H5N1型禽流感病毒HA基因在烟草中的表达

禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒，发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一．本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草．共获得38株潮霉素抗性植株，经PCR和Southern-blotting检测，目的基因已整合到转基因植株的基因组中．Western-dotting检测结果表明，目的基因在转基因烟草中得到表达，具有免疫原性，获得了能够表达HA基因的植物口服疫苗候选植株．     

H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达

 根据已知H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计、合成克隆引物.自灭活的云南地方H5N1亚型病毒阳性临床组织样品中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(Pyobest^TMDNA Polymerase)扩增HA基因,采用Invitrogen定向表达系统(Champion^TMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组HA,分子质量约78ku.采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组HA的免疫反应性,结果表明重组HA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性.     

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及原核表达

克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NSl基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础.     

禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达

目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶基因（neuramidinase,NA）序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA（49～1 587 bp）、pMET A/NA（121～1 200 bp）,电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。     

禽流感病毒H5HA基因在马铃薯中的表达

将编码禽流感病毒H5N1亚型HA基因(H5HA)的cDNA片段与CaMV35S启动子融合,通过农杆菌介导法转化马铃薯.分别用PCR,RT-PCR和Western斑点杂交方法对重组H5HA基因在马铃薯植株中的表达情况进行分析.实验结果表明,获得的12株转基因植株中,11株为阳性.Western斑点杂交检测表明H5HA重组蛋白已在马铃薯体内表达.这一结果将为利用马铃薯作为生物反应器生产禽流感口服疫苗提供理论依据.     

A型流感病毒H5N1

1.何谓禽流感? 禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类感染综合症,主要感染家禽,也可感染人。根据病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(MS)抗原性的不同,将流感病毒分成A、8、C三个型。A型流感病毒除感染禽类之外,还可感染猪、马和人类;B型和C     

H5N1亚型禽流感的研究

对发生在通辽地区的一起鸡的传染病进行了病原及其型的鉴定、流行病学调查、临床病理学研究，同时采取了综合性防制措施，结果为：该起鸡病为A型禽流感(Avian Influenza AI)H5N1亚型、为高致死性(HPAI)、极具传染性．临床病理学表现为急性热性出血性败血症、急性坏死性胰腺炎、非化脓性脑炎、卡他性上呼吸道炎、卡他性间质性肺炎及多个器官变质性坏死性炎．由于及时采取了隔离封锁，扑杀、消毒、无害化处理，疫情跟踪监测和免疫接种等有效的综合性防制措施，而使该传染病就地扑灭，疫情未造成扩散蔓延．     

H5N1的结构与致病机制

以禽流感病毒H5N1的两种基质蛋白HA、NA的结构为基础,分析了H5N1的基因结构,探索其毒力基础和致病的分子机制.     

H5N1亚型禽流感的诊断及临床病理学研究

对一起鸡传染病进行了病原鉴定并对其自然死亡的46例蛋鸡进行了临床病理学研究，结果表明，本起鸡病为A型禽流感，H5N1亚型，属高致死性(HPAI)；急性热性出血性败血症；急性坏死性胰腺炎；非化脓性脑炎；卡他性上呼吸道炎；卡他性、间质性肺炎。     

科学家修改H5N1病毒帮助疫苗研究

科学家修改了H5N1病毒的一个蛋白,从而使其用于发现哪些突变可能让这种病毒进行人际传播,并创造出能用来制作预先防范性疫苗的毒株。H5N1病毒引发了禽流感,它也能偶然传给人类。目前还没有报道H5N1禽流感病毒在人际间传播的病例。科学家相信,如果这种病毒要在人际传播,它表面的一种名为血凝素的刺状蛋白必须发生变异。血凝素蛋白的一个称之为受体结合区(RBD)的部分与宿主细胞的特定部分结合在一起之后,这种病毒才能再进入宿主细胞。科学家让H5N1禽流感病毒受体结合区发生特定变化,然后测试结构发生变化的受体结合区识别禽类和人体细胞…     

注射H5N1亚型禽流感抗体鸡的血清抗体水平消长规律监测

为了解H5N1亚型禽流感纯化抗体(IgG)在鸡体内消长规律,用血凝抑制试验检测了不同注射时间分离的血清样品。结果表明IgG接种后第1至5天,血清抗体滴度恒定在24~26,第8天为23~24,第10天以后几乎检测不到抗体。上述数据表明注射滴度为29的抗体液1mL可有效保护肉鸡免受禽流感病毒的感染,有效期为8天。     

禽流感病毒HSNl血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达毒

目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒HSNI血凝素基因(hemaggludnin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA) 序列,为制备抗体和基因T程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5NI全长HA、NA基因并测序的基础 上。将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A／HA(49一l 587 bp)、pMET A／NA (121—1 200 bp),电转化真核酵母菌pMADl6,甲醇诱导表达,利用Ni“亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用 Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS—PAGE显示蛋白表 达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95％以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原 性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5NI HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的 开发等进一步的研究提供了依据。     

马铃薯遗传转化系统的优化及禽流感病毒(H5N1)基因的导入

通过对以马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｕｓｍ Ｌ．）块茎为受体的农杆力菌转化系统进行优化,筛选出使三个品种（鲁引１号、克新３号、优金）的受体均可得高频分化的培养基：ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋３。０ｍｇ／Ｌ ＺＴ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＧＡ。对几种农杆菌转化条件的比较研究发现,菌体用Ｍｓ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＧＡ流体重悬并稀释４倍屿受体于２８℃,１００ｒ／ｍｉｎ振荡侵染２０～３     

禽流感病毒H5N1亚型RNA聚合酶蛋白表达纯化及晶体生长

通过使用原核表达载体大量表达H5N1病毒RNA聚合酶亚基PA-C257,PB1_N25,再经过GST亲和层析和Sephadex G-200层析柱纯化,获得了高纯度的蛋白复合体.采用悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体,在1～1.5mol/L乙酸钠和pH7.9条件下获得了理想的晶体,为解析禽流感病毒RNA聚合酶三维结构并进一步认识其生物功能奠定了基础.     

禽流感病毒H_5N_1动物致病模型的研究

1997年5月香港暴发H5N1高致病性禽流感,并首次出现高致病性禽流感感染人类并造成死亡,其中18人感染6人死亡。2003年2月底荷兰发生H7N7禽流感,感染人达80名,感染者出现结膜炎等症状,并有1例死亡。2003年12月10日韩国暴发了H5N1高致病性禽流感。随后在2003年12月至2004年2月期间,日本、印尼、老挝、巴基斯坦、