响应面法优化南方红豆杉中10-DAB提取工艺及其含量测定

为探究南方红豆杉（Taxus wallichiana var.mairei）中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ（10-DAB）的最佳提取工艺,本研究以南方红豆杉中10-DAB含量为指标,以料液比、提取时间及超声温度为考察因素,采用单因素试验结合响应面法优化10-DAB的提取工艺,并采用超高效液相色谱（UPLC）法检测不同采摘部位、不同生长年限及不同采收时节的10-DAB含量差异。结果表明,南方红豆杉中10-DAB的最佳提取工艺条件为料液比1∶15（g/mL）、提取时间23 min、超声温度40℃,该工艺条件下10-DAB的含量为1.18%,与理论值相对偏差为0.42%。UPLC检测结果表明,南方红豆杉叶的10-DAB含量显著高于枝和树皮,且10-DAB全年累积含量受季节影响明显,10月份达到最高值。该研究可为南方红豆杉中10-DAB的提取利用提供参考依据。     

高效液相色谱法测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的：建立云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的测定方法。方法：样品经干燥研细后采用甲醇浸提、乙酸乙酯萃取,测定同一批细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量,采用Spherisorb C185μm柱,流动相甲醇-乙腈-水（42∶13∶45）,流速1.0ml/min,检测波长为234nm。结果：云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量为0.023 47%,平均回收率为100.6%,变异系数（RSD）为2.2%。结论：该方法能准确、快速测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量,为探讨10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在细胞培养物中的代谢研究提供测定方法。     

超临界CO2-混合夹带剂萃取法提取10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ工艺条件研究

目的：以南方红豆杉的枝叶为原料,研究其活性成分10-脱乙酰巴卡丁Ⅲ（10—DABⅢ）提取的最佳工艺条件。方法：运用正交试验法研究萃取温度、萃取压力、萃取时间、混合夹带剂用量对CO2超临界萃取10-DABⅢ的影响。结果：最佳工艺条件为：夹带剂用量为15ml,萃取温度为50℃,压力为25MPa,时间在180min。各因素影响的强烈程度为夹带剂用量〉萃取温度〉压力〉时间。用最佳工艺条件从南方红豆杉枝叶中提取10-DABⅢ的平均量为0．600g／kg。     

红豆杉中紫杉烷类化合物制备10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ

红豆杉是我国珍稀植物,含有多种紫杉烷类化合物．以紫杉醇提取过程中的废料作为原料,首次将含7-木糖基．10-去乙酰基紫杉醇、7-木糖基-10去乙酰基三尖杉宁碱和7-木糖基．10-去乙酰基紫杉醇C三种化合物的混合物通过氧化、水解反应脱去紫杉烷类化合物C-7位上的木糖基,然后进行肼解反应脱去C-13位上的侧链,最后利用重结晶纯化,得到10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)．实验过程中用液质联用(LC/MS/MS)鉴定反应产物,通过核磁共振确认得到10-DABⅢ．结果表明,含10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ母环结构的紫杉烷类化合物——尤其是含木糖基的紫杉烷类化合物是能够转化为10-DABⅢ的．由于10-DABⅢ是半合成紫杉醇的原料,这对于提高紫杉醇的产量,缓解紫杉醇资源短缺的现状有着积极的作用．     

红豆杉细胞培养与紫杉醇形成的研究

研究表明红豆杉细胞培养物中含有紫杉醇（Taxol);采用苯基柱．甲醇：乙醇：水（20：32：48）为流动要的HPLC测定条件,细胞培养物中的Taxol与其他化合物的分离效果较为理想;25度,pH5.8的培养条件较适合红豆杉细胞生长和Taxol的形成,减少KNO3,CaCl2.2H2O浓度,增加（NH4）2SO4浓度均能促进红豆杉细胞生长,增加Taxol的形成量。     

泽漆化学成分的初步研究

目的：研究泽漆的化学成分。方法：采用多种分离材料,包括硅胶、Sephadex LH-20和反相RP-18,分离纯化得到单体,并通过波谱学方法鉴定其结构。结果：从泽漆的95%乙醇提取物的正丁醇部位,分离得到3个化合物,鉴定为泽漆酸A（Ⅰ）,樱花苷（Ⅱ）,persicogenin3’-glucoside（Ⅲ）。结论：3个化合物均为首次从泽漆中分离得到。     

