具有GPx和SOD双酶活性含硒76肽的制备及其穿膜效应

根据模块酶原理设计一种嵌有穿膜结构域序列并具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)双酶活性的含硒76肽(Se-CuZn-76P),利用半胱氨酸缺陷表达法在单一蛋白生产(SPP)系统表达该肽,并鉴定其穿膜效应.实验结果表明:该方法可成功表达纯度较高的Se-CuZn-76P,并且每毫克蛋白表现出109μmol/min的GPx活力和1 218μmol/min的SOD活力;在Se-CuZn-76P存在的环境中培养肝L02细胞一段时间后,细胞内的GPx和SOD活力分别升高1.65和4.12倍,且Se-CuZn-76P可顺利进入L02细胞.     

饲料添加剂硒和谷胱甘肽对微囊藻毒素胁迫下罗非鱼肝脏去毒相关基因诱导表达的影响

为从分子水平探讨饲料添加剂硒(Se)和谷胱甘肽(GSH)对淡水养殖鱼类肝脏微囊藻毒素胁迫下去毒分子机理的影响,实验杂交罗非鱼一组喂食含0.15 mg/kg Se的富硒酵母粉饲料,一组喂食含普通酵母粉的饲料,喂食一个月以上;实验尼罗罗非鱼一组喂食含1 g/kg GSH的饲料,一组喂食普通饲料,两组均饱食10 d.所有实验组再均分两组,一组腹腔注射磷酸缓冲液(PBS),一组按体质量注射腹腔注射50μg/kg微囊藻毒素-LR(MC-LR),24 h后分离肝脏组织.以β-肌动蛋白作为外参照,采用半定量RT-PCR方法研究Se和GSH分别对罗非鱼肝脏去毒相关基因转录水平的诱导改变.结果表明,未喂食Se的实验组,杂交罗非鱼肝脏alpho-可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGSTA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)基因mRNA表达水平在腹腔注射50μg/kg MC-LR 24 h后,均较PBS组有诱导趋势;Se+MC-LR组sGSTA和GPX基因mRNA表达水平,均较Se+PBS组略低,可能与添加剂的低剂量添加相关.喂食GSH的实验组,尼罗罗非鱼腹腔注射MC-LR组,肝脏sGSTA基因mRNA表达水平较PBS组有诱导趋势;Se+MC-LR组GPX基因mRNA表达水平,较Se+PBS组有升高趋势,而sGSTA和rho-可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGSTR)基因mRNA表达水平则轻微降低.本实验首次从基因表达水平比较研究了Se和GSH对罗非鱼微囊藻毒素压力情况下,肝脏去毒酶基因表达的影响变化,为Se和GSH饲料添加剂在鱼类饲料中的合理添加提供分子水平的理论依据.     

Selenium-dependent glutathione peroxidasesA highlight of the role of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase in protection against oxidative damage

Since the discovery that selenium is an integral component of the active site of the mammalian glutathione peroxidase, four members of the glutathione peroxidase family have been characterised: classical cellular glutathione peroxidase, gastrointestinal glutathione peroxidase; plasma glutathione peroxidase and phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase ( PHGPx) . They are products of different genes and have different specificities on hydrogen peroxide and lipid hydroperoxides, the latter are generated by free radicals and can damage cell membranes and disrupt cellular functions. Interestingly, PHGPx is not only active on phospholipid hydroperoxide, but also active on thymine hydroperoxide (a model compound for DNA damage) and protein hydroperoxides. This review highlights the role of PHGPx in protection against peroxidative damage of lipids, protein and DNA.     

