RecA介导的特异性DNA片段捕获

外显子捕获联合高通量测序技术在检测新的致病基因,特别是罕见的基因变异时,表现出很高的检测效率.但在具体使用过程中,探针易出现非特异性杂交,设计探针时需考虑Tm值均一性、所需初始样品量较大等问题.RecA是原核生物同源重组的中心分子,参与DNA损伤的重组修复.通过在体外模拟RecA蛋白在原核生物体内重组寻找同源序列的途径,用以捕获目标DNA分子,以期提高外显子捕获过程中的探针杂交效率和特异性.根据RecA在体内同源重组中的作用模式,先将基因组染色质片段化,再纯化DNA,设计生物素标记的特异性探针,在RecA蛋白的介导下以捕获基因组中的目的同源片段.结果显示:设计的和目标片段互补的探针高效而特异地捕获了目标DNA片段,ATP和水能够破坏RecA介导形成的三链复合体的稳定性,可以作为很好的杂交后洗脱试剂,而且水直接作为洗脱试剂可以提高洗脱目的 DNA片段的效率和纯度.     

菌落PCR方法筛选低能离子束辐射引起的IS插入突变

建立一种基于单拷贝基因的菌落PCR方法,筛选低能离子束辐射下IS因子插入引起的大肠杆菌lacI基因突变.PCR的优化结果显示,DMSO是一种合适的添加剂,而细胞的裂解方法和过程在菌落PCR中有比较关键的作用.经过测定,该方法的菌落PCR最低菌浓度约为1×105个菌.0.8%琼脂糖凝胶电泳结果显示,96个突变子的菌落PCR的成功率为95%以上.测序结果表明:两个由IS因子插入引起的突变被成功筛选.     

Mn2+在Ti/SnO2+SbOx/PbO2电极上的电氧化研究

比较了Ｔｉ／ＳｎＯ２＋Ｓｂｘ／ＰｂＯ２电极与Ｔｉ／ＰｂＯ２电极在电解Ｍｎ＾２＋体系中的析氧极化曲线、Ｍｎ＾２＋的氧化极化曲线和电极寿命,发现加入中间层后的Ｔｉ／ＳｉＯ２＋ＳｂＯｘ／ＰｂＯ２电极对Ｍｎ＾２＋的电氧化有更好的催化活性和较长的使用寿命。用正交实验法探讨影响Ｍｎ＾２＋→Ｍｅ＾３＋＋ｅ电极过程的因素,找出以Ｔｉ／ＳｂＯｘ／ＰｂＯ２电极为阳极用无隔膜电解槽电解Ｍｎ＾２＋的最佳工艺条件,在此条件     

北川白山羊血液中总DNA的不同提取条件对PCR的影响

对35只北川白山羊血液中总DNA提取并根据普通牛已知的κ-CN基因序列设计一对引物进行扩增,对影响PCR反应结果的因素进行了比较分析。结果表明:蛋白酶K终浓度为0.05 mg/mL,饱和酚—氯仿抽提3次、每次30 min,采用乙醇沉淀DNA时,DNA产量最低,PCR反应无特异条带;蛋白酶K终浓度为0.1 mg/mL,饱和酚-氯仿抽提1次、每次5 min,分别采用超速离心和乙醇沉淀DNA时,DNA产量最高,PCR反应有特异条带(350 bp),但前者出现引物二聚体,故作PCR反应时选择后者沉淀最佳。     

PCR—SSCP研究肝癌原发灶和转移灶中P16^INK4exon2的突变

用两步ＰＣＲ法，成功地从石蜡包埋组织ＤＮＡ中扩增了Ｐ＾１６ＩＮＸＫ４ｅｘｏｎ２片段；并用单链构象多态分析ＰＣＲ产物的差异。     

基于植物p53保守序列构建RNAi的DNA片段方法

构建p53基因RNA干涉DNA片段的目的,是将其应用于植物悬浮培养中的细胞周期调节.依据拟南芥p53基因与其他高等植物具有高度保守区域的特点,合成其两个区域的核苷酸片段(Ⅰ和Ⅱ)及其相应的反向片段(Ⅰ′和Ⅱ′),并在Ⅱ和Ⅱ′端部分别引入内含子两个端部核苷酸序列.在相互连接后进行PCR选择扩增,其产物再与克隆载体连接并经过蓝白斑筛选获得重组DNA;在电泳和核苷酸测序鉴定后表明,最终得到了Ⅰ–5′–内含子–Ⅱ′–Ⅱ–内含子–3′–Ⅰ′序列的重组DNA片段.该片段两端含多克隆位点,通过插入植物的表达载体进入细胞基因组,在细胞中其转录产物将形成发夹结构,经胞内酶切后可以形成短的双链RNA片段,将具有干涉p53基因表达的功能.     

