牛角膜皮皮45.4kd水溶性蛋白质在脊椎动物角膜中特异性 …

用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，制备了４５．４ｋｄ的水溶性牛角膜上皮特异性蛋白质，免疫家兔得到其抗体。利用免疫组化方法研究了此蛋白质在脊椎动物角膜中表达的普遍性。结果表明，此水溶性蛋白质在小白鼠、豚鼠、家兔、羊等哺乳动物和以鳖为代表的爬行动物角膜上皮细胞中呈阳性反应，而在鲤鱼、热带鱼、花背蟾蜍、鸡、北京雨燕等其他脊椎动物角膜中呈阴性反应。     

兔角膜上皮特异性水溶性蛋白质的电泳分析

分离兔角膜上皮和皮肤表皮，提取水溶性蛋白质，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ以及ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术对其组成进行分析研究，发现兔角膜上皮存在５种主要特异性水溶性蛋白质，其分子量和等电点分别为：Ｍｒ６８２００，ｐＩ７．５；Ｍｒ６１７００，ｐＩ５．１；Ｍｒ５１３００，ｐＩ７．６；Ｍｒ３６３００，ｐＩ８．９和Ｍｒ２５７００，ｐＩ５．７。     

动物角膜蛋白质组分种属差异的初步研究

本文用ＳＤＳ线性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析和比较了鱼类、两栖类，乌类及哺乳类共８种动物的角膜中蛋白质组分及数目的异同。结果表明：这些动物角膜中所含蛋白质组分约为：鱼１７种，蟾蜍２８种，鸡３４种，小鼠３２种，家兔３５种，羊３４种，牛３６种，猪３５种。若根据两种动物角膜中不同的蛋白质组分数与两种动物角膜中蛋白质组分总数之比为蛋白质组分差异距离的定义。则牛和羊的蛋白质组分差异距离最近，小鼠和家兔的次     

花背蟾蜍角膜和皮肤蛋白质的SDS-PAGE分析

本文用梯度SDS-PAGE方法,分析和比较了花背蟾蜍蝌蚪和成体皮肤及成体角膜中蛋白质组分的异同,结果表明成体角膜约有33种蛋白质组分;成体皮肤约有27种;蝌蚪皮肤约24种.蝌蚪皮肤与成体皮肤蛋白质组分数量和分布趋势相似,但成体皮肤的组分比蝌蚪的多,一些蛋白质组分的相对含量与蝌蚪的有差别.角膜与前两者相比差别明显,一是蛋白质组分数较多,其次分布趋势差异较大.     

基于误差传递规律的手机比色法测定坚果中水溶性蛋白质

考马斯亮蓝-G250和牛血清蛋白反应生成蓝色络合物,蛋白质浓度与产物的颜色深度存在对应关系.在误差传递规律基础上利用手机比色法,考察了光照和手机类型等影响取样的外在因素,建立了蛋白质含量测定的新方法.实验表明,在最优测定条件下,间接测量值XB与蛋白质浓度在1～7 μg/mL范围内存在明显的线性关系,标准样品测定的相对标准偏差为3.47%(n＝8),检出限为0.67 μg/mL.对花生、葵花籽、南瓜子等坚果的水溶性蛋白质进行加标回收实验,回收率在100.3%～107.5%之间,该方法简便快捷、灵敏度高、回收率好,可用于坚果中水溶性蛋白质含量的测定.     

兔角膜真空冷冻干燥工艺及冻干角膜活性检测

利用真空冷冻干燥法对家兔角膜进行冻干贮藏·给出了真空冷冻干燥角膜工艺,主要是对角膜进行四步法冷平衡,两步法速率降温,采用变幅值、变周期循环压力法实现干燥室内压力的调节·对按该工艺冻干的兔角膜进行物理法检测,均符合检测标准;进行台盼蓝、茜素红联合染色法检测,内皮细胞呈六角形镶嵌排列;进行透射电镜、扫描电镜检测,细胞微观结构完好·检测结果表明冻干角膜具有活性,按照此工艺能够冻干出适合贮藏、再植的活性角膜·对真空冷冻干燥法贮藏的兔角膜进行了移植实验,手术成功,术后植片透明·实验结果表明冻干法保存的角膜可以用于角膜移植·     

依文思蓝-蛋白质体系的共振瑞利散射光谱及其分析应用

基于蛋白质对依文思蓝共振瑞利散射的增强作用,建立了一种测定水溶性蛋白质的新方法.在酸性BR缓冲溶液中,依文思蓝在365 nm处的共振光散射增强与蛋白质浓度呈线性关系.对人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白测定的检出限均低于15 ng/mL.该方法快速、简便、灵敏、稳定、选择性好,用于人血清中总蛋白质含量的测定,结果满意.     

