泥鳅原始生殖细胞的发生,迁移和性腺分化

通过光学显微镜对泥鳅原始生殖细菌的发生,迁移和性腺分化进行初步研究,发现泥鳅 ＰＧＣｓ最初出现在原有肠晚期预定中胚层内,体节中胚层与侧板中胚层分离后而位于侧板中胚层。     

大鼠原始生殖细胞的分离培养

以不同日龄的大鼠胎仔为材料，对其生殖巢进行解剖分离，并作形态观察．结果发现随着日龄的增加，生殖巢由长变短，由薄增厚，并在１４．５ｄ的生殖巢上发现了明显的性分化．对不同日龄的生殖巢用ＥＤＴＡ－Ｔｒｙｐｓｉｎ在３７℃下进行解离，可以得到原始生殖细胞（ＰＧＣｓ），较早日龄的ＰＧＣｓ形态较不规则，有大量的伪足伸出，运动能力较强．随着日龄的增大，ＰＧＣｓ的形态有所变化，椭圆形、圆形居多，并且运动能力亦有所下降．ＰＧＣｓ的体积比一般的体细胞大，细胞核多为圆形，体积硕大，有多个核仁．将消化液处理后的产物进行培养，ＰＧＣｓ一般能在含血清的ＤＭＥＭ培养液中悬浮生存一周左右，在此期间也有部分ＰＧＣｓ发生皱缩死亡，大量的体细胞在皿底成纤维化，血细胞逐渐死亡．     

原生殖细胞的迁移、增殖及其与细胞因子的关系

原生殖细胞(PGCs)是配子的始祖细胞,它发育演变生成卵细胞或精子细胞．PGCs在其发育过程中不断地增殖并迁移,最终到达生殖嵴．本文综述了原生殖细胞的发生,迁移及其机制,原生殖细胞与细胞因子,如干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和骨形态发生蛋白(BMPs)等的关系．     

小鼠原始生殖细胞的发生部位和迁移路线的初步研究

我们用碱性磷酸酶法对小鼠原始生殖细胞的发生部位和迁移路线进行了研究。在7天18小时的胚胎中没有发现原始生殖细胞,至8天8小时,在尿囊柄基部和原条尾端出现了成群集中的原始生殖细胞,这时原始生殖细胞总数目不超过100个。9天,原始生殖细胞沿后肠在肠壁内胚层细胞之间向前迁移。9天10小时部分原始生殖细胞进入背肠系膜。甲苯胺蓝染色显示原始生殖细胞嗜碱性强,与周围体细胞有着明显差别,其分布位置与碱性磷酸酶法显示出的位置一致。本实验表明,小鼠原始生殖细胞的最早出现部位是在尿囊柄基部。     

保护剂浓度对第19期鸡胚原始生殖细胞存活率的影响

采用Ficoll密度梯度离心 ,提取第 19期 (孵化 72h)性腺中的原始生殖细胞 (PGCs) ,用不同浓度的冷冻保护液进行冷冻保存。复苏后的PGCs用台盼蓝染色检测其存活率 ,并进行体外培养。结果发现 :在同一浓度下 ,不同的冷冻保护液之间存在显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)差异。在同一种冷冻保护液下 ,不同的浓度之间存在显著(P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)差异 ,具体表现为冷冻保护液浓度越大 ,复苏后细胞的存活率越低。PGCs复苏后于体外培养 ,可增殖形成细胞克隆 ,并可传代培养     

实验用五指山小型猪胚胎生殖细胞的分离培养

目的对从猪的原始生殖细胞分离获得胚胎干细胞的方法进行初步研究。方法胎儿取自怀孕26～28d的实验用五指山母猪。分离胎儿生殖嵴获得PGCs,接种于STO饲养层上,以DMEM+2mmol/L谷氨酰胺+0.1mmol/L非必需氨基酸+0.1mmol/Lβ-巯基乙醇+100IU/mL青霉素+100μg/mL链霉素+15%FCS作为培养基,对细胞进行培养传代。结果培养的细胞传至4～5代,形态多样,经AKP染色、SSEA-1免疫荧光染色、Oct-4免疫荧光标记等方法鉴定为阳性,具有胚胎干细胞的特征。     

C-fos与生殖细胞发育

原癌基因C-fos是即刻早期基因(immediate early gene,IEG),它的表达产物作为细胞内信号传递的第三信使(third messenger)对细胞增殖、分化、凋亡及信号转导具有重要生理作用。本文就C-fos分子结构、表达机制、对生殖发育、细胞凋亡的研究进行综述。     

