北部湾金黄水母Chrysaora helvola Brandt刺细胞毒液溶血活性

【目的】探讨金黄水母Chrysaora helvolaBrandt刺细胞毒液(nematocysts venom,NV)的红细胞溶血活性特征及可能机制。【方法】通过分光光度法测定红细胞溶解释放血红蛋白的量来确认不同条件和药物对NV诱导红细胞溶血行为的影响。【结果】NV诱导的红细胞溶血与其总蛋白浓度存在依赖关系。溶液pH值、大分子非电解质渗透压保护剂PEGs均能显著影响其溶血活性;非电解质小分子糖类渗透压保护剂D-甘油和D-半乳糖对溶血活性影响很小,但D-葡萄糖能显著延缓溶血。NV同时具有Ca~(2+)依赖的弱磷酸酯酶A2(PLA_2)活性,且受组氨酸烷基化试剂p-BPB抑制。这一PLA2活性可能对其红细胞溶血活性也有贡献。【结论】NV的红细胞溶血活性可能由膜穿孔机制和所含PLA_2酶成分造成,并受到含葡萄糖单元结构的糖受体调节。     

磷脂体系的开发与应用

作为一种天然的生物表面活性剂，磷脂系列产品具有广泛的生活及工业用途，本文介绍了磷脂的组成及分子结构的特点，着重综述了磷脂的营养、生理功能、磷脂的应用、磷脂生产的研究和发展的趋势．     

HPLC-RI法测静脉脂肪乳注射液中溶血卵磷脂

建立一种检测静脉脂肪乳注射液中卵磷脂的分解产物——溶血卵磷脂的HPLC-RI测定方法。采用高效液相色谱法,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-水-磷酸(V∶V∶V=300∶200∶7)为流动相,流速为每分钟1.5 mL。采用示差检测器,200μL进样。溶血卵磷脂峰面积(Y)与浓度(X)在0.030~0.720 mg·mL-1范围内具有良好线性关系,Y=285.23X+1451.2,r=0.999 8(n=3)。溶血磷脂的检测限为2.18μg,精密度RSD为1.56%(n=9)供试品溶液在制备后8 h内稳定;样品测定的重复性的RSD为1.78%(n=5)。所建立的方法简便、专属性强、准确、可靠,可作为脂肪乳注射剂中溶血磷脂的检测方法。     

磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C在人肺癌A549细胞分化中的作用研究

为探讨磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C在人肺癌肺泡Ⅱ型上皮细胞A5 4 9分化中所起的作用 ,本文利用该酶的特异性抑制剂D6 0 9抑制此酶的活性 ,用倒置相差显微镜观察了D6 0 9处理体外培养的人肺癌A5 4 9细胞形态变化 ,用流式细胞技术测定了D6 0 9对A5 4 9细胞周期及凋亡率的影响 .结果发现D6 0 9促使该细胞拉长 ,并向Ⅰ型上皮细胞分化 ,表现出形成肺泡结构的趋势 ,同时改变了细胞周期的分布 :G0 1 期细胞数目增加 ,S期和G2 M期细胞数目明显减少 .结果表明 ,磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C在使A5 4 9细胞维持其Ⅱ型细胞状态中具有重要作用 .     

贻贝磷脂成分的分析

对浙江产紫贻贝的总脂和磷脂进行了提取和定量,并分析用薄层层析法,气相色谱法对磷脂的组分,总脂和磷脂的脂肪酸组成进行了分析。结果表明：在收获旺季,贻贝的总脂含量为２．１５％￣２．６８％,磷脂含量在５．０２％￣６．９５‰范围内占总脂的２１．００％￣２７．３０％,磷脂组分以ＰＣ和ＰＥ为主,与大豆和蛋黄的磷脂相比贻贝总脂和磷脂含有更多的高不饱和脂肪酸,此外贻贝磷脂中的脂肪酸不饱和度及ＥＰＡ与ＤＨＡ之和要高     

不同因素对泡囊水溶液中磷脂酶A2活性的影响

首次在泡囊水溶液中研究磷脂酶A2 催化水解卵磷脂并考察了各种因素对该反应的影响.研究结果表明:在泡囊水溶液中磷脂酶A水解卵磷脂的最佳温度为 50℃.     

