免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体

报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1％BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒（TMV）杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Westernblot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Westernblot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。     

金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶

报道了用金属亲和层析法分离纯化酵母细胞中醇脱氢酶(ADH).以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,乙二胺为螯合配基,制备了金属螯合亲和吸附剂.通过溶胀法从酵母细胞中抽提胞内酶,粗抽提液再经过硫酸铵盐析以及亲和柱层析.收得率为16.9%,纯化倍数达11.5.     

单克隆抗体亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗体的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱纯化得到ＩｇＧ纯品,分子量为１５０ｋＤ（重链５５ｋＤ,轻链２０ｋＤ）,与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗－体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。尿激酶粗品经单抗－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化后,所得尿激酶制品比活为９×１０－４～１．７×１０－３ｍｏｌ／ｓ·ｍｇ－１,纯化倍数为１５～３０倍,酶活性回收率在５０％以上。     

免疫亲和层析纯化兔抗人IgG

用人IgG-Sepharose 4B亲和柱,3mol/L氯化镁洗脱,一步纯化免抗人IgG血清,获得了SDS-PAGE电泳纯,免疫双扩散法效价达1/256,收率62.6%;用8mol/L脲洗脱,效价为1/128,收率34.1%.与硫酸铵多步沉淀法比较,纯度和效价大大提高,为获得高度特异、高亲和力兔抗人IgG提供了一条简便途径.     

兔抗Red蛋白抗血清的纯化及MC3T3细胞中Red蛋白表达时相的分析

为了纯化兔抗Red蛋白的3种多克隆抗体,并用其研究Red蛋白在真核细胞中的表达时相,首先于30℃培养了不含H的基因的空载体（pDH2）大肠菌,经彻底裂菌后用丙酮沉淀仝菌蛋白,用其在不同时间吸附3种待纯化的Red抗体,然后用间接ELISA法及Western-blot法检测r3种抗体的效价和特异性。最后州纯化后的3种Red抗体检测三顺反子表达载体pCMV-glblx的3种蛋白表达产物在MC3T3细胞中的表达时相。EUSA及Western-blot检测结果表明：3种抗血清经纯化后特异性好且效价没有受到影响,随后用纯化的抗体成功地研究了Red基因在真核细胞中的表达时相,此结果为Red重组系统在真核生物基因功能的研究中提供了必要的条件。     

一步法免疫亲和层析纯化重组人肿瘤坏死因子

提出一种简便的免疫亲和层析方法，有效地分离纯化重组人肿瘤坏死因子（ｒＨＴＮＦ），此法不需预先分离纯化单克隆抗体．用交联刘ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｂｅｒｉｍｉｄａｔｅ使抗ＴＮＦ的单克隆重抗体和ｐｒｏｔｅｉｎＡ—ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ共价结合，成为稳定的免疫基质，制备免疫亲和层析柱，将重组ＴＮＦ粗制品一步纯化为均一组份．     

Con A亲和层析法在纯化糖蛋白中的应用

近年来,糖蛋白的结构分析作为其深入研究的关键手段,正越来越受关注。亲和层析法是蛋白质分离纯化的重要途径,在富集目标物中承担着不可或缺的角色。本文概述了外源凝集素Con A为配基的亲和层析在糖蛋白纯化中的应用。     

Heparin-Argarose亲和层析法分离人甲状腺肿瘤组织中的bFGFs

本文介绍了甲状腺肿瘤组织中碱性纤维母细胞生长因子(basis Fibroblast Growth Factors.bFGFs)的提取过程和分子量鉴定。研究表明:bFGFs对肝素具有强的亲和力,组织匀浆通过Heparin-Argarose亲和层析柱后,用2.0mol/L的NaCl即可洗脱下来,收集其亲和峰值的洗脱组分,经三氯醋酸沉淀后即可得到bFGFs,经Western-blot方法分析其分子量有三种,分别为14KD、17KD、18KD。     

RBBP10蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及乳腺癌中的免疫组织化学研究

在E．coli M15中表达RBBP10蛋白,经纯化后制备兔抗人RBBP10多克隆抗体,以免疫组织化学法检测RBBP10在15例人乳腺癌组织、5例乳腺小叶增生组织及2例正常乳腺组织中的表达情况结果显示：乳腺癌组织中,癌巢部分呈深棕色,提示RBBP10高表达,癌旁组织未着色;在乳腺增生组织中RBBP10在增生的乳腺上皮细胞中有低水平表达,而在正常乳腺组织中没有检测到RBBP10表达;检测发现RBBP10蛋白弥散分布于乳腺腺上皮细胞．研究结果提示RBBP10可能在乳腺癌发生和乳腺小叶增生中起一定作用．     

基因工程血管抑素3A蛋白的分离纯化

在8mol／mL尿素溶液中,以二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,对基因工程血管抑素3A包涵体进行溶解实验。结果发现：1．5h后溶解的上清液蛋白浓度达26．2mg／mL。SDS-PAGE电泳扫描结果显示,3A蛋白经过Sephadex G75分离后PAGE电泳纯达到100％,该步收率达85．82％,相对分子质量为10ku。采用分步稀释法对其进行复性,所获复性3A蛋白经MTT法检测表明：3A蛋白浓度为0．1μg／mL时,对内皮细胞的生长抑制率为93．4％。     