西南鬼灯檠的化学成分研究

目的：对西南鬼灯檠化学成分进行初步研究。方法：采用溶剂法提取西南鬼灯檠的化学成分,常规硅胶柱层析、凝胶过滤层析和薄层色谱分离纯化,根据化合物的物理、化学性质和波谱解析鉴定了4个化合物。结果：4个化合物分别被鉴定为儿茶素（catechin,Ⅰ）、儿茶素-3—O-没食子酸酯（epicatechin-3—O-gallate,Ⅱ）、岩白菜素（bergenin,Ⅲ）和齐墩果酸（oleanoli cacid,Ⅳ）。结论：这4个化合物均是首次从西南鬼灯檠中分离得到。     

人工栽培南方红豆杉紫杉烷成分的研究

采用溶剂萃取及多种色谱技术分离纯化,从人工栽培南方红豆杉中分离得到紫杉醇(Ⅰ)、2′-乙酰氧基-7-表-紫杉醇(Ⅱ)、(3E,7E)-2,α10,β13α-三乙酰基-5,α20-二羟基-3,8-断紫杉烷-3,7,11-三烯-9-酮(Ⅲ)和7-表-紫杉醇(Ⅳ),其中化合物(Ⅱ)首次从南方红豆杉分离得到。     

药用植物松塔的化学成分研究

目的：对松科（Pinaceae）华山松（Pinu sarmandii Franch．）松塔的化学成分进行研究,以期寻找活性成分。方法：松塔的乙醇冷浸提取浸膏,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,分别得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇的萃取物。氯仿和正丁醇萃取物用正、反相色谱法,MCI、Pharmadex LH-20凝胶柱色谱法和HPLC法分离,分离得到6个化合物。结果：根据理化性质和利用NMR、ESI—MS等波谱技术鉴定化合物结构,鉴定了其中的4个化合物：异海松烷（Ⅰ）;Dehydroabietic acid（Ⅱ）;β-谷甾醇（Ⅲ）;β-胡萝卜苷（Ⅳ）。结论：其中化合物Ⅰ～Ⅱ为首次从该种植物中分离得到。     

产紫杉醇真菌发酵液脱色处理方法

不同性质的产物发酵后提取纯化工艺技术不同.真菌发酵生产紫杉醇/紫杉烷提取过程中,常常受到色素的干扰,特别是紫杉醇前体10-deacetylbaccatinⅢ(10-DAB)通过HPLC的C_(18)分离柱保留时间与色素峰十分相近,难以分离.为了便于分离纯化产紫杉醇菌株B19发酵液中紫杉醇、10-DAB等成分,研究了B19发酵液的脱色条件.首先比较了大孔树脂NKA-9,AB-8,D3520,颗粒性活性炭和粉末性活性炭等5种材料的脱色效率,发现粉末性活性炭是紫杉醇发酵液的最佳脱色剂.在单因素试验的基础上又进行了正交试验,确定了脱色及10-DAB疑似分子X回收的最优条件:活性炭用量1%(质量体积比),温度60℃,时间30 min,pH 8.0.在此条件下,B19发酵液脱色率为(62.8±0.7)%,X的回收率为(87.2±5.3)%.建立了紫杉烷发酵后的关键除色素步骤,可为类似工作提供借鉴.     

真菌诱导物对红豆杉细胞的影响

从红豆杉树皮、根皮中分离得到了十种真菌,由这些真菌制成的真菌诱导物加入到红豆杉细胞培养物中后,均能引起细胞发生过敏反应,细胞生长量下降,培养液ｐＨ值降低,但是各种真菌诱导物对紫杉醇合成的促进作用有很大的差别,最佳的情况为加入真菌诱导物后,紫杉醇的含量达到细胞干重的０．０７％．可为红豆杉细胞大规模培养提高紫杉醇的产量提供依据．     

东北红豆杉紫杉醇的提取纯化与HPLC检测

对东北红豆杉中紫杉醇的提纯与检测技术进行了研究，确立了固相萃取、液．液萃取、正己烷沉淀、硅胶柱层析分离、4℃、V（甲醇）：V（水）=3：1相中冷却放置48h的紫杉醇提取纯化技术，经高效液相色谱法检测，产品纯度达93％以上．     

红果樫木叶化学成分研究

对红果樫木叶化学成分进行深入研究,运用多种色谱方法进行分离纯化,运用1H NMR、13C NMR和MS波谱学数据鉴定其结构。结果得到3个化合物,分别为5, 7-二羟基-2-甲基色原酮（Ⅰ）、滨蒿内酯（Ⅱ）和对羟基苯甲酸甲酯（Ⅲ）。化合物Ⅰ~Ⅲ均首次从樫木属植物中分离得到。     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇粗品制备紫杉醇原料药的研究

通过考察紫杉醇提纯的多种方法,优化结晶析出法和柱层析法的工艺参数,首次将红豆杉细胞培养生产的65%的紫杉醇粗品分离纯化为符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药.以红豆杉细胞培养生产的65%的紫杉醇粗品为原料提纯制备紫杉醇原料药的方法,重复性好、工艺合理、操作简单、绿色安全,有望解决紫杉醇原料药的药源供应严重不足的问题.     