禾谷炭疽菌磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C生物信息学分析

磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)作为植物病原菌G蛋白信号转导过程中的重要调节因子,在对植物侵染、定殖、扩展等致病过程中发挥着重要作用。禾谷炭疽菌侵染玉米、小麦等农作物引起炭疽病,给各国农业生产造成了巨大经济损失。基于酿酒酵母典型PI-PLC序列,利用Blastp以及关键词对禾谷炭疽菌蛋白质数据库进行比对、搜索,以及通过SMART保守结构域分析,明确该菌存在7个典型的PI-PLC;同时,通过对上述氨基酸序列进行细胞信号肽、跨膜结构域以及二级结构等生物信息学分析,明确上述PI-PLC在蛋白质二级结构组成、信号肽等方面均具有一定差异,除Cg PLC1具有信号肽外,其他均不含有;7个PI-PLC中4个定位在细胞质中,其他则定位在细胞核、高尔基体上。此外,通过对禾谷炭疽菌中的7个PI-PLC与其他物种中的30个同源序列进行遗传关系比较分析,发现禾谷炭疽菌中的PI-PLC与C.higginsianum、C.fioriniae等炭疽菌属中的病菌具有较高的同源序列,较近的亲缘关系。该研究为深入开展禾谷炭疽菌PI-PLC定位、功能研究打下坚实的理论基础,同时,也为进一步开展其他炭疽菌的研究提供重要的理论指导。     

酯键溶血磷脂酸和醚键溶血磷脂酸的全合成

报导了酯键溶血磷脂酸和醚键溶血磷脂酸消旋体的合成。通过相同的中间体2－O－苄基甘油，它们分别经过6步反应被制得。这种方法可以用来制备溶血磷脂酸的半抗原，从而用于制备抗体。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2的免疫学研究

用江浙蝮蛇毒中纯化的中性磷脂酶Ａ２（ＮＰＬＡ２）免疫家兔，获得了多克隆抗体，抗体与抗原结合后，抑制了该抗原的神经毒性，而对其催化活力无影响，表明ＮＰＬＡ２有两个活性结构域，即神经毒性与催化活性分别位于两个活性位点上，利用免疫亲和层析纯化了ＮＰＬＡ２的多抗，经ＥＬＩＳＡ检测，与酸性ＰＬＡ２和碱性ＰＬＡ２均有免疫交叉反应，这提示了ＮＰＬＡ２与酸性ＰＬＡ２及碱性ＰＬＡ２的抗原决定簇有同源性。     

复合磷脂的降血脂作用

复合磷脂是以大豆磷脂和维生素Ｅ为主在分的复方制剂。本试验表明，高脂饲料中添加５％、７％、１０％的复合磷脂喂养大鼠１７天，其中７％的剂量可明显抑制高脂大鼠血清总胆固醇（ＴＣ）和低密度脂蛋白－胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ），并能降低总胆固醇与高密度脂蛋白－胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）的比值。     

竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒五种磷脂酶A2的分离纯化和氨基酸序列分析

用超细Sephadex G-75凝胶色谱和C4反相高效液相色谱从竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒中分离纯化5种磷脂酶A2，并分别命名为PLA2－I（SWISS－PROT，P82892）、Ⅱ（SWISS-PROT，P82893）、Ⅲ（SWISS－PROT，P82894）、Ⅳ（SWISS－PROT，P82895）、V（SWISS－PROT，P82896）。SDS－PAGE测定它们的分子量分别为14．0、15．8、15．0、14．0和14．0kDa。等电聚焦电泳测得PLA2－I、Ⅱ、Ⅲ呈碱性，等电点大于8．8；PLA2－Ⅳ和V呈酸性，等电点分别为5．2和4．7。PLA2－Ⅳ和V有水解卵磷脂活性。用自动Edman降解法测定了PLA2－V的全部氨基酸序列和PLA2－I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的N－端部分氨基酸序列。PLA2－V由122个氨基酸残基组成，有14个Cys，并与其它来源的PLA2的氨基酸序列进行了比较。     

