花椰菜(Brassica oleracea var.botrytis)黑腐病抗性基因同源序列分离及克隆的研究

通过从NBS保守序列设计简并引物PCR的方法，以花椰菜（Brassica oleracea var．botrytis）抗、感黑腐病的近等基因系为材料，分离得到NBS-LRR型抗性基因同源序列，并获得1个克隆，命名为RGA330—7．Southern杂交表明，该片段在近等基因系中存在明显的多态性，且该片段在抗黑腐病基因位点至少存在3个以上类似RGA330—7的同源拷贝．序列分析结果认为该克隆与NBS—LRR型抗性基因的部分CDSs有很高的同源性，说明该片段属于NBS—LRR型．系统进化分析该序列与甘蓝型油菜的2个抗病同源序列归为一类，很可能这3个不同来源的抗性基因同源序列同属于一种抗性基因家族．因此推测该序列与花椰菜抗黑腐病基因紧密相关，为进一步克隆花椰菜抗黑腐病基因提供了可靠的候选基因，对分子标记辅助抗性育种具有重要意义。     

花椰菜（Brassica oleracea vat．botrytis）抗黑腐病差异表达cDNA片段的克隆及功能的初步研究

采用花椰菜抗黑腐病近等基因系C731（感病系）和C712（抗病系）作为材料,利用cDNA—AFLP技术,研究了花椰菜黑腐病抗性在黑腐病菌侵染和非侵染条件下基因表达的情况．获得了两个阳性克隆M2和M6．Northern杂交和点杂交进一步证明M2是组成型表达的cDNA片段,只是在病菌侵染与非侵染条件下表达丰度不同．而M6是差异表达的cDNA片段．Southern杂交表明M6 cDNA片段在花椰菜基因组中是单拷贝序列．随后的序列分析发现M6cDNA片段与拟南芥1号染色体的BACF19P19中66665～66813bp有84％同源性,该片段编码拟南芥的2A6蛋白的部分序列．推测的氨基酸序列与拟南芥的2A6蛋白部分序列有91％同源性．用H2O2作为外源分子胁迫处理的初步功能分析发现：M6cDNA片段受H2O2诱导,在诱导早期16～24h高度表达,其在叶片中的积累呈逐渐上升趋势．根据序列分析和初步的功能分析的结果推测：M6cDNA片段可能就是编码花椰菜中类2A6蛋白的部分基因片段．是参与花椰菜抗病反应信号途径的相关调控基因片段．     

花椰菜(Brassica oleracea var.botrytis)抗黑腐病差异表达cDNA片段的克隆及功能的初步研究

采用花椰菜抗黑腐病近等基因系C731(感病系)和C712(抗病系)作为材料,利用cDNA-AFLP技术,研究了花椰菜黑腐病抗性在黑腐病菌侵染和非侵染条件下基因表达的情况.获得了两个阳性克隆M2和M6.Nprthern杂交和点杂交进一步证明M2是组成型表达的cDNA片段,只是在病菌侵染与非侵染条件下表达丰度不同.而M6是差异表达的cDNA片段.Southern杂交表明M6 cDNA片段在花椰菜基因组中是单拷贝序列.随后的序列分析发现M6 cDNA片段与拟南芥1号染色体的BAC F19P19中66 665～66 813 bp有84%同源性,该片段编码拟南芥的2A6蛋白的部分序列.推测的氨基酸序列与拟南芥的2A6蛋白部分序列有91%同源性.用H2O2作为外源分子胁迫处理的初步功能分析发现:M6 cDNA片段受H2O2诱导,在诱导早期16～24 h高度表达,其在叶片中的积累呈逐渐上升趋势.根据序列分析和初步的功能分析的结果推测:M6 cDNA片段可能就是编码花椰菜中类2A6蛋白的部分基因片段.是参与花椰菜抗病反应信号途径的相关调控基因片段.     

与花椰菜(Brassica oleracea ssp.botrytis)抗黑腐病基因连锁的RAPD标记

利用 RAPD技术 ,在花椰菜 ( Brassica oleracea ssp.botrytis)抗感黑腐病的近等位基因系之间进行 1 0碱基随机引物的筛选 .34 5条 RAPD引物扩增的产物表明 ,有 7条引物在近等基因系中呈多态性 .进一步的重复实验表明 ,只有引物 OP2 2 4能够产生稳定的多态性 .为了确定扩增产物 OP2 2 4/1 6 0 0与抗黑腐病基因的连锁程度 ,利用 F2分离群体进行检测 ,结果表明 :花椰菜种质 C71 2抗黑腐病生理种 BJ的抗性由一对显性基因控制 .RAPD标记OP2 2 4/1 6 0 0与抗病基因连锁 ,其遗传距离为 ( 4 .5± 1 .37) c M     

