植物激素对过氧化氢酶的影响

采用极谱氧电极测定过氧化氢酶酶促反应的双曲函数曲线,以回旧斜率的倒数表示酶的活性,研究不同浓度的生长素、赤霉素、细胞激动素、脱落酸和乙烯利对过氧化氢酶的影响,试验结果表明,生长素、赤霉素对过氧化氢酶有抑制作用,细胞激动素对过氧化氢酶有促进作用,脱落酸和乙烯利对过氧化氢酶无显著的影响。     

JR6对人结肠癌细胞HT-29氧化还原系统影响

探讨新型抗肿瘤药物JR6诱导人结肠癌细胞HT-29凋亡机制.使用噻唑兰比色法(MTT)检测JR6对人结肠癌细胞HT-29的生长抑制作用,并测定HT-29细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)浓度.JR6对HT-29细胞生长有明显抑制作用,可以降低HT-29细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性,升高MDA浓度.JR6对HT-29细胞有明显的细胞毒作用,其IC50为39.8μg/ml,可能通过影响HT-29细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA浓度,达到诱导HT-29细胞凋亡的目的.     

油菜中过氧化物酶及相关生化指标的研究

为了研究过氧化物酶、过氧化氢、苯丙氨酸解氨酶和α-淀粉酶之间的关系以及这些酶与油菜生长的关系,对十字花科(Cruciferae)植物油菜不同器官(根、茎、花、叶)的过氧化物酶、α-淀粉酶、苯丙氨酸解氨酶的活性以及可溶性蛋白和过氧化氢含量进行测定;同时采用聚丙烯酰胺凝胶活性电泳方法,对过氧化物酶及α-淀粉酶同工酶谱进行了分析.结果表明,不仅油菜不同器官的过氧化物酶、α-淀粉酶、苯丙氨酸解氨酶的活性、可溶性蛋白和过氧化氢含量存在着差异,而且其过氧化物酶和α-淀粉酶同工酶谱条带在不同器官之间也存在着差异.     

水仙叶片细胞微体内过氧化氢酶细胞化学定位

应用电镜细胞化学方法,研究微体内过氧化氢酶在细胞内超微结构水平上的定位,结果表明,过氧化氢酸在水仙叶片细胞微体的基质和膜上具有高的反应特异性,在基质中的反应产物呈粗颗粒状沉淀,电子致密度明显增高,而在叶绿体、线粒体、内质网、质体、细胞质和液池中均没有观察到酶活性反应产物,水仙叶片细胞中过氧化氢酶的活性随着叶片发育进程而逐渐增强,至成叶其活性最高。     

UV-B辐射增强对浮萍过氧化氢酶和过氧化物酶活性的影响

试验通过测定在不同光照强度的紫外光照射后,浮萍的过氧化氢酶和过氧化物酶活性的大小来探究一下UV-B辐射增强对浮萍过氧化氢酶和过氧化物酶可能产生的影响.实验设置5个辐射强度,结果表明:在辐射梯度范围内,过氧化氢酶符合低促高抑效应;短时间UV-B辐射处理使过氧化物酶(POD)活性减弱,而较长时间紫外辐射处理后POD活性有所增加,并在辐射处理20h后达到一个峰值,这可认为是浮萍适应UV-B辐射胁迫的一种策略行为,最长辐射时间处理后过氧化物酶活性又明显降低.     

模拟酶轴向配体激活过氧化氢酶的研究──提高天然酶活性的新方法

曾报道了以铁卟啉作为细胞色素Ｐ４５０模拟酶的活性中心，轴向配体例如巯基苯甲酸、半胱氨酸作为激活剂，提高模拟酶体系催化活性的研究．而过氧化氢酶的活性中心也为铁卟啉．进一步报道模拟酶的轴向配体提高过氧化氢酶的活性，并提出了一种提高天然酶活性的新方法．硫代硫酸钠、维生素Ｃ、巯基乙酸和Ｌ－半胱氨酸可作为过氧化氢酶的轴向配体，而激活过氧化氢酶．     

三氧化二砷对黄鳝肝脏过氧化氢酶活性的影响

用黄鳝为实验对象，采用毒性实验方法，选择不同浓度的三氧化二砷进行腹腔注射后，对所取得的肝脏的匀浆液进行过氧化氢酶(CAT)的活性测定。结果表明：在实验剂量范围内，不同浓度的三氧化二砷对过氧化氢酶(CAT)活性的影响具有极大的差异性。小剂量时，CAT活性升高，浓度增大时，CAT活性下降。     