理冲生髓饮中多糖及水溶性蛋白质的质量分数测定

建立理冲生髓饮中多糖及水溶性蛋白质质量分数测定的方法.测定理冲生髓饮多糖对葡萄糖的换算因子,利用苯酚-硫酸法测定多糖的质量分数;采用考马斯亮蓝G-250染色法测定理冲生髓饮中可溶性蛋白质的质量分数.多糖标准曲线方程为A=12.839 C-0.008 5(r=0.999 3),蛋白质标准曲线方程为A=1.271 C-0.033 1(r=0.999 2),两者分别在0.01~0.1、0.1~1.0 g/L有良好的线性关系.测得理冲生髓饮中多糖质量分数为8.53%,水溶性蛋白质质量分数为0.35%.该两种方法操作简便、灵敏、快速、准确,重复性好,可用于理冲生髓饮中多糖、水溶性蛋白质的质量分数测定.     

斑叉牙虾虎鱼(Apocryptodon punctatus)角膜上皮细胞扫描电镜形态观测

脊椎动物角膜上皮细胞在视觉成像中起着重要作用，针对鱼类角膜开展研究，能进一步揭示鱼类对不同水深环境，以及由水及陆进化过程中的视觉适应模式.笔者通过扫描电镜观察斑叉牙虾虎鱼(Apocryptodon punctatus)角膜上皮细胞，并统计密度、记录细胞类型及微结构，探究鱼类在进化过程中角膜的适应性进化模式.研究发现，斑叉牙虾虎鱼角膜上皮细胞是微嵴型细胞，角膜上皮细胞密度与微嵴间距之间无显著相关关系(p>0.05).角膜细胞密度整体平均值为(18 106±1 719)mm^-2,角膜细胞的微嵴宽度平均值为(240±9)nm,角膜细胞的微嵴间距宽度平均值为(251±34)nm.结果表明：其角膜的演化出现了特异性的模式.该物种由于对水环境的依赖程度在背眼虾虎鱼亚科中较大，角膜上皮细胞仍保留了适应水生环境的特征.细胞密度和微嵴间距之间可能具有相互制约的关系.     

角膜活性评估方法综述

角膜内皮控制着角膜的水合作用与厚度,从而决定着角膜的透明度,所以无论哪一种角膜保存方法,都必须保证角膜内皮有较高的活性或细胞存活率.几十年来,随着角膜保存方法的发展,角膜内皮活性评估方法得到了较大的重视,并出现了许多方法,如简单实用的联合染色法等.本文对这些方法进行了较为全面的报道和简要的评论.     

基于AhsA蛋白的嗜水气单胞菌特异性抗体的制备与鉴定

选取嗜水气单胞菌表面特异性抗原蛋白AhsA,构建了pET-28a(+)-AhsA表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,利用Ni-NTA亲和层析、凝胶过滤层析等蛋白纯化方法进行纯化。重组蛋白表达效果较好,浓度可达10 mg·mL^-1,纯度可达90%以上,符合制备多克隆抗体的免疫原标准。利用Western Blot技术将AhsA抗体特定识别免疫原蛋白,结果表明该抗体能够特异性识别免疫原蛋白AhsA,而对于牛血清蛋白却不能发生免疫应答,表明该抗体具有一定的特异性且AhsA蛋白具有很好的免疫原性。同时通过检测验证了AhsA蛋白抗体能够特异性检测嗜水气单胞菌,将为水产品质量控制及临床检测嗜水气单胞菌可提供新的技术。     

拟南芥PP2A B′调节亚基β亚型抗体的制备及鉴定

拟南芥中,蛋白磷酸酶2A(PP2A)B′调节亚基有9个亚型,其中α亚型和β亚型是油菜素内酯(BR)信号通路的正调节子,它们能使转录因子BZR1脱磷酸化.选择β亚型特异的一段多肽P109,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化了连有HIS标签和GST标签的融合蛋白HIS-P109和GST-P109.以HIS-P109作为抗原,免疫新西兰兔,获得抗体,然后用GST-P109对抗体进行了亲和纯化.利用此纯化的抗体在不同的拟南芥材料中免疫印迹检测β亚型蛋白的表达,证实制备的抗体能与拟南芥PP2AB′调节亚基β亚型特异性反应,为深入研究PP2A在BR信号转导途径中的功能提供了有力工具.     