青风藤内生真菌 QT-NJ-10化学成分研究*1

目的：研究青风藤（Caulis sinomenii）内生真菌 QT-NJ-10的化学成分。方法以青风藤（Caulis sinomenii）作为宿主植物,分离得到青风藤的内生真菌。通过培养基优化,最终以其中一株内生真菌 QT-NJ-10为供试菌株,经过大批发酵,得到乙酸乙酯相粗提物。通过多种现代色谱手段对粗提物进行单体化合物的分离,单体化合物再利用核磁共振波谱手段（1 H-NMR,13 C-NMR,HSQC,COSY和 HMBC 等）鉴定其结构。结果通过分离、纯化、培养基优化,对其中之一 QT-NJ-10菌株再进行大批发酵,提取、分离,多种分析方法表征结果显示,所得化合物为 eremofortine C-1。结论对于以青风藤（Caulis sinomenii）作为宿主植物,分离纯化得到青风藤的内生真菌的其它成分以及 eremofortine C-1的生物活性,均有待进一步深入研究。     

水线草的化学成分

采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、重结晶等方法对水线草的化学成分进行了分离和纯化,并根据其理化性质和波谱数据鉴定了化合物的结构,结果显示,从水线草中可分离得到7个化合物,分别鉴定为：5,6,7,4’-四甲氧基黄酮（I）,7-羟基-5,6,4’-三甲氧基黄酮（Ⅱ）,3’,4’,5,6,7-五甲氧基黄酮（Ⅲ）,5,7,4’-三羟基-6-甲氧基黄酮（IV）,5,4’-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮（V）,α-香树精（Ⅵ）,β-谷甾醇（Ⅶ）,这些化合物是首次从该种植物中分离得到的．     

马齿苋化学成分研究

利用硅胶柱色谱和HPLC对马齿苋全草的正已烷萃取物进行分离纯化,经理化性质和波谱数据分析进行结构鉴定,得到6个单体化合物,分别鉴定为：β-谷甾醇（1）、亚油酸三甘油酯（2）、黑麦草素（3）、正二十六烷醇（4）、α－棕榈酸单甘油酯（5）、β-谷甾醇葡萄糖苷（6）。其中化合物3为首次从该植物中分离得到。     

贵州中草药三颗针化学成分研究

研究黔产三颗针（Berberis sargentiana Schneid）地上茎干部分的化学成分。采用硅胶等色谱方法进行分离、纯化,通过理化性质及波谱方法鉴定其化学结构。从三颗针95％乙醇提取物的乙酸乙酯部分分离得到10个化合物,分别为：β-谷甾醇（1）,小檗碱（2）,stigmast-9（11）-en-3-ol（3）,胡萝卜苷（4）,表木栓醇（5）,蔗糖（6）,槲皮素（7）,药根碱（8）,巴马汀（9）,蒲公英萜醇（10）．化合物3—7,10是首次从该植物中分离得到。     

杜虹花的化学成分研究

目的：研究紫珠属植物杜虹花（Callicarpa formosana Rolfe）的化学成分。方法：采用多种分离方法（CC,Sephadex LH-20,MPLC等）对杜虹花中化学成分进行分离以及运用波谱学技术（1DNMR、2DNMR、UV等）对所分离得到的化合物进行结构解析。结果：从杜虹花地上部分的乙醇提取物中分离鉴定了6个黄酮类化合物：apigenin7-O-β-neohesperidoside（Ⅰ）、salvigenin（Ⅱ）、lu-teolin（Ⅲ）、ladanein（Ⅳ）、rupatorin（Ⅴ）、apigenin（Ⅵ）。结论：化合物I,IV,V均为首次从该植物中分离得到。     

南方红豆杉内生菌及紫杉烷类产物的初步鉴定

从南方红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒｍａｉｒｅｉ）的主干和侧枝树皮及皮下部分,分离、筛选得到９１个纯化的微生物菌株．经过摇瓶培养和静止培养,再用二氯甲烷萃取抽提,抽提产物经以ｔａｘｏｌ、ｂａｃｃａｔｉｎⅢ和ｃｅｐｈａｌｏｍａｎｎｉｎｅ为标准对照的薄层层析分析,表明其中６个菌株能分泌紫杉烷类的化合物．分类鉴定的初步结果为头孢霉属、轮柄梳霉属和无孢菌群等