模拟酶轴向配体激活过氧化氢酶的研究：提高天然酶活性 …

曾报道了以铁卟啉作为细胞色素Ｐ４５０模拟酶的活性中心。轴向配体例如疏基苯甲酸半胱氨酸作为激活剂,提高模拟酶体系催化活性的研究,而过氧化氢酶的活性中心也为铁卟哇。进一步报道模拟酶的轴向配体提高过氧化氢酶的活性,并提出了一种提高天然酶活性的新方法。     

水杨酸法测定蔬菜水果中过氧化氢酶活性

建立一种测定蔬菜水果中过氧化氢酶活性的新方法.在过氧化氢中加入过氧化氢酶分解部分过氧化氢,剩余的过氧化氢在酸性条件下与二价铁离子反应,产生的羟自由基与水杨酸反应生成紫色物质,该紫色物质最大吸收波长为510 nm,通过测定该物质含量来计算过氧化氢酶活性.结果表明:最佳反应条件为1m L p H=1的硫酸、4 m L硫酸亚铁溶液(1×10-3mol/L)、1m L过氧化氢溶液(0.003%)、2 m L水杨酸溶液(1×10-2mol/L),在40℃下反应10 min为最佳反应条件.测定的五种蔬菜水果中过氧化氢酶活性:土豆的过氧化氢酶的活性为4.96(μg/min);黄瓜的过氧化氢酶的活性为1.05(μg/min).     

梅花鹿过氧化氢酶基因的克隆与表达

克隆得到梅花鹿过氧化氢酶基因序列,已提交Genbank登录(HQ877674).基因编码区全长1 584 bp,编码527个氨基酸,理论计算分子量为60 027.4 Da,理论计算等电点为6.67,预测蛋白质结构中不含有二硫键,在蛋白质序列中,具有过氧化氢酶家族活性中心保守序列和过氧化氢酶家族亚铁血红素保守序列,其DNA序列和蛋白质序列均与Bos taurus来源过氧化氢酶的同源关系最为接近.使用pPICZαC质粒和毕赤酵母GS115菌株,成功异源表达该基因,对诱导表达的发酵上清液进行活性测定,酶活为463 U·mL-1.     

重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况,构建人过氧化氢酶的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶,并进行活性检测.我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体pET-15bhCAT,将其转化大肠杆菌Rosetta-gami,经过IPTG诱导,表达产物经超声破碎后用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化,用试剂盒检测重组hCAT酶活性,然后检测其对DNA氧化损伤的保护作用.通过荧光定量PCR(qPCR)测定hCAT基因在HLF-1正常细胞与几种常见肿瘤细胞中的表达情况.本研究成功构建了pET-15b-hCAT的原核表达载体,SDSPAGE检测结果表明,IPTG诱导表达出一条分子质量约为59.7 ku的目的蛋白,该蛋白主要以可溶的形式存在,活性检测表明经纯化得到的rhCAT比活力为62.9 U/mg,pUC19质粒氧化损伤保护实验显示rhCAT对DNA有一定的损伤保护作用.qPCR检测显示hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.成功构建了人过氧化氢酶的原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta-gami获得了hCAT的可溶性表达,纯化的rhCAT具有活性,hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.这为后续功能研究及性质实验奠定了基础.     

苦参提取物对小麦防御性关键酶活性的影响

采用水煎煮法提取苦参生物碱,以溴甲酚绿比色法测定苦参生物碱含量.用不同含量的苦参提取物处理小麦,测定不同时间药物处理后苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)酶的活性.结果表明:用苦参提取物处理小麦可诱导3种酶活性升高,均明显高于对照;随着处理时间的推移其活性均呈现先升后降的趋势,且都在第7 d达到峰值.苦参提取物对小麦的防御酶具有明显的诱导作用,参与小麦本身防卫机制,提高其抗性.     

不同磁场对过氧化氢酶活性及酶促反应的影响

在不同的磁场条件下研究了Nu—Fe—B静磁场对过氧化氢酶活性和反应动力学参数及二级结构的影响．采用磁场强度为0．15T、0．30T、0．45T的静磁场分别处理过氧化氢酶溶液,以曝磁时间为参数,对酶的活性、反应动力学参数、二级结构分别进行测定．结果表明,与对照样相比,处理过的过氧化氢酶活性增大,当作用时间为1h时,活性最大．3个磁场下酶的活性分别增加了18．2％、23．5％和25．8％;用不同的磁场对过氧化氢酶溶液分别作用1h,与对照样相比,随着磁场强度的增加,Km值从0．02785mol／L增加到0．08724mol／L,Vm值从0．03597mol／（L·min）增加到0．09511mol／（L·min）;同时,圆二色光谱测定结果表明磁场处理过的过氧化氢酶的二级结构也发生变化,这可能是由于磁场对过氧化氢酶辅酶中的Fe^3＋影响而引起的．     

