中性蛋白酶生产菌枯草芽孢杆菌抗噬菌体菌株的选育和应用

近年来,由于我国微生物发酵工业的蓬勃发展,但随之而来的,噬菌体危害也日益严重。如我省发酵工业中,丙酮丁醇生产曾遭受噬菌体感染。近两年来,昆明市味精厂也不断受到噬菌体侵害,经常不能正常生产,又如陆良酶制剂厂从1987年9月开始,一年多来蛋白酶生产一直遭受噬菌体危害,造成经济损失达数10万元,直到1988年8月我们决定帮助解决,经过电镜检查,确系噬菌体感染,于是我们除结合综合防治外,着重从筛选抗噬菌体菌株和诱变育种等方面进行工作。经过半年左右工作,分离出菌株564株,进行33批次筛选发酵试验,已经筛选出抗性较好、酶活较高的菌株4株。如KRP406抗株从1989年1月在陆良酶制剂厂使用以来,根据已有结果,在10t和20t大罐进行18     

L—山梨糖发酵中的芽孢杆菌噬菌体及抗噬菌体菌株的选育

从济南制药厂L—山梨糖混合发酵液中分离得到四株芽孢杆菌噬菌体,其中一株来自寄主巨大芽孢杆菌,三株来自腊状芽孢杆菌,这些噬菌体都是有尾的,根据形态可分为二类。通过选育获得了几株抗噬菌体菌株,经摇瓶混合发酵试验,表明抗株不但具有稳定的抗性而且保持了原种的性能。     

抗噬菌体产谷氨酸菌株的自然筛选

本文采用自然界直接分离法从不同来源土壤中筛选谷氨酸产生菌,经产酸测定、噬菌体抗性检查,筛选出25株抗噬菌体产谷氨酸菌株,其中有2株产酸率在3.0％以上。     

D-核糖产生菌抗噬菌体菌株的选育

从D-核糖异常发酵液中分离纯化出一种噬菌体,将其命名为P001。以枯草芽孢杆菌转酮醇酶变异株为出发菌株,经紫外线诱变法选育出1株具有抗性的与出发菌株相当的突变株。对该突变株进行多次传代和D-核糖发酵试验,结果表明,该菌株对噬菌体P001抗性稳定,其发酵产D-核糖能力也没有改变。     

枯草杆菌BF7658高产菌株HIB22的选育

我们以枯草杆菌(Bacillus subtilis)BF—7658为出发菌株,通过自然分离,从1200株菌株中获得一株高产菌株HIB22,摇瓶酶活为440u/ml,经6次传代后仍保持原有性状。用7500立升和10000立升发酵罐进行21批扩大试验,平均酶活355u/ml,其中8批稳产试验平均酶活397u/ml。单罐最高酶活520u/ml。     

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9抗噬菌体菌株的选育

以2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9为出发菌株,采用紫外线诱变与添加噬菌体进行筛选相结合的方法,获得了两株抗性菌株Au4-2和Af3.在种子培养基中含有噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养24 h,抗性菌株Au4-2与Af3的菌体生长光密度值OD650×20分别为0.74,0.55.镜检显示菌体量多,呈短杆状;而对照菌株Ac9的菌体光密度值则为0.14,镜检显示菌体量少,呈球状.在发酵培养基中添加噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养72 h,抗性菌株Au4-2与Af3 产酸分别可达15.45 g/100 mL,14.55 g/100 mL;而对照菌株则几乎没有产酸.     

螺旋霉素产生菌抗噬菌体菌株的选育

用Ｃｏ＾６０处理螺旋霉素产生菌ＰＳ，获得了一株抗噬菌体且摇瓶发酵单位比原菌株稍高的突变株Ｒ１０，继而对Ｒ１０进行理性化筛选，在加有２－脱氧葡萄糖的分离培养基上分离到一株抗噬菌体稳定、摇瓶发酵单位又比Ｒ１０高２０％的新突变株，且其摇瓶发酵周期缩短１２ｈ、能耐受更高浓度的自身代谢产物－螺旋霉素。     

产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌N16抗噬菌体菌株筛选及噬菌…

报道了噬菌体ＰＧ３对产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌Ｎ１６反复感染多次进行自然筛选，获得８株对噬菌体ＰＧ３具有稳定抗性的菌株，其产酶水平有的比出发菌株Ｎ１６高１０％左右。同时对噬菌体ＰＧ３的生物学特性进行了某些研究。     

抗噬菌体谷氨酸生产菌的选育——细胞融合技术在细菌育种方面的应用

本文利用紫外线诱变的方法获得了抗噬菌体谷氨酸生产菌株.为提高抗噬菌体菌株的产量,作者对谷氨酸生产菌进行了属间融合试验,结果获得了产酸为5.8—6.0％的抗噬菌体谷氨酸生产菌.在适量青霉素存在下可获得99.9％的原生质体。选用最佳条件再生率达20％。在选择培养基上获得融合子,其融合率达1.15×10~(-(?))量级,其中具噬菌体抗性的菌株占22.2％.     

