各组原代软骨细胞,采用MTT比色法检测不同处理后对软骨细胞活力的影响;红胞调之原位检测(TUNEL)法检测软骨细胞凋亡率;蛋白印迹法(western blot)检测炎症因子MCP-1、MMP9及ICAM1的表达水平变化。结果表明:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测提示经各组不同方法处理后软骨细胞活力未见明显改变,TUNEL法检测结果提示:各组之间相比较统计分析后,与对照组比较,手术组和TNF-α干预组软骨细胞凋亡率较高(P 0. 01),手术组和TNF-α干预组两者之间无显著差异(P 0. 05);与假手术组相比,手术组和TNF-α干预组处理后,软骨细胞凋亡率显著升高(P 0. 01);对照组与假手术组、手术组和TNF-α干预组之间分别比较,软骨细胞凋亡率无明显变化(P 0. 05)。Western blot结果表明:分别与对照组和假手术组相比较,手术组和TNF-α干预组软骨细胞MCP-1、MMP9及ICAM1表达水平增高(P 0. 01),手术组和TNF-α干预组之间各指标改变无统计学差异(P 0. 05)。可见给予TNF-α干预可促使软骨细胞凋亡率及炎症因子指标增高,其对软骨细胞的影响与手术组相似,可成为一种简捷有效的大鼠骨性关节炎模型建立方法。     

山慈菇正丁醇提取物对NR8383细胞分泌的IL-1β和TNF-α水平的影响

为了探讨山慈菇正丁醇提取物对NR8383细胞(大鼠肺泡巨噬细胞)分泌的白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的影响,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测TNF-α和IL-1β的mRNA水平,利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中TNF-α和IL-1β的蛋白含量。结果显示:与空白对照组相比,终浓度1. 25 mg/m L的山慈菇正丁醇提取物可极显著降低R8383细胞分泌TNF-αmRNA水平和蛋白含量(P 0. 01);与空白对照组相比,终浓度1. 25 mg/m L山慈菇正丁醇提取物能极显著升高IL-1β的mRNA水平和蛋白含量(P 0. 01),同时0. 012 5 mg/m L山慈菇正丁醇提取物能极显著降低IL-1β的mRNA水平和蛋白含量(P 0. 01)。说明终浓度为1. 25 mg/m L的山慈菇正丁醇提取物可极显著调控NR8383细胞分泌的TNF-α和IL-1β的基因和蛋白含量。     

血必净注射液对家兔左心缺血再灌注损伤肺脏的保护作用

目的:探讨血必净注射液对家兔左心缺血再灌注损伤肺脏的保护作用.方法:60只健康成年家兔均分为两组:缺血再灌注组和血必净治疗组,两组均在缺血前30min(T1)、缺血30min(T2)、再灌注30min(T3)取颈外静脉血及颈总动脉血5ml;取支气管肺泡灌洗液5ml,检测外周血和支气管肺泡灌洗液中TNF-α水平及家兔肺组织TNF-α和ICAM-1表达情况.结果:1.血必净注射液提高缺血再灌注家兔PaO2;2血必净注射液降低缺血再灌注家兔外周血及支气管肺泡灌洗液TNF-α水平,降低肺组织TNF-α和ICAM-1表达.结论:血必净注射液通过降低左心缺血再灌注家兔外周血及支气管肺泡灌洗液中TNF-α含量及肺组织中TNF-α和ICAM-1的表达保护肺组织.     

大鼠胶原诱导性关节炎早期外周血TNF-α与性激素水平的动态观察及相关性研究

同步观察大鼠胶原诱导性关节炎早期血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与性激素水平的变化,探讨TNF-α和性激素在类风湿关节炎(RA)发病中的作用及其相关性。用Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂诱导SD大鼠胶原性关节炎(CIA),检测CIA大鼠不同时间点的血浆TNF-α、雌二醇和睾酮,同时观察其发病时间、滑膜新生血管形成、关节炎指数评分。随着CIA免疫时间的延长,滑膜轻度增厚,滑膜新生血管开始增多,关节炎指数评分渐增加,TNF-α含量也升高,睾酮水平下降,雌二醇水平无明显变化;TNF-α含量与睾酮水平呈负相关关系(r=-0.364,P<0.05),血浆TNF-α含量与雌二醇水平无明显相关关系(r=-0.209,P>0.05)。TNF-α在RA炎症反应的细胞因子网络中起重要作用,性激素与RA的发病也有密切关系,雄激素是天然的抗炎激素,雌激素的作用可能与其浓度有关。     