对白粉病敏感、抗性栽培小麦及杂交后代的蛋白质组分析

感病小麦京411、抗病小麦Brock及杂交后代近等基因系感染白粉菌后,发现京411感病,Brock和近等基因系抗病,因此白粉病抗性呈显性．对上述3种小麦的叶片进行蛋白质组分析,在感小麦的京411中有一个8kD／pI 5．3的特异蛋白,该蛋白在抗病品种Brock和杂交后代近等基因系中不存在,后者的蛋白质谱型与Brock相同．上述结果表明,幼苗抗白粉病特性的遗传与蛋白质谱型的遗传相类似,此结果也许可以为生产上筛选抗白粉病小麦品种提供生化依据．     

果腹果蝇黑条体性状不稳定的遗传分析

将黑腹果蝇黑条体品系和黑条体新组合品系与遗传学实验常用的几个果蝇品系杂交，发现黑条体性状在Ｆ１和Ｆ２很不稳定，黑条件性状不稳定，可以与黑条体基因自发转座以及转座基因与多基因有关。     

溴氰菊酯胁迫下小菜蛾差异表达基因的筛选与分析

通过双向cDNA RDA,即分别以敏感品系为检测子(tester)、抗溴氰菊酯品系为驱赶子(driver)和以抗溴氰菊酯品系为检测子(tester)、敏感品系为驱赶子(driver)筛选2种品系中的差异表达基因,初步分析小菜蛾敏感品系和抗性品系之间的遗传差异.经过3轮消减杂交后,将所得的差异片段克隆于PMD 18-T载体,氨苄筛选阳性克隆,经菌落PCR鉴定后送样测序.得到2条序列与GenBank数据库中的部分已知序列有一定同源性,其中1条序列与编码S3a蛋白基因有较高的同源性.     

一个家蚕基因组MAR的克隆及其初步分析

家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）基因组大片段ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ完全酶解后,克隆到质粒ｐＵＣ１８中而构建成一个家蚕基因组文库．通过与家蚕细胞核基质的体外结合,从该文库中筛选到一个包含ＭＡＲ的克隆ｐＣ１１ｅ,其中外源插入片段Ｃ１１ｅ长约２．３ｋｂ．Ｃ１１ｅ的限制性酶谱分析及其酶切片段的体外结合实验表明,ＭＡＲ位于Ｃ１１ｅ上的ＳｐｈＩ和ＨｉｎｃⅡ位点之间,长１．０ｋｂ．由于这是家蚕中发现的第一个ＭＡＲ,因此我们称之为ＢｍＭＡＲ１．进一步借助ＤＮａｓｅＩ敏感性分析和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ,对ＢｍＭＡＲ１在家蚕细胞内与核基质结合的情况以及它与人β干扰素（ｈｕＩＦＮ－β）基因５′上游ＭＡＲ之间的同源性进行了研究．     

应用Digoxigenin标记的cDNA探针检测香蕉束顶病毒

用非放射性的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ，标记克隆的ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂｃＤＮＡ，制备成探针．通过核酸斑点杂交对粗提取的ＢＢＴＶ，ＢＢＴＶ－ＤＮＡ，感染ＢＢＴＶ的香蕉植物的拟茎，球茎处的组织，新生叶片以及成熟后的叶片进行了检测．结果表明：ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１ｃＤＮＡ探针特异性强，不与ＣＭＶ—ＲＮＡ、无毒香蕉组培苗提取的核酸发生杂交反应；仅与粗提ＢＢＴＶ、ＢＢＴＶ－ＤＮＡ、ＢＢＴＶ侵染的香蕉组织的核酸提取物发生杂交反应．此探针灵敏度高，可检出含有ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂ的质粒ＤＮＡ的最小量为１０ｐｇ；测定感病香蕉植株的拟茎汁液的最高稀释度可达１∶１２８，相当于０．４ｍｇ病蕉组织中的病毒含量．测定同一病株不同部位的结果表明，ＢＢＴＶ在植物体内的分布不均匀，拟茎处组织中病毒含量最高，球茎处的组织以及新生叶片中的病毒含量次之，成熟后的叶片中的病毒含量最低     

苯丙氨酸解氨酶,多酚氧化酶与甜瓜抗枯萎病的关系

哈密瓜枯萎病性不同的品系受枯萎病菌侵染后，苯丙氨酸解氨酶，多酚氧化酶与甜瓜品系的抗病性存在一定的相关性。接种后，ＰＡＬ和ＰＰＯＤ活性高不论抗感病品系均在接种后第３天出现，抗病品系的ＰＡＬ活性高于感病的品系，ＰＰＯＤ活性也高于感病的品系，并且抗病品系酶活性下降速度较感病品系慢     

Comparison of the genomes of two Xanthomonas pathogens with differing host specificities

The genus Xanthomonas is a diverse and economically important group of bacterial phytopathogens, belonging to the gamma-subdivision of the Proteobacteria. Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) causes citrus canker, which affects most commercial citrus cultivars, resulting in significant losses worldwide. Symptoms include canker lesions, leading to abscission of fruit and leaves and general tree decline. Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) causes black rot, which affects crucifers such as Brassica and Arabidopsis. Symptoms include marginal leaf chlorosis and darkening of vascular tissue, accompanied by extensive wilting and necrosis. Xanthomonas campestris pv. campestris is grown commercially to produce the exopolysaccharide xanthan gum, which is used as a viscosifying and stabilizing agent in many industries. Here we report and compare the complete genome sequences of Xac and Xcc. Their distinct disease phenotypes and host ranges belie a high degree of similarity at the genomic level. More than 80% of genes are shared, and gene order is conserved along most of their respective chromosomes. We identified several groups of strain-specific genes, and on the basis of these groups we propose mechanisms that may explain the differing host specificities and pathogenic processes.     