联苯胺亲和层析纯化尿激酶

利用甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇甲基丙烯酸酯经悬浮聚合反应合成亲水性亲和载体骨架,骨架上的不环氧基与氨水反应,继之与丁二酸酐反应,最后与配基联苯胺偶联制备亲和载体,配基密度为５４μｍｏｌ／ｇ湿胶。亲和载体吸附激酶的最佳条件为ＰＨ４．６和２．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ;测定了吸附等温线,算得离常数Ｋｄ为３１６ＩＵ／ｍｌ,了大吸附量ｑｍ为２．３８３×１０＾４Ｕ／ｍＬ湿胶,洗脱条件为含０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ     

硼酸基亲和层析纯化5-甲基尿苷

利用聚乙烯系大孔聚合物与间氨基苯硼酸偶联制备亲和介质，配基密度为每克湿胶0．92mmol。最佳吸附条件为pH9．0和2．0mol/LNaCl；最佳洗脱条件为0．1mol/LHCl。测定了吸附等温线，算得解离常数Kd为0．155mol/L，最大吸附量qm为每克湿胶78．8mg。将含有胸腺嘧啶的5－甲基尿苷溶液进行亲和层析，5－甲基尿苷收率为56．3％。     

采用染料亲和层析的方法纯化卵泡刺激素

采用染料亲和层析、QAE离子交换层析等纯化步骤,从绝经期妇女尿促性腺激素(HMG)粗品中分离纯化获得高纯度卵泡刺激素(FSH)产品,其中FSH的生物活性达到268.1IU／mg,卵泡刺激素与黄体生长素(LH)的活性比值达到259,产品超过欧洲药典对高纯度卵泡刺激素的要求。此工艺FSH的活性回收率高达65％,而且分离纯化步骤少,简单易行,适合于大规模生产。     

亲和层析法制备人血浆白蛋白

低温乙醇法FIV沉淀中含有白蛋白96．00±13．52g／kg．15倍生理盐水磷酸缓冲液可溶解其中的87．44％(约83．94±11．119／kg)．通过DEAE Affi-Gel Blue 亲和层析及DEAESepharose FF 离子交换层析两步分离的纯化工艺，可从FIV溶解液中回收白蛋白48．18±1.118／kg FIV，回收率为57．40±1.94％．白蛋白溶液呈淡黄色，澄清透明，纯度为98．28±1．68％，单体含量97．00±2．19％，吸收度为0．028±0．006．白蛋白试制品能耐受57℃50h热稳定性试验．各检测指标显示，通过亲和层析综合阴离子交换层析回收纯化的白蛋白制品各主要生化指标符合质检要求．     

补骨脂胰蛋白酶抑制剂的亲和层析分离纯化和部分性质

本文介绍牛胰蛋白酶—对氨基苯砜乙基(ABSE)—Sepharose—4B的制备,及用此亲和吸附剂分离提纯补骨脂胰蛋白酶抑制剂的过程。用该方法对补骨脂胰蛋白酶抑制剂粗提物进行分离,可获得电泳单点纯样品。经SDS—PAGE电泳测定,该抑制剂的分子量为55000。等电聚焦电泳测定其等电点为pⅠ6.6,Chiff试剂染色为阴性。氨基酸组成分析結果表明含12种氨基酸,其中Gly、Glu含量最高。     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

鸡肝二氢叶酸还原酶的亲和层析提取及其抑制剂抑制活性的测定

利用氨甲喋呤-氨基己基-琼脂糖凝胶(Methotrexate-Aminohexyl-Sephamse,MTX-AH-Sepharose)亲和层析法,从鸡肝中得到了具有一定纯度(比活力为22.67 units/mg)的二氢叶酸还原酶(Dihydrofolate reductase,DHFR),通过紫外光度法测定了氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)和表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Epigallocatechin gallate,EGCG)对纯化所得的DHFR的抑制效果.     

β-NGF融合蛋白的表达及其三步层析纯化工艺

采用无血清培养基培养表达HIR-β-NGF融合蛋白的工程细胞株CHO,收集上清后,通过浓缩、过滤预处理,并采用亲和层析、阴离子交换层析和阳离子交换层析三步法工艺对融合蛋白进行纯化,最后用Fc ELISA、CHOP ELISA、Western-blot等方法对目的蛋白进行质量检测.实验结果表明:HIR-β-NGF融合蛋白相对分子质量约为190kDa;蛋白收率达47.0%;经纯化后杂质DNA含量可降低到2.3 ng/mg以下,CHOP蛋白降到2.3 ng/mg以下,Protein A蛋白降低到49.8 ng/mg;产物仅有3.51%发生聚集;免疫印迹证明具有生物活性.该纯化工艺产品收率高,纯度高,质量检验方法稳定可靠,为大规模生产该蛋白提供参考.