谷氨酸发酵噬菌体研究初报

噬菌体污染,常给谷氨酸发酵造成严重危害,所以查明系外源噬菌体的污染或溶原菌诱导出的噬菌体污染,就成了人们关注的首要问题。我们从谷氨酸生产菌北京棒状杆菌突变株——FM820-7紫外线、丝裂霉素C诱导分离到二株噬菌体526,528,从FM820-7菌株生产环境样品中分离到一株噬菌体530,对分离的噬菌体形态及生物学特性进行了初步研究。并就溶原菌株诱导方式、噬菌体的检测实验条件进行了探讨,为迅速澄清污染源,提供了直接有效的手段。     

原生质体诱变选育分解X光胶片的菌株

从厦门福达感光胶片厂的污水中分离到207株芽孢杆菌,其中一株显示了较强的分解明胶的能力.该菌经鉴定为巨大芽孢杆菌(Bucillus megaterium 207).用溶菌酶制备207菌的原生质体,经紫外线诱变获得一变异株(207—A5),产蛋白酶活力由830u/ml 提高到4731u/ml.     

超氧化物歧化酶新制备方法的研究

研究了制备超氧化物歧化酶的一种新方法．通过加热、盐析和中空纤维超滤,得到高纯度的产品．1000mL猪血,可得到94mgSOD,比活为6312μ／mg,产率为70．8%．     

流加葡萄糖对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其动力学特性

着重讨论了葡萄糖对Ｌ－天冬酰胺酶发酵过程的影响,并对其发酵动力学特性进行了分析。采用自动流加葡萄糖控制发酵ｐＨ的工艺,可使Ｌ－天冬酰胺酶活力达到６４ｕ／ｍｌ,比添加葡萄糖的摇瓶发酵提高了１４６％。流加葡萄糖控制ｐＨ的Ｌ－天冬酰胺酶发酵是生长相关的;维持２～５ｍｇ／ｍｌ和１．２～１．４ｍｇ／ｍｌ的葡萄糖浓度,可分别使比生长速率和比产酶速率达到０．８１／ｈ和１２００ｕ／ｇ．ｈ。     

豆凝乳酶产生菌的筛选及诱变育种

从１０４份土样中分离到一株产豆凝乳酶的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）,酶活力０．３ｕ／ｍｌ。经ＵＶ－ＤＥＳ诱变及培养基调整后,酶活可达１．６ｕ／ｍｌ以上,其最适产酶培养基组成：麦麸２．５％,（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．５％（ＮＨ４）２ＨＰＯ４ ０．５％,ＣａＣｌ２ ０．０５％。     

5′－腺苷酸脱氨酶产生菌选育及发酵生态学研究

从多株青酶及曲酶中筛选到一株新的腺苷酸脱氨酶产生菌，经紫外线及５′－氟尿嘧啶复合诱变处理，使菌株的产酶活性有了很大提高，通过发酵生态学研究确定了产酶的最佳条件，在营养生理研究中发现一种廉价的产酶促进因子，添加该物质可使酶活提高１４．６倍。在所确定的最佳培养条件下平均酶活可达１３ｏｏｕ／ｍｌ。     

选育具有青霉素抗性的青霉素高产菌种

以青霉素产生菌87-55-21为出发菌株,筛选具有青霉素抗性的高产菌株,使用紫外线对孢子悬浮液照射110秒后,然后涂布在含有20000u/ml浓度青霉素的固体培养基上,分生孢子的死亡率为98.1%,处理后从176个菌落中筛选出87-58-6菌株,摇瓶发酵单位提高16.7%,87-58-5菌株投入生产后,平均发酵单位提高3.5%.     

抗高浓度葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌的选育

以本室保存的一株纤维素酶产量较高的拟康氏木霉为出发菌株,经紫外诱变处理,用葡萄糖( 梯度浓度) 纤维素双层平板选育,在含葡萄糖(4% ) 纤维素双层平板上获得一株葡萄糖浓度高达10% 仍能产生纤维素水解透明圈的突变株UVⅢ.培养6 d ,干曲的CMC 酶活、FP 酶活和βG 酶活分别可达1145 .7 u/g 、55 .6 u/g 和24 u/g .分别是出发株的2 .4 倍、3.4 倍和12 .6 倍.     

枯草杆菌GMS7突变株肌苷发酵研究

以肌苷产生菌枯草杆菌7171—9—1为出发菌株,经物理、化学诱变剂连续处理,获得一株腺嘌呤营养缺陷型并对8—氮杂鸟嘌呤、磺胺胍、链霉素有三重抗性的突变株GMS7,在最佳摇瓶发酵条件下,平均产肌苷为21.35g/L,最高可达23.21g/L,比原菌提高了1.4倍。此外从形态学角度,跟踪观测了肌苷发酵过程中菌体形态的变化,并探讨了各种因素对发酵产苷的影响。     

饲用复合酶生产菌株的诱变选育

通过UV诱变复合酶产生菌黑曲霉筛选得到一突变株JW001,该菌株可同时发酵产生高活力的多酶系,其中纤维素酶和酸性蛋白酶活力分别为18 379 u/g和6 472 u/g,比出发菌株分别提高122%和92%.优化确定了曲盘固体发酵工艺,并进行了复合酶动物应用试验,试验表明黑曲霉JW001菌株发酵生产的饲用复合酶制剂对不同畜禽均有很好的饲喂效果.     

洗涤剂用碱性纤维素酶产生菌的菌种选育

以实验室提供的一株嗜碱性芽孢杆菌Ｖ１－１－３为出发菌株，经过甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）的二次诱变处理及青霉素、链霉素、万古霉素和头孢霉素等抗性平板的筛选，得到一株耐青霉素的高产变异新菌株，产纤维素酶的能力大大提高，酶活（发酵液）从１５．２０ｕ／ｍＬ提高到２９．３６ｕ／ｍＬ。