AFM观察小白鼠心肌和肝核DNA片段的基因移位

用原子力显微镜(简称AFM)直接观察、体外表达和体外转录等实验技术组合,观察到了心肌和肝的核DNA片段的基因;用磷酸缓冲液稀释,并用开关蛋白质等活性因子使其部分解离,促使核基因在核DNA片段内或核DNA片段间静态或动态移位,得到了对应核DNA片段中的相关基因,如LDH/DNA体外表达活性变化的LDH同功酶酶谱图。基因静态或动态移位均表达活性降低,且基因移位程度与其对应基因活性降低程度呈正相关性。展示了未来运用AFM和体外表达等实验技术组合研究核DNA片段的基因移位和对应基因突变机制的前景。     

醋酸介质中Mn2+在铂电极上的氧化动力学

采用稳态极化曲线技术研究了Ｍｎ２ ＋ 在醋酸介质中的阳极氧化行为, 其反应为简单的电荷传递过程． 同时利用旋转圆盘电极研究了Ｍｎ２ ＋ 在铂电极上的氧化动力学, 得出阳极传递系数β＝ ０ ．２８ , 电极反应标准速率常数ｋｆ＝ ８ ．３５ ×１０ － ５ ｍ／ｓ（２９８ Ｋ） , 并且获得了动力学表达式： φ＝１ ．００ ＋ ０ ．０６５ｌｇ     

H_2SO_4介质中Ce(Ⅲ)在铂电极上的氧化及其对Mn(Ⅱ)催化氧化的研究

在１ＭＨ２ＳＯ４中,Ｃｅ（Ⅲ）在铂电极上的氧化──还原伏安图表明：电位扫描速度为０．０５０Ｖｓ－１时,氧化峰电位Ｅｐａ＝０．９２Ｖ。还原峰电位Ｅｐｃ＝０．６４Ｖ,△Ｅｐ＝０．２８Ｖ,且峰电位随扫描速度而变化,峰电流Ｉｐａ和电位扫描速度的平方不成线性关系;Ｃｅ（Ⅲ）在铂电极上的电荷迁移为准可逆过程,生成的Ｃｅ（Ⅳ）对Ｍｎ（Ⅱ）有均相催化氧化作用,催化电流峰电位在１．２６Ｖ处,催化反应受Ｍｎ（Ⅱ）离子向电极表面的扩散控制,Ｍｎ（Ⅱ）的氧化产物为ＭｎＯ２。但Ｃｅ（Ⅳ）的催化能力与其在铂电极上再生的速率有关。在本实验条件下,催化作用的效率较低。     

聚赖氨酸-聚乙二醇-聚赖氨酸与DNA聚离子复合物胶束的研究

将聚(N^ε-苄氧羰基赖氨酸)-聚乙二醇-聚(N^ε-苄氧羰基赖氨酸)(PLL(Z)-PEG-PLL(Z))中的氨基去保护得到两端为聚阳离子的嵌段共聚物聚赖氨酸-聚乙二醇-聚赖氨酸(PLL-PEG-PLL),并对其与DNA结合形成的聚集体的性质进行了研究．结果表明：PLL-PEG-PLL与DNA形成了聚离子复合物胶束;DNA与PLL通过静电作用形成核,PEG包裹在其外面,得到的聚离子复合物胶束为均相体系,即使在化学计量点也不会沉淀,保持着很好的流动性和稳定性,这一点对基因治疗是很重要的;而且随着PLL段的增加,包覆效果更好;聚离子复合物胶束使得DNA具有较强的核酶抗性;大小在10∽35m之间,呈球形;聚离子复合物胶束能够用于基因的传递,使基因在昆虫细胞系SF9中能够表达出蛋白质．     

蛋白质分子的定点突变和化学修饰

回顾蛋白质工程研究及应用技术、手段和方法,分析定点突变及化学修饰在改造蛋白质分子结构与功能方面的异同。定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。该方法与使用化学因素导致突变的方法相比,具有突变率高、简单易行、重复性好的特点。     

