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血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应 总被引:1,自引:0,他引:1
PF4的C-末端13肽和TSP1的429~459片段31肽通过Gly-Pro-Gly肽桥设计为融合蛋白TSF.采用pGEX-2T载体在 E.coliJM109中获得了 TSF蛋白的高效表达.采用 MTT方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验,测定了TSF及其相关物GST-TSF,PF4(58-70),TSP1(429~459)等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应.结果显示TSF特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长,并有明显的剂量依赖关系;非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成;上述抑制活性TSF>>GST-TSF>PF4(58~70)>TSP1(429~459).TSF显著抑制小鼠Lewis肺癌的生长,1.0μmol/kg·d的TSF对Lewis肺癌的抑瘤率达到68.75%.结果说明TSF的重组设计是成功的,TSF为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子. 相似文献
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蛋白质二硫键异构酶既是酶又是分子伴侣 总被引:4,自引:0,他引:4
蛋白质和新生钛折叠的概念近十年来发生了重大的转变。新生肽成熟为功能蛋白需要分子伴侣和折叠酶的寿命才能完成。蛋白质二硫键异构酶是一种折叠酶,同时也有分子伴侣活性,该假说得到越来越多体内外实验的支持。分子伴侣活力可能是酶分子在进化过程中获得的新的性质,以提高酶催化效率,并在与蛋白质折叠有关的生命活动中发挥新的功能。 相似文献
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小肽融合蛋白通过阻断VEGF与KDR结合抑制血管生成与肿瘤生长 总被引:2,自引:1,他引:2
血管内皮细胞生长因子(VEGF)结合酪氨酸激酶受体KDR/FLK1能促进血管生成。筛选能封闭VEGF与KDR相互作用的小肽可以通过阻断血管形成而抑制实体瘤生长。将从噬菌体12肽库中筛选而获得的能与KDR结合的123肽K237DNA克隆到表达载体p QE42中,在大肠杆菌M15中稳定表达二氢叶酸还原酶融合蛋白DHFJR-K237,经变性、复性后得到纯度达90%的可溶性蛋白。体外实验显示,DHFR-K237能竞争抑制VEGF结合KDR,显著抑制由VEGF刺激而引起的人脐静脉内皮细胞增殖;体内实验表明,DHFR-K237能显著抑制鸡胚尿囊膜血管形成和荷瘤裸鼠中肿瘤的生长。结果表明,12肽K237是VEGF结合KDR的有效拮抗剂,具有抗肿瘤生长和转移的潜在应用前景。 相似文献
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甲七肽(酪-甘-甘-苯丙-甲硫-精-苯丙)是1979年由Stern等发现的一种内源性阿片样肽,它可被血管紧张素转换酶(ACE)所降解,已知ACE的特异性抑制剂Captopril具有中枢镇痛作用并可为纳络酮所阻断,因而推测Captopril可能因抑制甲七肽的降解而发挥镇痛作用,但Captopril镇痛的具体作用部位迄今未明。 相似文献
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电喷雾离子阱质谱法鉴定人肝癌细胞双向凝胶电泳胶内蛋白质 总被引:3,自引:0,他引:3
质谱法鉴定双向电泳胶内蛋白质是目前蛋白质组研究中最重要的分析方法.采用电喷雾离子阱质谱法对人肝癌细胞系BEL-7404双向电泳后的胶内蛋白质进行分析鉴定.蛋白质经双向电泳分离,从凝胶上切割后,经过胰蛋白酶胶内酶解,通过液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析肽谱和各肽段的氨基酸序外.根据肽谱和序列信息,经数据库检索,结合双向电泳分离获得的蛋白质分子量和等电点信息,对9种胶内蛋白质进行了鉴定.获得的氨基酸覆盖率为对21%~72.2%.其中两种蛋白质在SWISS-2DPAGE的肝细胞蛋白质组数据库中尚未报道.在此基础上,进一步探讨了所鉴定的蛋白质与肝癌发生的关系.这一方法的应用,为与疾病相关的蛋白质组研究提供了有效和快速的分析鉴定方法. 相似文献
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孕中期肾蛋白(Midkine,MK)和多效生长因子(Pleiotrophin,PTN)组成一种新的肝素结合生长/分化因子家族。它们都是分泌性单肽链蛋白,蛋白质结构都类似。MK和PTN基因均可在胚胎发育期在多种组织大量表达,而仅PTN在出生后,有一种神经系统的短暂表达高峰,两者不同地见于数种成年期组织。这些发现结合体外实验结果,提示它们在发育上有重要的促生长/分化作用,并具有神经营养活性,在成年期也有某些未知的生理功能。其中,尤以对神经系统的发育和维持最为重要。它们还可促进血管内皮细胞的纤溶活性,并可能作为肿瘤生长因子在某些肿瘤的发生中起作用 相似文献