Mutant acetolactate synthase （ALS） gene as a selectable marker for Agrobacterium-mediated transformation of soybean

Soybean is one of the crops most difficult to be manipulated in vitro. Although several soybean marker genes, all the selectable markers used were from bacteria origin. To find suitable selectable marker gene from plant origin for soybean transformation, a mutant acetolactate synthase （ALS） gene from Arabidopsis thaliana was tested for Agrobacterium-mediated soybean embryo axis transformation with the herbicide Arsenal as the selective agent. Transgenic soybean plants were obtained after the herbicide se- lection and the To transgenic lines showed resistance to the herbicide at a concentration of 100 g/ha. ALS enzyme assay of To transgenic line also showed higher activity compared to the wild type control plant. PCR analysis of the T1 transgenic lines confirmed the integration and segregation of the transgene. Taken together, our results showed that the mutant ALS gene is a suitable selectable marker for soybean transformation.     

大白菜软腐病发生原因及其防治方法

大白菜软腐病是大白菜细菌性病害中最严重的一种,作者简要介绍了我国大白菜软腐病的病原菌、病害特征以及对病害的防治方法。利用现代基因技术手段人为的操纵细菌群体感应系统,将会成为提高植物抗病性的新方法、新途径。     

白菜型油菜核育性相关基因片段的克隆与序列分析

通过ＲＡＰＤ标记,所获得的与育性基因紧密连锁的基因片段进行克隆与序列分析,结果表明,该育性基因片段为与油菜小孢子发育早期ＢＰ４调控基因５８％同源,并含有一ＭＡＰＤＳ盒高度同源的保邓列。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明该基因为单拷贝基因。     

野油菜黄单胞菌NK－01生物合成黄原胶的分子遗传学分析

本文采用甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变野油菜黄单胞菌ＮＫ－０１得到多糖合成缺陷的不产粘突变株。经ＳａｌＩ部分酶切得到ＮＫ－０１染色体ＤＮＡ片段，将其连接到广泛寄主载体ｐＲＫ２９３上，在Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１中建立完整的ＮＫ－０１基因文库。在协助质粒ｐＲＫ２０１３存在下，不产多糖突变株分别与含基因文库的Ｅ．ｃｏｌｉ菌落群进行三亲接合转移，筛选具有卡那霉素抗性的产粘接合后体。对接合后体进行重组质粒的酶切分析表明，所克隆的ＤＮＡ具有片段重叠。上述重组质粒对另外９株不产多糖突变株互补检测及遗传学分析表明，１３．４ｋｂ的ＤＮＡ片段含有合成黄原胶所必需的基因。     

野油菜黄单胞菌8004胞外酶及多糖合成正负调控基因在X.c.NK01菌中功能初探

利用野油菜黄单胞菌（Xanthomonascompestris）8004正、负调控胞外酶及多糖合成的基因片断分别经三亲本接合方法导入黄单胞菌NK01抗性突变株中，测定接合于四种胞外酶活力和多糖合成能力，确定该正、负调控基因对NK01的作用．结果表明，负调控基因作用明显，使NK01胞外多糖及胞外酶产量显著降低，正调控基因未见明显的胞外酶及多糖合成的增强作用．本文并对正、负调控基因的作用方式作了初步探讨．     

甜菜抗根腐病基因ISSR分子标记的初步研究

以感病×抗病的甜菜种间杂交组合KWS9419×ZD204的F1代17个单株及ZD自交一代16个单株为试材,采用BSA法和ISSR技术,通过对155个随机引物的筛选,获得了一个与甜菜抗根腐病基因连锁的ISSR标记OPP0760,可以用作抗根腐病基因的分子辅助选择的依据。     

不结球白菜种质创新及资源信息管理研究进展

对不结球白菜(Brassica campestris ssp. chinensis Makino)抗性育种、细胞质雄性不育、基因克隆和转基因育种、遗传图谱和DNA分子标记辅助育种,以及种质资源信息管理进行了综述,以期为不结球白菜种质创新和管理提供参考和建议.     

油菜花粉成分及其营养生理效应

本文报导油菜花粉主要成分的检测结果,表明花粉中富集着人体所需的多种营养物质,是一种珍贵的天然保健食品.我们对幼儿和运动员进行了口服花粉的营养生理效应实验,结果表明能提高人体血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度,以及降低血浆总胆固醇含量的作用.