微处理器的随机测试长度研究

文章给出关于微处理器随机测试长度的计算方法:从模块级出发或从功能级出发,由最小检测概率计算最大测试长度。并获得实验证实。     

组合电路的随机检测长度分析

超大规模集成电路及所伴随问题的出现,在数据产生和检测方式有效性的分析方面再次引发了对随机检测的兴趣,即网络的输入采用随机方式,在实际应用中可采用线性反馈移位寄存器(LFSR)来产生输入向量。作者分析了在组合逻辑中测试长度与随机检测之间的关系,并讨论了用随机法测试延迟路径的能力。     

不同分布的随机数相位随机化后对临界值的影响

利用相位随机化的替代数据方法可对动力系统实测时间序列数据的随机或混沌特性进行判定。本文对服从不同分布的随机数相位随机化后对动力系统实测数据生成的替代数据及其所对应的判值的影响做了分析研究。计算结果表明：不同分布的随机数相位随机化后对临界值无质的影响，从而进一步论证了相位随机化方法的可行性和实用性．     

Comparative Studies on Preparation of Large Plant DNA Fragments by Pulse Field Gel Electrophoresis

The preparation of large plant DNA fragments is extremely important to the construction of large insert DNA libraries (YAC, BAC, PAC and TAC). Although several techniques have been developed in each step of large plant DNA fragments preparation, the whole processing remains complicated and difficult. Based on authors‘ research experience and the recent worldwide development in this field, the following aspects are discussed in this paper: techniques of plant high molecular weight (HMW) DNA purification by pre-electrophoresis, the optimal conditions for the partial digestion of the HMW DNA by HindⅢ, the isolation effects of of large plant DNA fragments (100-400 kb) with different parameters of pulse field gel electrophoresis (PFGE), and the recovery of large DNA fragments. Through comparative studies, the advantages and disadvantages of each technique are discussed and some recommendations are proposed for preparing high quality large plant DNA fragments. The suggested techniques have been used in preparing the large DNA fragments of maize, rice, moss, laver, sea tangle and peach, and similar resuits are obtained among all the materials. This paper only reports the results using maize as material.     

Observation and Analysis of in vitro Expression of Mouse Heart Nuclear DNA Fragments by AFM

Using AFM,we observed linear chain-like complexes formed by some specific proteins and the multi-mRNAs during the in vitro expression of some active genes on the DNA fragments. The LDH mRNA in the multi-mRNA complex can in vitro translate LDH. Via AFM, we also discovered that nmRNA prepared from heart muscles, along with some specific proteins can form linear chain-like nmRNA complexes in which LDH mRNA can also translate LDH in vitro. Our work shows the prospective application of AFM in the research of the biological reaction of the active genes on the DNA fragments.     

应用RAPD技术分析热带龙眼四季蜜与常规龙眼品种的遗传差异

为分析不同龙眼品种之间的遗传差异及亲缘关系,以近年从广西引进的四季蜜龙眼和原产广东、福建、广西的9个龙眼品种的叶片为材料,以基因组DNA为模版,使用100条随机引物进行RAPD扩增,其中18条引物扩增出清晰的具多态性的DNA谱带.采用UPGMA法对这18条引物扩增的谱带进行聚类分析发现,遗传距离系数为0.8时,可将10个龙眼品种(系)分为3组,第1组含四季蜜,第2组含灵龙,第3组含其余8个常规龙眼品种,它们是古山二号、储良、友谊、龙优、石硖、松风本、大乌圆和广眼.     

刚柔长短桩复合地基模型实验研究

对由四根水泥土短桩和一根混凝土长桩组成的复合地基模型进行了实验研究.分析了复合地基的荷载与沉降关系、桩身应力和桩间土应力变化情况,认为在弹性阶段刚柔桩和桩间土共同分担荷载,在塑性阶段柔性桩能够将荷载传递到更深的深度.由于短桩的端阻力作用,长桩在相应位置将出现负摩阻力,桩间土应力将出现两个峰值点.     

过氧乙酸-TAE缓冲液对硫修饰DNA切割条件的优化

用乙酸和过氧化氢反应生成的过氧乙酸(PAA)辅配三羟甲基氨基甲烷-乙酸-EDTA(TAE,pH7.5)对硫修饰DNA的切割条件进行了优化.用6 mmol/L的PAA-TAE处理硫修饰基因组和质粒DNA,30 min可使降解程度达到最大饱和.用60 mmol/L的PAA-TAE经20 h处理低熔点琼脂糖包埋的菌丝体DNA,得到最佳切割效果.用PAA-TAE验证了一株在脉冲场凝胶电泳过程中基因组DNA降解的Salmonella菌株的Dnd表型;同时验证其质粒激活降解与已经验证的Streptomyces lividans质粒激活降解一样为位点专化性硫修饰.