过氧化氢酶发酵性能的研究

为了初步得出溶壁微球菌发酵生产过氧化氢酶的条件,采用摇瓶发酵的方法,测定了菌体浓度、过氧化氢酶活性、pH和发酵时间的关系。结果表明,过氧化氢酶的活性随着菌体浓度的增加而增加;发酵12h后,细菌生长处于稳定期后,过氧化氢酶的活力也接近最大;pH在细菌的对数生长期增加较快,而在稳定期后pH仍不断增加。发酵12h收获菌体浓度为1．3mg/mL,相当于酶浓度为292u/mL。     

模拟酶用于测定葡萄糖及免疫分析的研究

研究锰-四磺基苯卟啉(Mn-TPPS₄)络合物催化过氧化氢与邻苯二胺反应的特性,并与辣根过氧化物酶比较。与葡萄糖氧化酶的酶促反应偶联,测定血清中的葡萄糖,与试剂盒测定结果吻合。用两种方法将Mn-TPPS₄标记到牛血清白蛋白上,其免疫活性和催化活性均较好。     

同型半胱氨酸对血管抗氧化酶基因表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)诱导抗氧化酶基因表达的影响。方法采用实时定量RT-PCR测定基因的表达,用DCF—DA荧光探针测定细胞内ROS;研究材料为HUEVC及高Hcy小鼠胸主动脉;结果同型半胱氨酸能诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUEVC)的ROS水平升高,抑制HUEVC的谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和过氧化氢酶(CAT)基因的表达。在高同型半胱氨酸血症小鼠胸主动脉中,谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因表达均明显降低。结论 Hcy能促进上皮细胞内活性氧的产生,可明显促进氧化损伤,同时显著降低抗氧化酶(谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶及锰超氧化物歧化酶)的活性。     

白花泡桐根分化过程中过氧化物酶、IAA氧化酶和过氧化氢酶的变化

为了解过氧化物酶、IAA氧化酶和氧化氢酶在植物不定根分化,发育过程中的作用,在实验室分析测定白花泡桐[Paulownia foutunei (Seem.)Hemsl]不定根分化过程中过氧化物酶、IAA氧化酶和过氧化氢酶活性的变化。结果表明：过氧化物酶在根分化0d-2d的活性下降37．6％,随后逐步上升;IAA氧化酶活性在0d-2d内迅速下降了52．6％,随后逐步上升;过氧化氢酶的活性在不定根化化过程中逐步上升,0d-4d酶活性从5．1上升到10．5,从第4天开始活性增加减慢。     

氨氮对斑马鱼2种代谢酶类的影响

以斑马鱼(Brachyclanio rerio)为实验材料,用氯化铵模拟水体中氨氮进行急性毒性实验.得到24,48,72,96 h的半致死浓度(LC50),分别为126,114,105,101 mg/L.在96 h LC50以下,设6个质量浓度梯度,进行24 h氨氮胁迫,之后测定斑马鱼不同组织中的过氧化氢酶(CATase),腺三磷酸酶(ATPase)活性.结果表明,各类酶活的变化与氨氮质量浓度都呈一定相关性,随着氨氮质量浓度增大,ATP酶活性受到显著抑制,CAT酶呈曲线变化.     

南美蟛蜞菊对豌豆的遗传毒性及抗氧化酶活性的影响

在室内用不同浓度(3%,6%,9%,12%,15%)的入侵植物南美蟛蜞菊Wedelia trilobata(L.)水提取液胁迫豌豆Pisum sativum L.种子和幼苗,通过测定种子活力、根尖细胞微核率和抗氧化酶活性,探讨前者对后者遗传毒性和抗氧化酶活性的影响.结果表明,随着南美蟛蜞菊浓度的增加,豌豆种子活力降低,细胞微核率及过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性提高,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化物酶(POD)活性则先升后降.显然,南美蟛蜞菊对豌豆有一定的遗传毒性,后者通过提高抗氧化酶活性主动应对前者可能产生的损伤.     

在高强度光照胁迫下极大螺旋藻两种抗氧化酶活力变化的研究

作者研究了极大螺旋藻在200001x，400001x和1000001x光照下，分别经2h，4h，6h培养后，其超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化，结果发现：SOD的活性在不同光照胁迫强度及不同胁迫时间下，总体上呈现出先增加，后下降的变化趁势，且在经2h胁迫后，SOD活性都大于正常光照所产生的变化．经同工酶电泳检测发现，经2h胁迫后不仅SOD的表达量增加，而且出现了一种新的同工酶带．过氧化氢酶则在和SOD酶的相同测定环境下，其活性至现出先下降，后略微上升的变化过程，但光照胁迫条件下的CAT活性，都低于螺旋藻正常生理条件下的CAT的活性．