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美国和日本的科学家们,最近在小鼠体内分离出一种能产生高血压的基因。对于血管紧张肽来说,一种蛋白质的基因编码起受体作用,一种为人们所知的神经发射机与人体中的高血压有关。佐治亚州埃莫里大学的病理学家K·伯恩斯坦(K.Bernstein)和东京大学Kyowa Hakko Kogyo公司的Tadashi Inagami,已经克隆了这种基因并识别出血管紧张肽受体的分子结构。伯恩斯坦在上个月巴黎卢梭科学院召开的一次会议上指出,他们的发现将给医学研究带来两个主要益处。 相似文献
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为了探讨 CD2分子的信号传递功能,以编码CD2胞内区(Thr211-G1n336)肽段的cDNA为“钓饵”,采用酵母双杂交系统从激活的人T淋巴细胞cDNA文库中筛选与之相互作用蛋白的cDNA序列.并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内与CD2胞内区结合的特异性.克隆并鉴定了一个与CD2胞内区特异性结合的胞内蛋白分子,与v-fos转化效应蛋白(Fte-1)同源 Fte-1参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体转运蛋白质.蛋白数据库检索表明,Fte-1具有蛋白激酶PKC的结合与作用位点,提示Fte-1参与CD2分子介导的信号传递 相似文献
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新组织产生一直是医学领域一件最深奥莫测的事。创伤痊愈时新血管如何生长?哈佛医学院一个科研小组历经几十年的探索,于上星期宣布,最终分离、纯化到一种导致新血管形成的人体蛋白质。科研小组负责人瓦利博士(Dr.Bort Vallce)说:“几十年来再造器官是医学上梦寐以求的事,今天现实了。”这种蛋白质发现为认识组织生长(包括骨和器官再生)打开一条道路;同时为癌症,心脏病和其他许多血管生长机能失调疾患带来新的疗法。 相似文献
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蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式.甲硫氨酸(Met)被氧化则变为甲硫氨酸亚砜(Met(O)),它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽-甲硫氨酸亚砚还原酶(Peptide methionine sulfoxide reductase, msrA)则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性.为了研究人体中Met氧化还原的机制,以牛msrA cDNA序列为信息探针,筛选人EST数据库,依据若干同源EST的信息从人cDNA分子库中克隆到一个长1255hp的人MSRA cDNA.该CDNA包含一个长705 bp的可读框,它编码了 235个氨基酸残基.同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的msrA基因的氨基酸一致性分别为88%和61%.表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约1.6kb的转录本,并在肾中呈高表达.应用辐射杂种细胞株定位系统(radiation hybrid mapping panel, RH mapping)将该基因精确定位在人染色体8p22~23区带的DSS518和D85550位标之间,由于此前已有Keratolyticwintereryth 相似文献
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P15INK4b/MTS2对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析 总被引:2,自引:0,他引:2
利用自行构建的稳定高表达P15INK4B的人肝癌细胞,研究了抑癌基因P15在细胞增殖中的作用.首先将抑癌基因 P15的 cDNA构建到高效真核表达的质粒载体 pXJ41-neo中的 EcoRI/XhoI位点,构建成 P15真核表达质粒 pXJP15.通过脂质体法将 pXJP15质粒转染人肝癌细胞SMMC-7721,进一步用 G-418筛选,获得了稳定高表达P15的人肝癌细胞模型SHT及相应的表达空载体的对照细胞模型SVXJ.通过Northern,Western分子杂交分析,表明SHT细胞中P15基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞,证实成功地建立了P15高表达的人肝癌细胞模型,与对照组相比,P15高表达的SHT1细胞的增殖受到抑制,流式细胞光度术和MI值测定表明P15阻抑细胞由G1期向S期和由G2期向M期的转换.Western免疫印迹分析结果表明,癌基因c-myc,c-fos的蛋白水平表达下降可能是P15抑制细胞增殖的分子机理之一。 相似文献
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令人惊奇的是,一些蛋白质具有独特的能力,能进入大多数蛋白分子都不能通过的细胞膜。到目前为止,此项技术仅用在实验室,科学家希望能用来开发一种新型的有治疗作用的分子。 tat是第一个被发现能进入细胞的蛋白质分子,它是一种HIV-1转活的转录因子,能控制病毒基因的表达。1988年美国旧金山加利福尼亚大学的博士后研究人员弗兰克尔(Frankel)和约翰斯霍普金斯大学的帕博(Pabo)开发一种生物测定方法测量tat的活性,弗兰克尔面对的问题是如何使tat进入细胞,在一项实验中,他刮破细胞膜以使tat扩散进… 相似文献
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