戊型病毒性肝炎研究进展

戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越引起人们的重视.由我国自主创新研制的重组戊型肝炎疫苗现已在中国完成世界上首个Ⅲ期临床试验,其预防戊型肝炎的保护率达到100%(95%CI,72.1%~100.0%).     

戊型肝炎:一种动物源性传染病

戊型肝炎在许多发展中国家是一重要的公共卫生问题,戊型肝炎病毒是其病原,至少有4个基因型。基因1型和2型仅见于人类,3型呈世界分布,4型见于亚洲。3型与4型均能从人与猪分离到,猪是戊肝病毒的动物贮存宿主,目前被认为是一种动物源性传染病。     

戊型肝炎病毒抗体的研究

戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）和戊型肝炎已被研究多年，许多作者从流行病学、血清学以及病毒基因方面，作了许多工作［１～３］，在诊断试剂方面，也有不少报告［４～６］．我们在研究中发现，ＨＥＶ抗体有不同亚型，现将初步结果报告如下．１材料和方法１．１材料ＨＥＶ抗原的...     

甲/戊型肝炎病毒重组抗原基因的克隆及表达

 将甲肝病毒vp1编码基因(aa 24~171)和戊型肝炎病毒ORF2基因(aa 431~615)通过一段编码柔性甘氨酸链(Gly4 Ser Gly4)的基因片断连接,获得编码HAV/HEV融合蛋白基因(AEAg342).将该融合基因插入质粒pBV220,构建表达质粒pBV220-AEAg342.将pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL21中进行表达,表达量约占菌体总量的20%,经离子交换层析纯化,目的蛋白纯度达90%以上.Western blot证实该蛋白能与甲肝及戊肝患者阳性血清发生特异性反映,为进一步开发双价疫苗和联合诊断试剂奠定了一定基础.     

戊型肝炎病毒基因分型的研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种能引起急性、自限性病毒性肝炎的RNA病毒.主要经粪-口、血液等途径传播,常引起暴发性流行,或呈散发性流行.目前,HEV基因型分型不明确,给戊型肝炎的诊断、预防、流行病学调查及交流造成了一定困难.文章综述了戊型肝炎病毒基因分型的研究进展,目的是为HEV的研究奠定基础.     

重组诺如病毒P颗粒的表达纯化及免疫原性

通过构建重组质粒并表达纯化目的蛋白,用SDS-PAGE、Western blot和NativePAGE检测蛋白,用Superdex~(TM)200凝胶色谱层析分析目的蛋白的多聚体,用动态光散射以及透射电镜对目的蛋白颗粒进行分析,并通过小鼠免疫,用四免血清进行酶联免疫吸附实验检测蛋白的免疫反应.结果表明:成功构建了质粒pET26b-PP-3copy-Aβ1-6-loop123,并成功表达目的蛋白;目的蛋白存在3种寡聚体形式,分别为24聚体、12聚体和二聚体;蛋白颗粒约为20nm,并对β淀粉样蛋白有免疫反应.     

AsiaⅠ型口蹄疫病毒基因工程多肽疫苗的构建及其免疫原性分析

为了构建Asia Ⅰ型口蹄疫病毒多肽疫苗,用反转录PCR方法扩增VPI基因并测得该基因的核苷酸序列．将VPI（133AA-163AA）、VP2（1AA～33AA）抗原表位基因分别与卢一半乳糖苷酶基因（简称LacZ＇）3’末端相连构建表达质粒LacZ’-VIP和LacZ’-VP2．化学合成VP1（133AA～163AA）-VP2（1AA～33AA）-VPl（133AA～163AA）串联重复抗原表位DNA,然后分别连接在β-半乳糖苷酶基因和IgG重链恒定区基因的3’末端,构建两种重组表达质粒LacZ’-VPl（133AA--163AA）-VP）2（1AA～33AA）-VP1（133AA-163AA）（命名为pTl）和IgGvPl（133AA～163AA）-VP2（1AA～33AA）-VPl（133AA-163AA）（命名为pT2）．通过Westernblot、血清中和抗体效价测定、T细胞增殖反应及豚鼠抗病毒保护实验分析所构建疫苗的免疫原性及有效性．结果显示pT1、pT2表达的融合蛋白能够诱发豚鼠产生较高的中和抗体及刺激豚鼠T细胞增殖．pT1、pT2两种融合蛋白分别2次免疫豚鼠后,100％的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击．pT2融合蛋白1次免疫豚鼠后70％的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击．     