电化学迁移研究进展

 随着电子电路和元器件的集成化、小型化,电子元器件中间距急剧减小,导致其对电化学迁移更加敏感。本文从研究方法、失效机制方面,综述当前电子元器件中电化学迁移行为的研究进展,探讨改善电子元器件电化学迁移敏感性的方法,提出更为行之有效的电化学迁移防护方法。     

栉江珧生殖细胞的发生

通过观察栉江珧（Ａｔｒｉｎａ ｐｅｃｔｉｎａｔａ ｌｉｎｎａｅｕｓ）的未分化生殖细胞,精原细胞和卵原细胞,精母细胞和卵母细胞,精子和卵子的形态结构与分布状况及核仁在卵成熟过程中的变化,对栉江珧生殖细胞发生及成熟过程的关问题进行了探讨。     

论原始神话中蕴含的原始人类的自省意识

洪水神话在世界各地广为流传，在人类社会初期，原始人在不同的时间和空间创造了大致相同的神话，说明原始人类具有相同的原始心理和原始思维方式。在洪水神话中，原始人对洪水起因的思考，几乎相同的解释是由于人有罪过，神发洪水惩罚人类，使人类灭绝。从这个洪水母题中，我们可以看到原始人开始由对自然界的思考转向对人类自身的思考。     

鸭胚胎血液中PGCs数量及其外源DNA的体内转染

抽取了麻鸭和骡鸭胚胎发育第14－20期的血液，制作血涂片，PAS染色，观察血液中的原生殖细胞的含量，并对各个时期血液中原生殖细胞的含量进行了统计，最高含量都出现在第16期,分别为8．9752％和2．1871％，用In vivo Gene Delivery Systern和pEGFP-N对PGCs进行了外源DNA的体内转染。结果在6只胚胎中的3只中发现GFP报告基因的表达。     

Germline transmission of genetically modified primordial germ cells

Primordial germ cells (PGCs) are the precursors of sperm and eggs. In most animals, segregation of the germ line from the somatic lineages is one of the earliest events in development; in avian embryos, PGCs are first identified in an extra-embryonic region, the germinal crescent, after approximately 18 h of incubation. After 50-55 h of development, PGCs migrate to the gonad and subsequently produce functional sperm and oocytes. So far, cultures of PGCs that remain restricted to the germ line have not been reported in any species. Here we show that chicken PGCs can be isolated, cultured and genetically modified while maintaining their commitment to the germ line. Furthermore, we show that chicken PGCs can be induced in vitro to differentiate into embryonic germ cells that contribute to somatic tissues. Retention of the commitment of PGCs to the germ line after extended periods in culture and after genetic modification combined with their capacity to acquire somatic competence in vitro provides a new model for developmental biology. The utility of the model is enhanced by the accessibility of the avian embryo, which facilitates access to the earliest stages of development and supplies a facile route for the reintroduction of PGCs into the embryonic vasculature. In addition, these attributes create new opportunities to manipulate the genome of chickens for agricultural and pharmaceutical applications.     

小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡

 以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,采用TDT原位末端标记法在其石蜡组织切片上进行凋亡细胞原位检测,探讨小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡规律.结果发现:小鼠生精细胞从生后开始就存在自发性凋亡现象,生后1~15 d,凋亡精原细胞数目不断增加;至生后第15天时达到峰值,且15 d起个别初级精母细胞也开始出现凋亡;至27 d时,极少数次级精母细胞和精子细胞出现凋亡;至30 d时凋亡细胞基本为精原细胞;而33 d时各类型生精细胞均存在凋亡现象;至36 d时凋亡细胞又重新集中于精原细胞,并延续于此后各期.上述结果表明:小鼠睾丸发育过程中凋亡细胞主要为精原细胞;自发性凋亡活跃期发生于生后1~33 d,与生精细胞的首次发育成熟过程同步.     

Ni2+-Cd2+联合染毒大鼠睾丸支持细胞和生精细胞的体视学分析

目的:应用体视学方法定量分析Ni2+、Cd2+对大鼠睾丸支持细胞和生精细胞的影响.方法:63只雄性SD大鼠随机均分为21组,每组3只,实验试剂CdCl2和NiSO4通过腹腔注射给药,对照组(A1、A2、A3),以等量生理盐水代替,实验组分为急性染毒组、染毒2月组、染毒4月组(B1～G1,B2～G2,B3～G3),每天给...     

半滑舌鳎早期胚胎性腺原基分化的组织学

采用连续组织切片对半滑舌鳎胚胎及仔鱼进行了观察研究,首次描述了半滑舌鳎胚胎发育过程中原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)出现的部位及迁移特征,以及卵黄合胞体,鳔与性腺原基的发育分化.结果发现,PGCs出现于神经胚期的靠近卵黄囊的囊胚层.PGCs的特征为体积比周围细胞大,核大透亮,随后在肌肉期的脊索壁上出现.孵化前期的PGCs迁移到肠原基附近,肠系膜旁可见尚在移动的PGCs和10日龄的仔鱼中在肾管旁出现性腺原基,以后PGCs数量逐渐增多参与性腺的形成.本研究为半滑舌鳎的发育生物学以及养殖生产实践提供参考.     