葛根提取物对酒精性肝损伤大鼠肝组织TNF-α表达变化的研究

目的:观察葛根对酒精性肝损伤大鼠肝组织肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)水平的变化.方法:以56%酒精灌胃,造成大鼠酒精性肝损伤模型,取肝组织做免疫组织化学检测TNF-α表达.结果:模型组和治疗对照组大鼠毛发光泽差,食欲差,大便溏泻,肝组织出现肝脂肪变性,肝组织中见大量TNF-α蛋白阳性产物棕褐色细颗粒;治疗组肝组织中见少量脂滴空泡,少量TNF-α蛋白阳性产物棕褐色细颗粒.结论:葛根提取物能降低酒精性肝损伤大鼠肝组织TNF-α的表达.     

肿瘤坏死因子α基因-238G＞A及-857C＞T多态性与河南汉族群体原发性高血压

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因-238G＞A及-857C＞T多态性与河南汉族原发性高血压(EH)的相关性.方法:ELISA法检测260例高血压患者和394例健康对照者血浆TNF-α水平,采用限制性扩增片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测TNF-α基因-238G＞A及-857C＞T多态性.结果:与正常...     

圆弧菌醇和圆弧菌素的分离纯化及结构解析

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是激活的巨噬细胞分泌的一种多功能因子,其过量表达可以引起类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病.因此,寻找开发其小分子抑制剂具有重要意义.在对一株分离自厦门海沧红树林土壤青霉属(Peni-cilliumsp.)真菌的次级代谢产物进行分离纯化以获得TNF-α抑制剂的研究中,通过中压反相硅胶柱层析(RP-18)、常压凝胶柱层析(Sephadex LH-20)、硅胶柱层析(Si-Gel)等柱层析技术对两种产量较高的化合物进行了分离纯化.通过对两个化合物的一维(1D-)、二维(2D-)核磁共振(NMR)和质谱(MS)数据的深入解析,确定两个化合物为生物碱圆弧菌醇和圆弧菌素,两者的产率分别达7.0和3.9mg/L,并通过X射线单晶衍射确定了圆弧菌醇手性碳的绝对构型.圆弧菌醇和圆弧菌素是生物合成TNF-α诱导的人类HIV病毒复制强抑制剂纯绿青霉素过程的中间产物,但是在拮抗过量TNF-α的实验中并没有表现出明显的活性.该研究为开发利用这两种生物碱及通过生物转化合成纯绿青霉素,及加速新的潜在免疫抑制剂的研究提供基础.     

血清肿瘤坏死因子α、C反应蛋白在不同肥胖亚型中的变化及意义

目的:通过观察不同体重代谢类型患者血清肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-αTNF-α)、C反应蛋白(C-reactive protein CRP)水平,探讨血清TNF-α、CRP的变化在不同肥胖代谢亚型发病中的作用及意义。方法:选择201名在石河子大学第一附属医院就诊的成年人,进行血压、血脂、血糖、腰臀比(WHR)、体脂指数(BMI)、糖化血红蛋白(Hb A1C)等检查,将研究对象分为正常体重代谢正常(A)组、正常体重代谢异常(B)组、代谢正常性肥胖(C)组、代谢异常性肥胖(D)组。使用酶联免疫吸附测定的方法检测血清TNF-α和CRP的浓度。结果:1.各组Hb A1C、空腹血糖(FBG)、餐后2小时血糖(PBG)、甘油三酯(TG)比较,B组、D组高于A组和C组(P0.05);2.各组血清TNF-α、CRP水平比较,B组、C组、D组高于A组(P0.05),D组TNF-α、CRP高于A组和C组(P0.05)。3.血清TNF-α、CRP水平与BMI、WHR、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、HbA1c、FBG、PBG、TG呈正相关,与高密度脂蛋白(HD-C)呈负相关(P0.05)。4.BMI、FBG、HDL-C为TNF-α的影响因素(P0.001);BMI、PBG、HDL-C为CRP的影响因素(P0.001)。结论:B组、C组、D组人群体内均存在炎症状态,以D组最为明显;TNF-α、CRP可能参与了不同肥胖亚型的发病过程。     

