蛇足石杉内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性

目的:从蛇足石杉中寻找具有药用价值的内生真菌。方法:采用PDA培养基进行蛇足石杉内生真菌的分离、尖端菌丝挑取法纯化分离得到的内生真菌,然后从形态学上对分离得到的内生真菌进行初步鉴定,最后采用杯碟法对所分离到的部分菌株进行抗病原性细菌实验,并对其进行生物活性研究。结果:从蛇足石杉中分离到的内生真菌,经初步鉴定结果表明,分属于7个属。结论:部分内生真菌菌株对病原性细菌有不同程度的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用明显。     

南蛇藤内生真菌Y4的分子鉴定及其抑菌活性研究

采用ITS序列分析对从南蛇藤中分离到的一株内生真菌Y4进行了鉴定,并对其液体发酵产物的抑菌活性和化学成分进行了初步研究.结果表明,Y4是子囊菌门的炭疽菌属(Colletetrichum)真菌,其菌丝体乙醇提取物的正丁醇相萃取物对7种植物病原真菌都有较强的抑菌活性,其抑菌活性成分可能为生物碱、内酯、香豆素和有机酸.     

板栗内生真菌B2菌株鉴定及其抑菌特征研究

通过比较试验对板栗内生真菌B2菌株抑制板栗干腐病病原菌D1的特征进行了研究.运用形态学及分子生物学方法对B2菌株的物种进行了鉴定.研究表明,B2菌株菌丝细胞及培养液内均含有抑菌成分,分别对板栗干腐病病原菌菌丝生长及分生孢子萌发有明显抑制作用.该菌株在PDA培养基上菌落白色,绒毛状,不产生色素,是一种担子菌,即phlebia acerina.     

杨树内生真菌的分离和鉴定

采用组织分离法,从3种健康杨树休眠芽、叶痕飞树皮、木质组织获得83个真茵茵株,其中部分菌株经形态观察、分类鉴定,归属于2亚门、3 目J 科5属6种,分别是链格抱( A lternaria alternωα ) 飞细极链格抱( Alternaria tenuissimα ) 飞球黑子包(Nigrospora sphαericα ) 飞大刀镰抱( Fusαrium culmorum) 飞球毛壳菌( Chaetomium globosum) 和黑附球菌( EpicoCClιm purpurascens) 0 3 种杨树( 南林351 杨( Pop ulus deltoides hαrvard x P. deltoideslw) 飞土耳其杨(P. deltoides ‘ 8307 - 26’ )和天演杨( P. euranericαna) ) 均是6 种真菌在我国的新寄主。     

喜树果内生真菌的分离与鉴定

从喜树(CamptothecaacuminataDecne.)果实中分离、纯化得到5株内生真菌,经初步鉴定,分别属于半知菌亚门的匙孢霉属(MystrosporiumCda.)、鲜壳孢属(ZythiaFr.)及无孢类群(MyceliaSterilia)。其内生真菌经摇瓶培养后,采用薄层层析(TLC)法对其菌丝体提取物进行分析,初步表明WZ001菌株可能产生喜树碱(Camptothecin,CPT)的类似物。     

南蛇藤果中内生真菌的抑菌活性研究

对从南蛇藤果实中分离的16株内生真菌用马铃薯葡萄糖培养基进行液体培养，将发酵产物中的发酵液用高压蒸汽湿热灭菌，菌丝体晾干研磨后用丙酮提取．用发酵处理液和丙酮粗提物对一些常见的植物病原菌进行抑菌活性测定．结果表明，发酵产物的抑菌率在50％以上的活性菌株有13株（占81．2％）．说明南蛇藤内生真菌中的抗病原真菌资源十分丰富，其中抑菌活性最强的发酵处理液的抑菌率高达90．5％，菌丝粗提物的抑菌率达89．2％，但活性菌株的抗菌谱比较狭窄．     

铁皮石斛内生真菌的分离与鉴定

从铁皮石斛( Dendrobium candidum )的根、茎、叶中分离获得内生真菌共30株,经显微形态观察将其中20株鉴定为3个目、4个科、9个属.结果表明,铁皮石斛不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异.     