螺旋藻(Spirulina platensis)生物转化富硒形态对自由基的清除作用

目的:比较研究和评价富硒螺旋藻(Se SP)生物转化产生的主要富硒活性形式在体外清除自由基的活性.方法:利用富硒培养技术制备Se SP,从Se SP中分级提取纯化硒总蛋白(Se SP-TP)、硒藻胆蛋白复合体(Se SPPB)、硒藻蓝蛋白(Se SP-PC)、硒多糖(Se SP-PS)和纳米红硒(Nano-Se);电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)测定硒含量;超氧阴离子(·O2)和羟基自由基(·OH)化学发光体系检测自由基清除率,Reed-Muench算法计算半数有效浓度(EC50).结果:Se SP-TP、Se SP-PB和Se SP-PC与不含硒相同形态对自由基的清除作用均显著提高(P0.05),对·O2和·OH清除作用的EC50明显降低(P0.05),Se SP中Se SP-PB在体外对自由基的清除活性最高,其中Se SP-PC可能起主要作用;Se SP-PS硒的质量分数低,其中硒对自由基清除的增强效应尚不明确;微藻转化的NanoSe也具有较强的自由基清除活性.结论:Se SP生物转化富硒活性形式对自由基清除的增强效应与活性硒元素的掺入有关,藻体转化生成的富硒蛋白质产生了协同增效作用明显,生物转化纳米硒作为一种新型活性硒形态值得深入研究.     

MET对油菜幼苗活性氧代谢的影响

试验采用质量比值分别为１００×１０－６，１５０×１０－６，２００×１０－６的ＭＥＴ喷施二叶一心期油菜幼苗，于第７，１４，２１（或２３）和４５天随机取功能叶．以比色法测定ＰＯＤ活性，滴定法测ＣＡＴ活性及ＧＳＨ含量，抗坏血酸过氧化物酶活性采用紫外吸收法测定．结果表明，喷施多效哇的油菜幼苗叶中ＰＯＤ和抗坏血酸过氧化物酶活性增高，ＣＡＴ活性降低，ＧＳＨ含量增加．从而说明了ＭＥＴ提高作物的抗逆性，可能是由于提高某些保护酶活性及增加非酶类自由基净化剂含量所致．     

不同还原性巯基氨基酸对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察三种还原性巯基氨基酸对人血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),在培养液中分别加入三种不同浓度的还原性巯基氨基酸(Hcy,Cys,GSH)对VSMCs进行刺激,24h后同MTT比色法测定细胞的活力,<'3>H-TdR测定细胞的增殖率.结果:随浓度增加.Hcy和Cys明显促进VSMCs增殖,Hcy的作用略强于Cys;GSH只有在极高浓度时(1000umol/L)才显著促进VSMCs增殖.结论:极高浓度的Hcy、Cys、GSH均可促进VSMCs增殖.     

硒对慢性氟中毒致雄性大鼠生殖毒性的拮抗作用

为了探讨硒对氟致睾丸损伤的拮抗作用,以雄性SD大鼠为实验动物,在饮水中加氟化钠(50 mg/L)、亚硒酸钠(分别为0.375,0.750和1.500 mg/L),单纯喂养或硒氟两两组合喂养6个月,断头处死,用试剂盒测大鼠睾丸组织中乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)及三磷酸腺苷酶(ATPase)的活性.结果发现:1)大鼠体质量:氟加低硒组、氟加中硒组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).2)LDH活性:染氟组低于对照组,中硒组、高硒组、氟加高硒组高于染氟组(P<0.05);AKP活性:染氟组低于对照组,而氟加中硒组高于对照组(P<0.05);ACP活性:染氟组高于对照组(P<0.05).3)Na+,K+-ATPase活性:高硒组及氟加高硒组较对照组降低;Ca2+-ATPase活性:中硒组和氟加高硒组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).研究表明硒可以对慢性氟中毒导致的雄性生殖毒性产生拮抗作用,不同酶对拮抗作用的敏感性不同.     

谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建

通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .0 8mmol/L IPTG于 2 8℃诱导工程菌 E.coli BL2 1( DE3) ( p Trc99A/gsh I- gsh II) ,GSH- I、GSH- II蛋白比为 4.5∶ 1 ( m∶ m)时谷胱甘肽合成能力最高 ,达到每克湿菌体 8.5 mg。通过构建单顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I、p Trc99A/gsh II测定GSH- I与 GSH- II蛋白的最适配比 ,结果表明 :在 GSH- I、GSH- II蛋白总量恒定的情况下 ,要提高谷胱甘肽产率 ,两者比例以 3∶ 1～ 6∶ 1为宜     

GPX3参与了H2O2对保卫细胞质膜钾通道的调控

通过表皮条生物分析、失水率测定及膜片钳实验研究谷氨酸过氧化物酶3(GPX3)能够调节保卫细胞质膜钾通道活性,并因此来介导H2O2诱导的拟南芥气孔关闭过程.与野生型Col-0相比,gpx3缺失突变在气孔开度和细胞失水方面均有较大差异.全细胞膜片钳模式下,1mmol/L的H2O2处理使野生型保卫细胞质膜钾离子通道外向电流从50pA左右激增到240pA左右,而gpx3的电流则变化不大.单通道电流的进一步分析表明gpx3不能像野生型一样对1mmol/L的H2O2处理产生明显反应,野生型与突变体的单通道电流差距高达10倍以上.据此推断GPX3是通过特异地调节外向钾通道来介导H2O2的信号传递.     

微囊藻毒素和脂多糖对鲢鱼和草鱼肝脏去毒相关基因活体诱导表达的影响

采用50μg·(kg体质量)-1的微囊藻毒素·LR(MC-LR)、2 mg·(kg体质量)-1的脂多糖(LPS)和50μg·(kg体质量)-1 MC-LR+2 mg·(kg体质量)-1 LPS分别活体腹腔注射鲢鱼、草鱼,采用实时荧光定量PCR方法测定MC-LR和LPS对鲢鱼、草鱼肝脏alpha-谷胱甘肽S-转移酶(GSTA)、rho-谷胱甘肽S-转移酶(GSTR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和解偶联蛋白2(UCP2)等去毒相关基因活体诱导表达的影响.结果表明,鲢鱼、草鱼GSTA和GSTR的不同诱导变化除与两种淡水鱼类对毒素的耐受性相关外,还与毒索剂量、诱导时间等因素相关.LPS对GSTA和GSTR基因组成型、诱导型的不同作用,可能与调制因子LPS对不同生态习性淡水鱼类肝脏GST基因表达水平的调制作用不同有关.UCP2与GPX也分别在抑制过量ROS发生方面与肝脏抗氧化胁迫等方面起重要作用.     

甲醛对运动大鼠脑组织的氧化损伤及刺五加保护作用的实验研究

目的：通过实验观察甲醛对运动大鼠脑组织抗氧化系统的影响及服用刺五加后的情况,探讨甲醛对运动大鼠的神经毒性及刺五加的保护作用.方法：采用人为模拟不同程度甲醛染毒环境进行动式染毒,甲醛剂量分别为0.8mg/m3,2.4mg/m3.每天染毒30min,每周6次,连续4周,刺五加的灌胃剂量为104.17mg/kg,测定运动大鼠脑组织的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）的活力和丙二醛（MDA）的含量.结果：染毒组与对照组相比,2.4mg/m3剂量染毒组大鼠脑组织CAT、GSH-PX、SOD活性明显低于对照组（P＜0.01）,MDA含量明显高于对照组（P＜0.01）.服药染毒运动组与染毒运动组相比,0.8mg/m3剂量染毒服药组大鼠脑组织CAT、GSH-PX、SOD活性明显高于染毒运动组（P＜0.01）,MDA含量明显低于染毒运动组（P＜0.01）.结论：甲醛可以降低染毒大鼠脑组织抗氧化酶的活性,造成脑组织氧化性损伤,而灌服中药刺五加可以有效缓解其毒性.     