Long-term proliferation of mouse primordial germ cells in culture.

Primordial germ cells (PGCs) are first identifiable as a population of about eight alkaline phosphatase-positive cells in the 7.0 days postcoitum mouse embryo. During the next 6 days of development they proliferate to give rise to the 25,000 cells that will establish the meiotic population. Steel factor is required for PGC survival both in vivo and in vitro and together with leukaemia inhibitory factor stimulates PGC proliferation in vitro. In feeder-dependent culture, PGCs will proliferate for up to 7 days, but their numbers eventually decline and their proliferative capacity is only a fraction of that seen in vivo. Here we report a further factor that stimulates PGC proliferation in vitro, basic fibroblast growth factor (bFGF). Furthermore, bFGF, in the presence of steel factor and leukaemia inhibitory factor, stimulates long-term proliferation of PGCs, leading to the derivation of large colonies of cells. These embryonic germ cells resemble embryonic stem cells, pluripotent cells derived from preimplantation embryos, or feeder-dependent embryonal carcinoma cells, pluripotent stem cells of PGC-derived tumours (teratomas and teratocarcinomas). To our knowledge, these results provide the first system for long-term culture of PGCs.     

5种细胞周期调控基因在小鼠生殖细胞发育过程中的表达研究

 以成熟(10周龄以上)的昆明种正常小鼠的精巢和卵巢为材料,利用地高辛标记的基因探针进行组织切片上的DNA-mRNA分子原位杂交,研究了PCNA,cdc2,cyclin D1,p2 1和 p16 5种细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达.结果表明:PCNA基因在睾丸组织的精原细胞和精母细胞中有强杂交信号,而在雌性生殖细胞及滤泡细胞的发育过程都没有杂交信号;cyclin D1,cdc2,p2 1,p16基因在生殖细胞的发育过程中都没有,表明这些基因并没有参与小鼠生殖细胞的生长和分化调控.这些事实表明在生殖细胞发育过程中,控制细胞增殖和增殖抑制的基因与培养细胞有不同的机制,它们可能采用了不同的调控系统.     

Effect of kinase-negativeEGFR gene on differentiation of embryonic germ cell line EG4

EG4 cells derived from primordial germ cells (PGCs) of 10.5 d post coitum 129/svJ mouse embryos can be used as a model system for in vitro differentiation study due to their pluripotential development ability. EG4 cell lines with stable expression of kinase-negative EGFR cDNA, designated EG4-EGFR^d, were generated by gene transfection. We found that: (ⅰ) EG4-EGFR^d cells share the similar morphology and growing character with wildtype cells that can maintain undifferentiated state in long term culture. (ⅱ) Treatment of EG4 cells with RA resulted in differentiation of adipocyte, while in mutant clones of EG4-EGFR^d, adipocytes were sparse or absent under the same condition, indicating the role of EGFR expressed during adipocyte development. (ⅲ) Histological analysis showed that predominant tissues in teratocarcinomas derived from EG4-EGFR^d cells and wildtype cells are different. A large amount of undifferentiated cells was present in those coming from mutant cell clones. In addition some cardiac and skeletal muscles are prominently differentiated cell types. EG4 wildtype cells produced multiple differentiated cell types of three primary germ layers such as cartilage, epithelia and neural tube. These studies suggested that EGFR-dependent differentiation was inhibited in kinase-negative EG4 cells.     

静宁鸡原生殖细胞的分离及形态学观察

原生殖细胞(PGCs)是配子的始祖细胞,它可发育演变生成卵细胞或精子细胞.上世纪90年代发展了体外培养PGCs技术,现在PGCs已能通过体外培养形成多潜能干细胞(ES),对于研究体外分化机制和细胞治疗具有重要意义.文章通过对静宁鸡种蛋进行36~82 h孵化,并对其血涂片经PAS染色后,在显微镜下观察其原生殖细胞(PGCs)的形态结构,以便为鸡的胚胎干细胞分离培养奠定基础.实验结果:原生殖细胞呈圆形或卵圆形,明显较其他细胞大2~4倍,PGCs的细胞核颜色较深,偏向一侧,后期常聚成一团.     

原初扰动谱的标度不变性和早期宇宙模型

一个可行的早期宇宙模型必须给出近标度不变的原初扰动.我们讨论了由主导背景演化的场导致标度不变的原初扰动的各种可能性及相应早期宇宙模型的各种可能的实现方案.