天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒1型研究

目的检测用基因工程方法制备的天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒1型的活性。方法将人免疫缺陷病毒1型在细胞系中培养,加入天花粉蛋白后,观察细胞病变情况,检测P24抗原及逆转录酶的活性。结果加入天花粉蛋白的细胞始终未见细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阴性;阴性对照组细胞在第7 d以后均出现人免疫缺陷病毒1型感染典型细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阳性;阳性对照组始终未见HIV-1感染典型细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果均为阴性。结论天花粉蛋白在培养细胞系中可以有效地抑制人免疫缺陷病毒1型。     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎与心肌细胞凋亡和c-Myc蛋白表达的关系

为了探讨小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎与心肌细胞凋亡和cMyc蛋白的表达的关系,给BALB/C小鼠腹腔接种单纯疱疹病毒Ⅰ型以诱发其急性病毒性心肌炎(VMC),感染病毒3～35天后,VMC检出率为91.67%。应用电镜、原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化技术检测发现,感染鼠心肌中有细胞凋亡和cMyc蛋白的表达,二者阳性率分别为78.33%和81.67%,凋亡细胞阳性指数(AI)范围在34.14±11.56～26.41±10.2之间。细胞凋亡和cMyc蛋白可能参与VMC的发生与发展。     

单纯疱疹病毒抗体的酶联免疫吸附——单扫描示波极谱法测定

报道了用辣根过氧化物酶为标记酶的ELISA—LSP法测定单纯疱疹病毒抗体(HSV—Ab).研究了测定的最适条件;测定了型共同性单克隆抗体,其灵敏度为ELISA的2倍,线性范围比ELISA宽2个滴度;对40个杂交瘤细胞系进行单克隆筛选,测出的阳性克隆率(75%)高于ELISA所测值(72.5%);对阳性克隆的分型结果与ELISA一致,此法灵敏、可靠、易实现.     

双黄连口服液体外抗单纯疱疹病毒1型的初步探讨

目的探讨双黄连口服液体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用.方法选用非洲绿猴肾细胞VERO作为体外培养靶细胞,建立HSV-1感染,用不同剂量的双黄连口服液处理HSV-1感染细胞,以50%组织细胞感染量(TCDI50),细胞病变效应(CPE)为评测指标;采用MTT法,RT-PCR及流式细胞技术作为检测手段并比较药物处理组与HSV-1感染组细胞间病毒表达的差异.结果浓度为标准剂量10%的口服液可明显抑制HSV-1 gD 基因mRNA的转录,选择性抑制HSV-1 DNA的合成;在标准药物剂量0.1%-10%范围内病毒感染组细胞与实验组细胞间凋亡呈现差异性.结论双黄连口服液对体外感染的HSV-1型病毒存在抑制作用,显示出一定的抗病毒活性.     

兰州地区2972例孕妇TORCH血清学检测结果的临床分析

检测兰州地区孕妇TORCH感染情况,调查区域内的阳性感染率,从而为区域内孕妇保健提供临床参考。选取2016-2017年期间于兰州大学第二医院行孕检,并通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TORCH-IgM抗体的女性受检者2972例,分析其阳性结果,对比不同季节孕妇TORCH感染阳性率有无明显差异。TORCH-IgM抗体阳性受检者共40例,阳性率为1.35%,其中以单纯疱疹病毒和弓形虫感染阳性率最高,为0.40%。调查发现夏季为单纯疱疹病毒感染的相对高发期,而春季为巨细胞病毒和弓形虫感染的高发期。孕妇应在孕早期行血清TORCH筛查,采取针对性措施积极预防TORCH感染,从而尽早发现宫内感染,提高生育质量。     

双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶在宫颈病变组织和癌细胞中的表达

目的探讨双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b(DYRK1b)在宫颈病变组织和癌细胞中的表达情况及其作用.方法选取宫颈癌患者127例为研究组,同期确诊为慢性宫颈炎患者32例为对照组,收集上述患者石蜡组织标本,免疫组化SP法检测DYRK1b蛋白表达情况.依据宫颈癌细胞系He La 229和Si Ha细胞将标本分为实验组(加DYRK1b抑制剂Az191)、对照组(不加Az191),Western blod法检测细胞中DYRK1蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果子宫颈鳞癌阳性表达率明显高于慢性宫颈炎、低级别鳞状上皮内病变、高级别鳞状上皮内病变,差异均具有统计学意义(P0.01);高级别鳞状上皮内病变明显高于慢性宫颈炎、低级别鳞状上皮内病变,差异具有统计学意义(P0.05).在He La 229和Si Ha细胞中,DYRK1b蛋白表达量随Az191剂量增加而减少,且均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.01).研究组He La 229和Si Ha细胞抑制率随Az191浓度增加而提升,均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).10μmol/L的Az191作用后,研究组He La 229和Si Ha细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论宫颈病变过程中DYRK1b蛋白表达水平逐渐提升,宫颈癌组织和细胞中均呈高表达;下调DYRK1b蛋白表达后可抑制宫颈癌细胞增殖,促进凋亡.     

白血病小鼠模型中P53、C-myc基因表达的变化研究

探讨DNA、RNA病毒诱导小鼠发生白血病的机制。用单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV－2）和C型RNA病毒诱导70只昆明小鼠，光学显微镜检测HSV－2、C型病毒诱导发生白血病的成功率。正常对照组为30只昆明小鼠。免疫组化法检测HSV－2、C型病毒致瘤后P^53、G－myc基因表达的变化。70只昆明小鼠中有47只发生白血病，成功率为67．1％。47只白血病小鼠P^53、C－myc蛋白阳性表达率均比正常对照组高（P＜0．05）；23只未形成白血病的实验组小鼠P^53、C－myc蛋白阳笥表达率均与正常对照组无显差异（P＞0．05）。HSV－2、C型病毒可以通过调节P^53、C－myc基因的表达从而诱导小鼠白血病的发生。     

应用PCR技术检测单纯疱疹病毒

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测２０５例样本，其中单纯疱疹病毒阳性６５例，阳性率３１．７％．ＰＣＲ技术具有高度的敏感性和特异性，为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、判定药物疗效和流行病学研究等提供了有效的手段     

人类疱疹病毒6B包膜糖蛋白gO在感染细胞中的表达与检测

目的了解人类疱疹病毒6B包膜糖蛋白gO在感染细胞中的表达时间,为今后研发抗病毒药物提供实验依据.方法采用免疫荧光染色法镜检不同时间段的人类疱疹病毒6B感染细胞,并平行收集样本,用蛋白免疫印迹法对样本进行gO 鉴定,以了解其表达状态.结果荧光显微镜观察显示gO开始表达的时间为感染后20 h,在120 h达到高峰,蛋白免疫印迹检测的结果基本与前者相符.结论人类疱疹病毒6B包膜糖蛋白gO为病毒的晚期蛋白.