抗鼠跨膜型TNF-α多克隆抗体设计和制备

目的:设计和制备区分鼠跨膜型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和分泌型TNF-α的多克隆抗体.方法:采用抗原肽预测软件对跨膜型TNF-α表位进行预测,合成跨膜型TNF-α24个氨基酸多肽,并与匙孔碱血蓝蛋白偶联,家兔皮背部多点注射,收集分离血清,采用酶联免疫吸附试验和流式细胞术鉴定其特异性.结果:制备出高效价的抗血清,该抗血清可特异性结合免疫原多肽,不与分泌型TNF-α发生交叉反应,流式细胞术显示该抗血清可与细胞系NIH 3T3表达的跨膜型TNF-α发生特异性结合.结论:成功制备了跨膜型TNF-α特异性多克隆抗体,为区分跨膜型TNF-α和分泌型TNF-α生物学作用提供了新工具.     

COPD合并肺间质纤维化与血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平的相关性

目的 分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺间质纤维化(PF)与血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的相关性.方法 回顾性分析124例COPD合并PF患者临床资料(COPD合并PF组),并纳入同期入院治疗的34例稳定期COPD患者为对照组,根据慢性阻塞性肺疾病防治全球倡议(GOLD)分级分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级组;评估COPD合并PF患者入院后血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平与GOLD分级、HRCT肺纤维化评分及肺气肿评分的相关性,分析临床疗效与治疗后血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平的关系.结果 COPD合并PF患者入院后血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平与GOLD分级、HRCT肺纤维化评分均呈显著正相关(P<0.05),而与HRCT肺气肿评分无明显相关性(P>0.05).治疗后3个月时,COPD合并PF患者血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平均较治疗前显著降低(P<0.05),且临床疗效与治疗后血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平呈显著负相关(P<0.05).结论 COPD合并PF患者血清TGF-β1、IL-6、TNF-α水平随肺纤维化程度的升高而升高,且与临床疗效具有相关性.     

TNF-α诱导的信号转导中乙酰化蛋白质全谱及其功能的探索

通过将体内稳定同位素标记细胞培养技术(AACT/SILAC)与LC-MS/MS联用,对哺乳动物细胞中TNF-α/NF-κB信号通路相关蛋白在TNF-α及TSA存在情况下乙酰化变化情况进行了研究.在TSA协同处理的、TNF-α刺激的细胞中鉴定到3个乙酰化蛋白,其中核糖体蛋白L4(60SRibosomal Protein L4,RPL4)已被报道存在乙酰化的后修饰,转铁蛋白受体1(Transferrin Receptor Protein 1,TfR1)和凋亡诱导因子3(ApoptosisInducing Factor,Mitochondrion-associated,3,AIFM3)尚未见报道.     

当归多糖对麻黄素小鼠肝组织抗氧化酶活性和NF-κB、TNF-α表达的影响

探讨当归多糖对麻黄素小鼠肝组织抗氧化酶活性和核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响及其可能作用机制.小鼠连续腹腔注射4.0g·L-1麻黄素溶液,同时用当归多糖溶液(12.5,25.0g·L-1)进行灌胃,分别在5,10,15d时用分光光度法检测各组小鼠肝组织T-AOC、GSH-PX活性的变化,免疫组化法检测小鼠肝组织中NF-κB和TNF-α表达的变化.结果显示实验对照组小鼠肝组织T-AOC、GSH-PX活性明显降低(P0.01),肝组织NF-κB和TNF-α表达量显著增强(P0.05或P0.01),而当归多糖组T-AOC、GSH-PX活性与实验对照组相比显著升高,NF-κB和TNF-α表达量明显降低(P0.05或P0.01).结果表明,麻黄素影响小鼠肝组织抗氧化酶活性和NF-κB、TNF-α的表达,当归多糖能够提高小鼠肝组织抗氧化酶活性,抑制NF-κB和TNF-α的表达,对麻黄素致小鼠肝损伤有一定的保护作用.