贻贝Mytilus edulis磷脂成分的分析

对浙江产紫贻口的总指和磷脂进行了提取和定量,并分别用薄层层析法、气相色谱法对磷脂的组分、总脂和磷脂的脂肪酸组成进行了分析,结果表明：在收秋旺季,贻贝的总脂含量为2．15％－2．68％,磷脂含量在5．02％C－6．95％范围内,占总胎的21．00％－27．30％磷脂组分以PC和PE为主;与大豆和蛋黄的磷脂相比,贻贝总脂和磷脂含有更多的高不饱和脂肪酸,此外贻贝磷脂小的脂肪酸不饱和度及EPA与DHA之和要高于总脂。     

Ca2+和Tb3+对白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2荧光光谱的影响

研究了金属离子Ｃａ２ ＋ 和Ｔｂ３ ＋ 对长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２） 荧光光谱的作用, 发现Ｃａ２ ＋ 浓度的增加能够增强磷脂酶Ａ２ 的荧光发射强度． 而且Ｃａ２ ＋ 浓度的增大能够明显加快磷脂酶Ａ２ 与其相应反应底物ＤＰＰＣ的反应速率． 稀土离子Ｔｂ３ ＋ 在低浓度条件下对磷脂酶Ａ２ 起荧光淬灭作用, 而在浓度较高时能够提高磷脂酶Ａ２ 荧光发射强度．     

磷脂的生物功能和分析方法

磷脂是所有生物膜的基本结构物质和功能物质。磷脂对膜蛋白的构象和细胞膜的流动性起着重要作用,影响着膜蛋白功能的正常发挥。分析了解生物膜的磷脂组成对研究生物膜的结构与功能是十分必要的。本文介绍了磷脂的各种分析方法,主要是薄层色谱、柱色谱、高效液相色谱和气相色谱法。     

胞内型磷脂酶A2基因亚克隆与基因表达

目的 研究花生四稀酸在细胞中的释放及前列腺素的合成,构建与花生四稀酸释放相关的表达系统。即胞内型磷脂酶Ａ２（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ ｃＰＬＡ２）ｃＤＮＡ－ｐＲＣ／ＣＭＶ。方法 从克隆载体ｐＭＴ２用Ｓａｌ１制备ｃＰＡＬ２ｃＤＮＡ;平末端连接ｃＰＡＬ２－ｐＲＣ／ＣＭＶ;转染鼠巨噬细胞及筛选正向阳性克隆;ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｃＰＬＡ２ ｃＤＮＡ基因表达。结果 人ｃＰＬＡ     

中介蝮Asn49-PLA2基因原核表达载体的构建及初步表达

以来自中介蝮(G.intermedius)毒腺cDNA文库的3个新Asn49-PLA2基因(GI4-PLA2,GIs-PLA2及其突变体G15'-PLA2)为模板,用PCR及DNA重组技术,将三个PLA2基因克隆到原核表达载体pQE-30,并在宿主茵E.coli Rosseta(DE3)中进行诱导表达.Bam H Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切及测序结果提示,成功构建了3个原核表达栽体(pQE-30/GI4-PLA2,pQE-30/GI5-PLA2,pQE-30/GI2'-PLA2).SDS-PAGE结果表明,中介蝮的3个Asn49-PLA2基因在大肠杆茵中实现表达,而且在37℃、1mM IPTG的诱导条件下,GI4-PLA2和GI5-PLA2的最佳表达时间为25h,而GI5'-PLA2在15h有较高水平的表达.     

对几种动物补体溶血活性的探测

本文对三种廉价易得动物补体(猪、鸭、鸡)进行了溶血活性探测,其中猪补体溶血活性最高、鸭补体其次、鸡补体最低。把猪补体冰冻干燥浓缩5倍,使之达到豚鼠补体的溶血活性,是取代比较昂贵的豚鼠补体的一种途径。