产M-海因降解酶系菌株的筛选及鉴定

从川西北高原温泉水样中分离得到一株具有M-海因水解酶系统的菌株MR1229,通过形态和生理生化特性研究,以及16S rDNA序列的测定和同源性比较分析,菌株MR1229初步被鉴定为Bacillus licheniformis.研究还表明菌株MR1229还具有与普通地衣芽孢杆菌不一般的生理生化特性:利用甘油产生二羟基丙酮;产糊精结晶;10%的NaCl条件下旺盛生长;12%的NaCl条件下微弱生长;61.5 ℃温度中微弱生长;pH5.0条件下微弱生长.     

一株胶原酶产生菌的筛选及系统发育分析

从所采集土样、水样中分离筛选到呈革兰氏染色阳性,柱状产芽孢编号为LY-t1的菌株.通过对此菌进行牛皮消化实验,并以Ⅰ型胶原为底物,测定该菌发酵培养液中胶原酶活性,确认此菌具有胶原酶活性.16S rDNA序列分析表明,分离菌株与Bacillus megaterium具有98%相似性.最后,用PHYLIP程序将该菌株与报道的相关胶原酶产生菌进行系统发育进化分析.     

一株土壤源高产植酸酶芽孢杆菌的分离与鉴定

对河南省不同地点采集的45份土样,利用分离培养基对产植酸酶芽孢杆菌进行分离和纯化,采用钒钼酸铵法测定其酶活,结合菌落和显微形态、生理生化试验和16S rDNA序列鉴定其种属。鉴定结果表明:从分离的80余株菌中筛选获得一株有较大植酸酶酶活的菌株B.Ld2-C,植酸酶酶活为552 U/mL。经鉴定为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(B.sphaericus),能形成芽孢,而且该菌株能够耐受较强的酸、胆盐和高温,为研究其作为饲料添加剂菌种奠定了良好基础。     

转糖基β-半乳糖苷酶产生菌筛选和鉴定及酶催化生成低聚半乳糖

通过水解活性和转糖基活性筛选, 从实验室97株保存菌种中获得1株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,克隆并序列分析了该菌株16SrDNA基因片断,GenBank收录号为DQ267829. 综合其形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析结果, 将其鉴定为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2-37-4-1. 确定了该菌株β-半乳糖苷酶产酶培养基的碳源为乳糖1%,氮源为蛋白胨0.5%和酵母膏0.5%,培养条件为37℃摇床培养18?h;碳源实验证明,该菌株β 半乳糖苷酶产生为乳糖诱导型.利用薄层层析技术研究了pH值、乳糖底物浓度、反应温度和反应时间对该菌株β-半乳糖苷酶以乳糖为底物转糖基合成低聚半乳糖的影响, 确定最适反应条件为pH7.5、50mmol/L（磷酸缓冲液）配制的40%乳糖溶液, 55℃反应24h.转糖基反应产物高压液相色谱分析其组成为低聚半乳糖25.68%, 双糖（包括乳糖和转移二糖）33.02%, 葡萄糖26.37%和半乳糖14.92%.     

一株产纤维素酶细菌的分离鉴定及其酶学特性研究

 采用CMC平板筛选和刚果红染色等方法,从湖南科技大学校园腐烂木芙蓉根部土壤中分离1株产纤维素酶菌株CXB001,经生理生化测试、16S rDNA分子进化树分析,鉴定菌株为Bacillus velezensis。对该菌株的生物特性研究表明,其最适生长温度为37 ℃,在10~50 ℃,pH 5.0 ~11.0中能生长,在pH 6.0~9.0,34~40 ℃,1.5% ~3.5% NaCl 的培养条件下,最适产酶。CXB001所产纤维素酶最适反应温度为50 ℃,最适反应pH为5.0;在20 ℃、pH 5.0~ 7.0具有较好的稳定性。Co ²⁺对纤维素酶具有激活作用,Mg²⁺,Fe²⁺对纤维素酶具有抑制作用。     

一株海因酶产生菌形态特征与培养条件

报道了一株假单胞杆菌(Pseudomonas putida Yz-Ⅱ6)的形态特征及产海因酶的发酵条件．结果表明该菌为杆状，菌落圆形光滑，革兰氏染色阴性，单根极生鞭毛．该菌产海因酶最佳发酵条件为起始pH值7.0的YCG培养基，并用0.1％海因诱导，25℃摇床培养20h，酶活力可达到1.3U／mL菌液．     