虎杖内生真菌抗菌活性研究及菌株初步鉴定

利用滤纸片扩散法及形态学常规分类法对30株虎杖内生真菌发酵液进行抑菌活性试验和初步鉴定。结果表明,15株内生真菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)具有抑菌活性,12株内生真菌对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有抑菌活性,7株内生真菌对大肠埃希氏菌(Escherichia coli)具有抑菌活性,分别占菌株总数的50%,40%和23%。根据菌落形态及菌丝结构对其鉴定,具有抑菌活性的菌株分属于曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、枝孢霉属(Cladosporium)、镰刀菌属(Fusarium)及无孢菌类(Agonomycetales)真菌。     

三七内生真菌分离与分子鉴定（Ⅰ）

对三七（Panax notoginseng）内生真菌进行了分离并通过18S-ITS-28S rDNA序列分析进行鉴定。结果从根、茎、叶组织中分离得到158株形态各异的内生真菌。对其中92株的ITS序列分析显示,91株分属于19个已知属,另1株真菌的ITS序列与GenBank中已报道的序列最高相似性为82%,认为是一新种。结论：三七内生菌多样性丰富,同时不同部位内生菌的数量、种类及分布存在差异,且有其特有种。     

大戟科4种植物内生真菌分离与抑菌研究

对大戟科4种药用植物大戟、泽漆、乌桕、重阳木内生真菌进行分离鉴定,并检测其抑菌活性。结果表明:4种植物均含有内生菌,乌桕中获得13株内生菌,鉴定12株,分别属于丝核菌属、小菌核菌属、拟盘多毛孢属、小单头孢属、毛壳菌属、壳小圆孢属、棒盘孢属、交链孢属;京大戟中获得9株内生菌,鉴定8株,分别属于镰刀菌和交链孢属;泽漆中获得6株内生菌,鉴定4株,属于交链孢属;重阳木中获得15株内生菌,鉴定了4株,分别属于小穴壳属、壳小圆孢属、拟茎点霉属。茎中均有内生菌,种子和重阳木叶中均未分离到。总计43株内生菌中有11株有稳定的抑菌活性,占总菌株的25.58%,有12株有不稳定的抑菌活性,占27.91%。用绿豆发芽试验检验表明,仅有1株菌在绿豆幼苗上形成病斑,其余均生长良好,且21株表现出对绿豆芽的促进作用。     

杜仲叶发育过程中结构及杜仲胶含量变化研究

应用石蜡切片法和实验室综合提胶法,研究了杜仲叶的结构发育,探讨了杜仲叶结构发育与杜仲胶积累的变化规律,旨在确定杜仲叶的最适采收季节,为生产实践提供参考。结果表明,杜仲叶内杜仲胶随着季节的变化基本呈跳跃式变化;叶片发育早期,随着栅栏薄壁组织、海绵组织等叶肉细胞的分化发育,叶片中的含胶细胞也在不断地形成、积累。七月份叶片组织结构发育成熟时,含胶细胞仍继续增加和生长,叶片含胶率总体上呈增加的趋势。由于杜仲树叶内杜仲胶为一年逐步积累的结果,11月份将近黄落的叶子含胶量较高,为1.19%。综合分析叶片生物量和杜仲胶的含量,11月份杜仲叶子黄落时收集较合适。     

大孔树脂分离纯化杜仲叶中绿原酸的研究

通过静、动态吸附和洗脱实验,筛选出306型大孔树脂为绿原酸的吸附树脂;当上柱溶液pH值控制在2~3,吸附流速为4 mL/min,吸附完毕后用60%的乙醇洗脱,洗脱率在90%以上;洗脱液经浓缩干燥后得绿原酸粗品,纯度达40%以上。     

博落回内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

从健康博落回植株中分离内生真菌,用PDA培养基分离纯化菌株,结果纯化得到19株内生真菌,用琼脂块法对获取的菌株进行抗菌活性筛选,其中有2株博落回内生真菌对指示菌株有抑菌作用,占总分离菌株的10.53%,其中有一株内生真菌具有较强的抑菌活性。     

Isolation of a novel antifungal peptide from the bark of Eucommia ulmoides Oliv

A novel Eucommia antifungal peptide, named EAFP3, was isolated from the bark of Eucommia ul- moides by NaC1 extract, gel filtration and reverse phase high performance liquid chromatography. The molecular mass of EAFP3 is 4157.3 Da, and its partial amino acid sequence is -. LYQQLIAGITLNK.-. EAFP3 exerts an inhibitory activity against Candida albicans in vitro and the drug concentration required for 50% growth inhibition （IC50） is 31.25μg/mL.     