散发性戊型肝炎84例临床分析

目的：分析散发性戊型肝炎（HE）的临床特点。方法：对临床诊断为急性病毒性肝炎患者的血清，采用ELISA法检测，抗－HEVIgM、抗HAVI gM、抗－HBCIgM及抗－HCV，同步检测肝功能。采用仪器为COBAS，FARAⅡ型自动分析仪。结果单纯戊肝（HE）29例，同时感染甲肝（HE＋HA）18例；重叠感染乙肝（HE＋HC）2例；重叠感染丙肝（HE＋HC）2例，甲乙戊三重感染（HA＋HB＋HE）6例，乙、丙、戊感染（HB＋HC＋HE）1例，重症肝炎全部在重叠感染组。结论：与HE及HE＋HA相比，重叠感染组的病情重，预后差。     

急性戊型肝炎72例临床分析

通过临床观察发现急性戊型肝炎平均发病年龄高于甲型肝炎,而且年龄越大,病情越重,肝功能损害越大,病程越长。单纯戊型肝炎预后良好,无慢性化趋势。     

人与动物感染戊型肝炎病毒的研究进展

70年代末 ,发现了一种在临床症状上类似于甲型肝炎的非甲非乙肝炎[1] 。 1990年Ｒｅｙｅｓ[2 ] 等首先应用分子克隆技术获得该病毒的基因克隆。 1998年在东京召开的国际会议上 ,正式将此型肝炎及相关病毒分别命名为戊型肝炎 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥ ,ＨＥ)和戊型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ ,ＨＥＶ)。ＨＥＶ是一种经肠道传播的致病因子 ,本病主要发生在亚洲、非洲和北美洲的发展中国家。血清流行病学调查发现 :1%— 2 %的美国或其它西方发达国家志愿献血人员血清中呈ＨＥＶ抗体阳性[3 ] ,而且也从发达国家本土病人中分离出了…     

猪脑心肌炎病毒VR-129 B株VP2重组蛋白的构建表达及其免疫活性分析

为获得大量猪脑心肌炎VP2基因及蛋白研究的细胞模型,构建pDC315-EMCV-VP2真核表达载体,且将其转染到293T细胞,筛选出阳性质粒进行克隆。EMCV VR-129B株VP2基因序列参照GenBank(登录号:X74312),利用RT—PCR方法扩增VP2的全基因序列,将其与质粒pDC315经NheI和XhoI双酶切后连接,构建pDC315-EMCV-VP2重组表达质粒,并将其转染至293T细胞。使用荧光定量PCR方法观察pDC315-EMCV-VP2真核表达载体在细胞中的表达情况。双酶切PCR结果获得大小为780 bp的基因片段,测序结果显示与GenBank上已经公布的同名基因(登录号:X74312)序列片段同源性为100%,重组质粒构建成功。实时荧光定量PCR(QPCR)结果显示,重组质粒转染组与空质粒组之间相比,EMCV-VP2基因的表达量显著上调(P0.001);在荧光显微镜下观察转染细胞,转染成功部分出现较亮绿色荧光,EMCV-VP2基因表达稳定。从转染细胞中提取重组蛋白与EMCV阳性血清和阴性血清进行ELisa反应,具有较好免疫活性。     