一株拮抗芽孢杆菌的分离鉴定及其β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆

 植物真菌病害是影响农业生产的主要因素之一,连作栽培导致病害逐年加重,为获得能够抑制病原真菌的生防菌以解决真菌病害防治难题,通过平板对峙实验及分子鉴定、抑菌活性物质分析、葡聚糖酶基因克隆及分析,获得一株对多种植物病原真菌具有显著抑制作用的芽孢杆菌,菌株编号为L103。16S rDNA及看家基因序列分析表明,该菌株为巨大芽孢杆菌,羧甲基纤维素钠平板筛选及刚果红染色实验发现该菌具有很强的产纤维素酶(CMC酶)的能力,根据GenBank中巨大芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因(HM130670.1)序列设计引物,将扩增得到的1482bp大小的片段克隆到载体pMD18-T上,测序并通过GenBank数据库BLAST分析显示该序列与一株Bacillus sp. HB102的内切β-1,4-葡聚糖酶基因序列一致性达到95%,而与Bacillus subtilis的β-1,4-内切葡聚糖酶基因一致性为85%,进一步分析该菌株产生的抗病活性物质并对其进行改良将为该菌在今后的真菌病害防治应用中提供理论基础。     

一株短小芽孢杆菌的16S rDNA基因序列分析

从黄颡鱼中分离得到一株优势菌BP-1,经过形态观察、生理生化试验和16S rDNA基因序列分析,表明该菌为发酵型,能运动,革兰氏阳性杆菌.获得的16S rDNA基因序列长度为1478 bp,Gen Bank数据库中登录号为KP299290.该序列与GenBank数据库中多条短小芽孢杆菌16S rDNA基因序列相似性高达99%,系统进化树上与短小芽孢杆菌亲缘关系最近,从而判定菌株BP-1为短小芽孢杆菌.这为短小芽孢杆菌的鉴定和分类提供科学依据.     

一株碱性脱毛蛋白酶产生茵的筛选及系统发育分析

经过采集土样,分离、筛选得到一株产碱性蛋白酶的菌株,编号为A607．通过摇瓶发酵,对发酵上清液进行酶活测定和脱毛实验,证实所产生的酶具有蛋白酶水解活性和良好的脱毛能力,其酶活达到263．39／μkat·L^-1、比活力为1215．24／μkat·g^-1 16SrDNA序列分析表明,该菌株与Bacillus pumilus具有高达99％的相似性．用PHYLIP程序将该菌株与报道的相关碱性蛋白酶产生菌进行系统发育进化分析,发现菌株A607与Bacilluspumilus处于同一分支．     

一株碱性脱毛蛋白酶产生菌的筛选及系统发育分析

经过采集土样,分离、筛选得到一株产碱性蛋白酶的菌株,编号为A607.通过摇瓶发酵,对发酵上清液进行酶活测定和脱毛实验,证实所产生的酶具有蛋白酶水解活性和良好的脱毛能力,其酶活达到263.39μkat·L-1、比活力为1 215.24 μkat·g-1.16S rDNA序列分析表明,该菌株与Bacillus pumilus具有高达99%的相似性.用PHYLIP程序将该菌株与报道的相关碱性蛋白酶产生菌进行系统发育进化分析,发现菌株A607与Bacillus pumilus处于同一分支.     

高效降解羽毛角蛋白菌株的筛选与鉴定

以羽毛角蛋白作为唯一碳源和氮源,从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株高效降解羽毛角蛋白的菌株.通过对该菌株形态特征观察、生理生化实验测定、16S,rDNA序列分析和Biolog系统鉴定,初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),且命名为地衣芽孢杆菌F4.F4在50,℃条件下摇瓶发酵48,h,角蛋白酶活达到23,U/mL.该菌能够降解完整的天然羽毛,具有开发应用前景.     

病死猪堆肥降氨除臭微生物的筛选与鉴定

为了获取高效的病死猪堆肥降氨除臭微生物菌株,利用氨气选择性培养基定性初筛和硼酸吸收法复筛相结合的方法,分离筛选高效降氨微生物,并对其菌种分类进行了鉴定。从猪粪、土壤、病死猪堆肥等样品中共分离筛选获得7株对NH3具有降解效果的菌株,分别编号为YX-1、YX-2、YX-3、YX-4、YX-6、YX-7、YX-8。在30 d模拟堆肥周期中,菌株YX-3对氨气的去除效率最高,达56. 9%。根据形态学特征、生理生化特征及16S r DNA序列分析,该菌鉴定为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensi)。通过单因素试验,确定菌株YX-3降氨除臭的最佳温度为30～40℃,最佳接种量为8%。菌株YX-3对H2S的去除能力显著低于对氨气的去除能力,说明该菌去除臭气成分的功能专一。筛选获得的菌株YX-3丰富了堆肥除臭微生物资源库,在农业环保领域具有潜在的应用价值。     

糖胺聚糖类物质产生菌的筛选及其鉴定

利用糖胺聚糖能与氯代十六烷基吡啶反应产生白色混浊的性质,从不同来源的菌种中,筛得4株菌种,再通过琼脂糖凝胶电泳,筛选得到一株糖胺聚糖产生菌GS36．根据形态及生理生化试验鉴定,初步判定为坚实芽孢杆菌．其发酵产物经纯化后通过红外光谱测定初步鉴定为硫酸软骨素．     