杜仲离体培养与快速繁殖

杜仲无菌苗顶芽在ＭＳ＋细胞分裂素１．５～３．０（ｍｇ／Ｌ，下同）＋ＩＡＡ０．１＋ＩＢＡ０．１＋ＮＡＡ０．１培养基中分化效果最佳，在ＭＳ＋细胞分裂素０．１～１．０培养基中扩增效果最好，在２／３ＭＳ＋生长素０．１～１．０培养基中生根效果最好。     

蛇足石杉内生真菌的分离和抗植物病原真菌活性

采用内生菌常规分离法对健康的蛇足石杉植株体内的内生真菌进行了分离和筛选.结果表明:从蛇足石杉的不同部位所分离到的内生真菌的数目有所不同,茎部最多,有100株;其次叶部73株;根部最少,仅7株.经初步鉴定,这180株菌分属于13属,即交链孢属(Alternaria)、头孢霉属(Cephalosporium)、球座菌属(Guignardia)、青霉属(Penicillium)、间座壳属(Diaporthe)、木霉属(Trichoderma)、茎点霉属(Phoma)、曲霉属(Aspergillus)、镰刀菌属(Fusarium)、轮枝孢属(Verticilliun)、组丝核菌属(Phacodium)、瓶梗青霉属(Paecilomyces)、刺盘孢属(Colletotrichum).采用抑制率法对所分离到的菌株稀释十倍的发酵液进行抗植物病原真菌实验,结果表明:部分菌株对病原菌有不同程度的抑制作用,其中对油菜菌核病菌抑制率达100%的有37株,对苹果炭疽病菌抑制率达100%的有27株.     

杜仲叶片对土壤水分胁迫的适应性研究

二年生杜仲实生苗在不同土壤干旱条件下的盆栽试验结果表明，杜仲对土壤水分胁迫有很强的适应能力，这种适应能力通过三种调节过程实现，即通过叶片水分饱和亏缺和Ｋ＾＋含量的反馈控制实现的气孔运动的调节，通过脯氨酸积累实现的渗透调节，以及通过活必氧浦除剂（如过氧化物酶）活性变化实现的对自由基平衡的调节。     

超声提取杜仲叶中黄酮类物质工艺研究

采用正交实验方法，探讨了超声提取杜仲叶黄酮类物质的最佳工艺及机理．实验结果表明，超声提取主要通过空化作用实现，它可使杜仲叶中细胞壁破裂，加速细胞中总黄酮类物质直接向溶剂中溶解，以便快速完全地提取．采用体积比为40％、料液比1：60的乙醇浸泡24h，再用超声提取45min,杜仲叶中总黄酮类物质的提出率可达25．43％．     

天然杜仲胶乳的制备及表征

采用溶液乳化法制备了杜仲胶乳,考察了乳化配方及乳化工艺对乳化效果的影响,确定了如下制备条件：以杜仲胶的环己烷溶液（杜仲胶的质量分数为6%）为油相胶液,采用1% Brij-52、0.5% Tween-20、0.5%十二烷基苯磺酸钠的三相复配乳化剂体系,油水体积比为1：1.5,乳化方式为高速搅拌（8 000 r/min,10 min）,除溶剂方式为旋转蒸发（-0.09 MPa,40℃）,浓缩方式为离心浓缩（10 000 r/min,10 min）。在优化条件下制备的杜仲胶乳的固含量可达54%,粒径约为330 nm,Zeta电位的绝对值可达57 mV。采用X射线衍射法（XRD）、差示扫描量热法（DSC）、傅里叶变换红外光谱法（FT-IR）、扫描电子显微镜（SEM）和偏光显微镜（POM）对制备的杜仲胶乳进行了表征,结果表明：乳化没有破坏杜仲胶的结晶性能,杜仲胶乳中仍存在大量的微结晶,杜仲胶乳的晶型中以β晶型为主。