乙型肝炎病毒与乙型肝炎疫苗

介绍了乙型肝炎病毒的形态、结构及功能 ,并对乙型肝炎疫苗的制备和使用作了详细的分析     

抗A5型口蹄疫病毒重组多肽疫苗的研究

根据A型口蹄疫病毒（FMDV）的VP1基因序列及国际上公认的抗病毒中和表位,并结合对口蹄疫病毒的研究成果。设计了A型FMDV的重组多肽疫苗．分别选择VP1上21～40位和137～160位氨基酸对应的基因序列为表位基因,组成137～160—21～40-137～160的串连结构,并以大肠杆菌β-半乳糖苷酶为大分子载体,构建重组质粒pLM99,在大肠杆菌中表达得到高含量的融和蛋白．体外免疫原性检测表明,所表达的融和蛋白与标准A型阳性血清有特异性抗原／抗体反应,即说明该融和蛋白具有免疫反应性．免疫豚鼠的实验结果表明,融合蛋白能在豚鼠体内诱导中和抗体,并使70％的豚鼠能抵抗病毒的攻击．     

ELISA法替代RIA法测定重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效价

分别用ELISA法和RIA法测定重组乙肝疫苗(CHO细胞)效价,将血清抗-HBs阳转率及ED50值(稀释度)进行统计学分析,对全部样本的阳转率进行X2检验,P0.05,按α=0.05水准分析,说明两种方法的阳转率差异不显著;对检测结果进行t检验,0.05P0.1,按α=0.05水准,说明两种方法检测结果差异不显著。因此,可用ELISA法替代RIA法测定乙肝疫苗效价。     

HEV经输血感染兔模型研究

目的 建立输血感染戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)兔模型,了解HEV全血输注传播的可能性,并观察感染后的指标动态.方法 以兔HEV接种4只SPF兔,经腹腔静脉窦采集抗凝血,然后立即以约10 mL/kg经耳缘静脉注射输血方式分别给予正常SPF受体兔5只,每周监测受体兔粪便和血清抗原、抗体和核酸,...     

基因型乙肝疫苗的免疫效果的性别差异研究

探讨基因型乙型肝疫苗（YDV）接种成年男女后的抗－HBs滴度及抗－HBs阳转率变化的性别差异，从而进一步了解其免疫效果。     

以减毒猪霍乱沙门菌为载体的抗O型口蹄疫病毒重组活菌苗在家兔体内免疫应答的初步研究

将含有口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pBO1经过中间宿主鼠伤寒沙门菌LB5010修饰后,电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C500中,构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pBO1／S．cho．血清凝集实验验证,筛选到的转化菌仍然具有猪霍乱沙门菌的血清学特性,即具有免疫原性．采用口服方式免疫家兔,检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答．家兔免疫后8周,分离脾脏T细胞,检测T细胞增殖情况．结果显示,口服DBO1／S．fho的家兔T细胞在FMDV特异性抗原的刺激下有明显的增殖反应,刺激指数SI〉11;免疫后2周和8周分别取家兔静脉血,用液相阻断ELISA法检测血清中针对FMDV的特异性抗体,pBO1／S．cho组家兔产生的抗体效价为1／32。     

LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步研究

利用摇瓶在温度、pH范围、诱导剂量及诱导时间等不同因素变化时，进行了重组毒素LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步探索.结果表明，工程菌优化的发酵条件为：pH范围7．3～7．5，诱导温度为34℃．诱导时菌密度A600=0．8，诱导时间为4～4．5h，诱导剂(IPTG)浓度为0.5mmol/L。     

丙型肝炎病毒E2基因在转基因番茄植株中的表达

以T-E1E2为模板扩增得到丙型肝炎病毒包膜蛋白基因E2,构建该基因的植物表达载体p35s-E2．通过农杆菌介导的叶盘法转化番茄子叶．转基因番茄植株叶片总DNA的PCR、Southern blot检测结果表明,E2基因已整合进了转基因番茄植株基因组中;RT-PCR,Western blot分析证实E2基因在转基因番茄植株叶片中表达．