一株高产丁二酮菌株的筛选与鉴定

以湖南省湘西地区土家腊肉中分离的41株细菌为出发菌,采用平板显色法和邻苯二胺比色法筛选高产丁二酮的微生物菌种.通过菌落形态观察、生理生化特征测定和基于16S rRNA基因序列分析,对分离菌株进行鉴定.结果表明,7株细菌能产生较高含量的丁二酮,其中菌株BCL-8产丁二酮量最高,在葡萄糖蛋白胨水培养基中发酵20 h,丁二酮质量浓度达68.9 mg/L,该菌经鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）.菌株BCL-8是一株优良的产丁二酮的微生物种质资源.     

一株降胆固醇作用乳酸菌KF5的分离与鉴定

利用邻苯二甲醛法,从源于西藏Kefir粒的56株乳酸菌和实验室保存的9株乳酸菌中,筛选得到了一株降胆固醇效果明显的乳酸菌KF5.经生理生化实验及分子遗传学鉴定,该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).为了能够进一步研究KF5的降胆固醇功能,对其进行了生物学特性的考察.结果表明,KF5具有较好的耐酸性以及一定的胆盐耐受力.     

一株环己酮高效降解菌株的筛选及鉴定

自岳阳巴陵石化公司环己酮生产车间总出水口污泥中分离得到一株能快速降解环己酮的菌株,菌号为JDM-3-11.通过形态观察、生理生化特征检测和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析,初步鉴定其为赤红球菌（Rhodococcus ruber）的一个菌株.当环己酮的质量浓度为2 000 mg/L时,在温度为30 ℃,转速为150 r/min,pH值为7的条件下,70 h内该菌株对环己酮的降解率达到94.79%.     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化

以橄榄油为唯一碳源,采用平板变色圈法,从土壤中筛选到1株脂肪酶高产菌XYU-6,经生理生化试验鉴定及16S rDNA序列分析,XYU-6被鉴定为洋葱假单胞菌(Burkholderia cepacia).设计单因素试验,对其产酶条件进行优化,优化后的培养条件为:葡萄糖1.00;,蛋白胨2.00;,豆油1.00;,KH2 PO40.35;,K2 HPO4 0.15;,MgSO40.05;,初始pH值为7.0,培养温度30℃,培养48 h,酶活可达24.1U·mL-1,是优化前的1.65倍.     

石油降解菌的筛选、鉴定及其菌剂制备的初步优化

从濮阳油田石油污染土壤中筛选出20个能以原油为唯一碳源生长的菌株,对其中的优势菌KF-2进行形态学、生理生化实验及16SrRNA序列分析,鉴定为木糖氧化产碱杆菌.以KF-2为实验菌株,采用单因素和正交实验结合的方法,在150mm培养皿中研究载体种类和装量、pH、料水比、培养温度、培养时间和烘干温度对菌剂活菌数的影响,得出菌剂制备的最佳条件为:麦麸为载体、pH为9、料水比1∶3.6、10g麦麸、25℃培养3d和30℃烘干,菌剂中活菌数可达7.24×1010 CFU/g.     

产普鲁兰降解酶菌株的分离筛选及酶学特性的研究

普鲁兰降解酶(pullulan degrading enzymes)能够专一水解普鲁兰多糖α-1,6-糖苷键以及特定位置的α-1,4-糖苷键,在工业、食品业、医疗保健等行业中具有重要的应用意义.本研究采用唯一碳源法从稻田土样中培养筛选到21株产普鲁兰降解酶的菌株.对菌株A1的鉴定及其产生的普鲁兰降解酶的分析表明,该菌株为气单胞菌属,其产生的酶属于Ⅰ型普鲁兰酶(Type I pullulanase,EC 3.2.1.41),专一水解普鲁兰多糖α-1,6-糖苷键.该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,具有良好的温度稳定性和适应性;同时在pH为4.0时仍然保留50%的酶活.进一步对A1菌株产酶的发酵条件(pH、温度、时间)进行了优化,摇瓶中A1分泌表达Ⅰ型普鲁兰酶的水平达到21.2 U/mL.根据已报道的气单胞菌属普鲁兰酶基因的保守序列设计引物,克隆获得了4 053 bp的A1普鲁兰酶基因pluA1全长序列,编码1351个氨基酸.本研究结果为该酶的开发应用奠定了基础.     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选和鉴定

从国内各地采取土样分离筛选产耐有机溶剂脂肪酶的新菌株,通过形态和生理生化特征以及系统进化树分析,筛选到的新菌株命名为Pseudomonas aeruginosa CS-2.来自Pseudomonas aeruginosa CS-2的粗脂肪酶液在乙腈中酶活提高,在苯、氯仿、正己烷、石油醚和异辛烷中表现出较高的稳定性.