壳聚糖金属螯合亲和吸附剂的制备

目的 研究利用壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基制备金属螯合亲和吸附剂的条件.方法 戊二醛对壳聚糖进行交联,环氧氯丙烷法进行载体活化和螯合配基的偶联.键合IDA后与Cu2+螯合.结果 采用0.22 mL/g(壳聚糖)戊二醛对壳聚糖进行交联.交联壳聚糖加入0.4 mol/L NaOH与体积分数为0.5的二甲亚砜的混合溶液中,充分搅匀,25℃下缓慢滴加1.2 mL(体积分数为0.3)的环氧氯丙烷,升温至40℃,170 r/min下振荡反应3h进行活化.之后,以4.26 g/g(壳聚糖)浓度的IDA进行连接反应,65℃下反应18 h.结论 采用优化条件制备的金属螯合亲和吸附剂对Cu2+有较大螯合量,可用作固定化金属亲和层析的固定相.     

重组类人胶原蛋白Ⅰ的层析分离

目的研究重组类人胶原蛋白的基因工程下游工艺对阴离子交换树脂（DE52）和阳离子交换树脂（CM52）的吸附效果。方法将基因工程菌E．coil BL 21经超声破碎、硫酸铵盐析、超滤浓缩后，再进行批量层析进一步分离纯化。结果得到最佳实验条件：采用阴离子交换树脂，pH值为6．0。盐浓度为0．2mol／L，蛋白进样浓度为0．4％（质量分数）。结论在HCBI的纯化过程中，阴离子交换树脂（DE52）较阳离子交换树脂（CM52）的分离效果更优，最终产物的纯度达到95．98％，回收率为91．7％，纯化倍数为5．3。纯化的类人胶原蛋白Ⅰ经SDS—PAGE电泳测定为电泳纯，分子质量为90ku。     

重组类人Ⅰ型胶原蛋白分离与纯化

目的 研究重组类人Ⅰ型胶原蛋白基因工程的下游工艺。方法工程菌株Escherichia coli BL213．1在Bioengineering L1 523型12．8L自控发酵罐中经24h发酵，细胞干重达到77．3g/L，表达量为菌体蛋白量的29．4％。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后，依次经DEAE52，Sephadex G100柱层析分离纯化。结果最终产物纯度达到98％，回收率为80．5％。结论纯化的类人Ⅰ型胶原蛋白经SDS-PAGE电泳测定为电泳纯，分子质量为90ku，N端序列为NH2-H-D-P-V-V-L-Q-R-R-D-W-E-N-P-G，与基因序列设计一致。     

重组Hepcidin融合蛋白的金属螯合亲和层析纯化

在大肠杆菌中表达的重组Hepcidin融合蛋白以包涵体形式存在,其N端带有6个组氨酸。以Ni²⁺-IDA-Sepharose Fast Flow为层析介质,在变性条件下以不同的咪唑和pH值洗脱方式对Hepcidin融合蛋白的纯化效果进行了比较,确定了该融合蛋白的金属螯合层析纯化条件。以60mmol/L咪唑洗脱杂蛋白,然后将pH值降至4.0洗脱融合蛋白,纯化后的融合蛋白纯度大于95%,而且不含咪唑,有利于下一步Hepcidin的制备。金属螯合层析中融合蛋白收率不低于90%。Ni²⁺-IDA-Sepharose Fast Flow对该融合蛋白的吸附量为30.4mg /mL。     

固定化金属离子亲和色谱研究进展

 固定化金属离子亲和色谱是将过渡金属离子通过配体螯合在固相基质上,通过过渡金属离子与靶分子的组氨酸或半胱氨酸特异性结合形成相对稳定的复合物,最后以竞争性洗脱方式实现靶分子的富集与纯化,其核心为金属螯合亲和基质材料制备。具有亲和选择性高、生物兼容性好、可逆再生等优势,迄今已发展了40余年,广泛应用于靶分子的特异性富集、分离与纯化,本文综述了近3年固定化金属离子亲和色谱纳米材料、微球色谱基质、棉纤维、分子印迹材料、整体材料、共价有机骨架等方面的研究进展。     

单克隆抗体亲和层析纯化基因工程人γ-干扰素研究

用抗基因工程人γ－干扰素单克隆抗体（２Ａ１２）细胞株亲和层析从表达人γ－干扰素的大肠杆菌抽提液中纯化经稀释复性后的γ－干扰素。一步纯化后的γ－干扰素含量达９５％以上，蛋白质的比活性达 １．２×１０ｕ／ｇ，收率为７８％。洗脱液用 ０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣＩ的 ＰＢＳ溶液，洗脱率达９２．８％。     

重组类人胶原蛋白Ⅱ膜的生物相容性

目的探讨用戊二醛交联得到的重组类人胶原蛋白Ⅱ(recombinant human-like collagenⅡ,RHLCⅡ)膜的生物相容性。方法用浓度为0.005 mol/L和0.01 mol/L的戊二醛分别交联RHLCⅡ得到两组RHLCⅡ膜(0.005 mol/L组和0.01 mol/L组);把成纤维细胞接种到两组RHLCⅡ膜上,用倒置显微镜和扫描电子显微镜观察细胞贴附情况;用MTT法分析成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上的生长和增殖情况;通过细胞毒性实验评价两组RHLCⅡ膜的细胞毒性。结果当成纤维细胞培养到6 h时,均能贴附于两组RHLCⅡ膜上;培养到96 h时,两组RHLCⅡ膜上的成纤维细胞均融合成片并形成多层细胞;经MTT法分析,细胞接种后96 h,成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上均能实现增殖;0.01 mol/L组比0.005 mol/L组细胞毒性要大,但两组在各时间段,毒性评定均在0~1级,细胞毒性实验合格。结论戊二醛浓度为0.005 mol/L和0.01 mol/L的RHLCⅡ膜具有良好的生物相容性。     

类人胶原蛋白基因工程茵高密度发酵过程控制

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略，采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果OD600可达150，胶原蛋白的表达量为9g／L。结论20％～30％饱和度的溶解氧和0．1-0．2h^-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达，其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关。     

类人胶原蛋白基因工程菌高密度发酵过程控制

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL 21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略,采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果 OD600可达150,胶原蛋白的表达量为9g／L。结论 20％-30％饱和度的溶解氧和0．1- 0．2 h-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达,其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关。