对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP41的研究

VP41蛋白质是对虾白斑综合症病毒的一种结构蛋白,该蛋白质由病毒基因组上的wsv242开放阅读框(ORF)所编码,分子量为41 ku.根据vp41基因的序列,通过PCR扩增获得了该全长基因,将其克隆在载体pET-His上,以E.coli BL21为宿主菌,成功表达并纯化了含His标记的目的蛋白VP41,并制备了特异性鼠抗血清.当纯化的病毒粒子经去污剂处理后,VP41蛋白质被发现完全存在于病毒WSSV囊膜部分,Western blot杂交实验也证实该结果,表明VP41蛋白质是该病毒的一个囊膜蛋白质.通过Far-Western方法还发现VP41具有蛋白聚合作用.     

对虾白斑综合征病毒非结构蛋白ICP11的研究

白斑综合征病毒(WSSV)是一种对虾养殖业中危险极大的传染性病原体,它是一种双链环状DNA杆状型病毒.ICP11是WSSV感染宿主后产生的一种高丰度表达蛋白,根据icp11基因的序列,通过PCR扩增获得了该全长基因,将其克隆在载体pET-His上,以E.coli BL21为宿主菌,成功表达并纯化了含His标记的目的蛋白,并制备了特异性鼠抗血清.Western blot杂交实验结果显示,该蛋白不存在于纯化的病毒粒子的结构蛋白中,只存在于病毒感染的虾中肠组织的总蛋白中.这说明ICP11是WSSV的一种非结构蛋白.通过Far-western blot杂交分析,发现重组表达的ICP11会发生自身蛋白的聚合作用.凝胶过滤色谱层析法进一步证实ICP11蛋白可以聚合为二聚体.     

天花粉蛋白基因的克隆、表达和活性鉴定

用PCR（Polymerase Chain Reaction)扩增出天芬粉蛋白（Trichosanthin,TCS)基因全长序列，插入表达载体，经双酶切鉴定及测序分析，表明阅读框正确，表达His-TCS活性融合蛋白并纯化天花粉蛋白，鉴定出其具有RNA N－糖苷酶活性和抗原抗体结合活性。     

用于融合蛋白表达的检测与纯化的表位附加标记技术

简要介绍了表位附加标记的概念、应用、优缺点及其发展前景，并以c-myc标记肽为例，简述如何构建用于融合蛋白表达的植物表达载体，及如何利用标记肽及其特异性抗体表达并纯化融合蛋白质．     

斑马鱼Nfatc3基因多克隆抗体的制备及检测

为了在斑马鱼模型中更深入地研究Nfatc3蛋白在心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增斑马鱼Nfatc3基因的部分编码区并插入pET-28a表达载体中,之后将重组质粒转入大肠杆菌（E.coli）通过IPTG诱导表达His-Nfatc3融合蛋白,对该融合蛋白采用Ni-IDA凝胶柱层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,并用western blotting对抗体进行分析.结果表明获得了高效价的特异性兔抗Nfatc3多克隆抗体.这为Nfatc3功能的进一步研究奠定了基础.     

毕赤酵母表达Neuritin蛋白的纯化及鉴定

为研究重组Neuritin的毕赤酵母表达蛋白的纯化方法及鉴定。应用甲醇诱导GSll5/pPIC9K-Neuritin毕赤酵母工程菌株表达Neuritin蛋白,采用硫酸铵盐析、His-Trap Crud亲和层析等方法,对该表达产物进行纯化。纯化后的蛋白进行SDS-PAGE、western-blot和生物质谱鉴定。结果显示,SDS-PAGE分析显示经甲醇诱导后表达的蛋白获得了与Neuritin分子量理论值相符的条带,western-blot分析它能够与抗表位抗体特异反应,进一步生物质谱分析证实该纯化重组蛋白为Neuritin重组蛋白。由此可知,本研究建立了一种有效的纯化方法,获得高纯度的Neuritin重组蛋白,为大量制备Neuritin纯化蛋白,开展其功能和机制研究奠定基础。