天然矿泉水与纯净水抗过氧化作用的比较

将6周龄纯种BALB/C小鼠随机分为4组,一组为皮下注射生理盐水的非致衰对照组,另三个组为注射D-半乳糖的致衰模型组,它们分别饮用天然矿泉水,纯净水和自来水.4个月后,测定红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.本实验表明,天然矿泉水具有一定的抗过氧化作用.天然矿泉水组与自来水致衰对照组比较,GSH-Px活力变化不显著,而SOD活力明显提高( 7.1%).而纯净水组与天然矿泉水组比较,SOD活力降低了10.2%,GSH-Px活力降低15.5%,两项指标均有显著差异.值得注意的是,纯净水组与自来水致衰对照组相比较,其抗过氧化作用也有所减弱,纯净水组的SOD活力下降3.9%,GSH-Px活力更是显著地下降了18.5%.     

Moser定理条件参数判定的新形式

研究了动力系统中Moser定理条件.对其参量范围的确定,给出了一个较为直观的判定新形式,可方便地判定小球弹跳模型中混沌存在的参量范围.     

48例子痫分娩时机及方式探讨

将48例子痫分娩处理作一回顾性探讨，并对终止妊娠的方法和时间进行分析。认为终止妊娠的时间应不受抽搐和昏迷的影响，终止妊娠的最好方式是剖宫产。     

电视经济新闻鲜明生动方法初探

电视经济新闻要形象化,必须善于把抽象的数字具体化,将经济主体的活动故事化,善于运用细节和视觉冲击力,以达到将呆板的经济报道鲜活起来的目的。     

创新经营管理模式实现扭亏增盈目标

面对国有企业改革的重重困难与激烈的市场竞争，中铝山西分公司实行了经营责任制，阐述了该公司经营责任制的总体思路及奋斗目标，并提出了具体有效的措施与策略。     

强镇扩权：增强乡镇发展活力的有效途径

随着经济的高速发展,现有的乡镇政府管理体制面临僵硬性、离散性、弱能性等困境,尽管地方政府进行了很多有益的探讨和实践,但仍存在许多问题。为此,应通过深化公共财政制度改革,建立并完善相应的监督体系,发展非政府组织性质的农村经济合作组织,加大公共服务均等化等途径增强乡镇发展活力。     

著作权法中思想与表达二分法原则探析

思想与表达二分法是著作权法中的一个十分重要的原则。二分法为平衡公众接近信息的需要和报偿、鼓励作者创作的需要提供了一个基础。二分法不仅在著作权立法上得到了广泛认可，在司法实践中也具有重要的指导意义，其中特别表现为平衡作者或其他著作权人与广大作品使用者之间的利益。二分法原则在著作权法中的适用具有充分的正当性。     

A novel peptide,selected from phage display library of random peptides,can efficiently target into human breast cancer cell

To develop a targeting vector for breast cancer biotherapy, MDA-MB-231 cell, a human breast cancer cell line, was co-cultured with pC89 （9 aa） phage display library of random peptides. In multiple inde-pendent peptide-presenting phage screening trials, subtilisin was used as a protease to inactivate extra-cellular phages. The internalized phages were collected by cell lysising and amplified in E. coli XLI-Blue. Through five rounds of selection, the pepUde-presenting phages which could be internalized in MDA-MB-231 cells were isolated. A comparison was made between internalization capacities of peptide-presenting phages isolated from MDA-MB-231 cells and RGD-integrin binding phage by coculturing them with other human tumor cell lines and normal cells. The nucleoUde sequences of isolated peptide-presenting phages were then determined by DNA sequencing. To uncover whether phage coat protein or amino acid order was required for the character of the pepUde to MDA-MB-231 cells, three peptides were synthesized. They are CASPSGALRSC, ASPSGALRS and CGVIFDHSVPC （the shifted sequence of CASPSGALRSC）, and after coculturing them with different cell lines, their targeting capacities to MDA-MB-231 cells were detected. These data suggested that the internalization process was highly selective, and capable of capturing a specific peptide from parent peptide variants. Moreover, the targeting internalization event of pepUdes was an amino acid sequence dependent manner. The results demonstrated the feasibility of using phage display library of random peptides to develop new targeting system for intracellular delivery of macromolecules, and the peptide we obtained might be modified as a targeting vector for breast cancer gene therapy.