体外传代培养对RPE细胞免疫活性的影响

目的 研究体外传代培养对人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium,HRPE)细胞免疫活性的影响.方法 采用流式细胞术检测原代及传代HRPE细胞(第1、2、3、4、5、6代)表面HLA-ABC、HLA-DR和ICAM-1表达的变化.结果 HRPE细胞基础性表达HLA-ABC,低表达HLA-DR和ICAM-1;体外传代培养时HRPE细胞HLA-ABC表达下调,表达量与传代代数呈负相关(阳性细胞率r=-0.924,P＜0.001;平均荧光强度r=-0.820,P＜0.001);体外传代培养时HRPE细胞ICAM-1表达上调,表达量与传代代数呈正相关(阳性细胞率r=0.914,P＜0.001;平均荧光强度r=0.828,P＜0.001).结论 HRPE细胞移植排斥反应主要是慢性排斥反应;应用体外传代培养HRPE细胞移植时可降低急性排斥反应的发生率,但增高慢性排斥反应的发生率.     

苯并(a)芘对体外培养人淋巴细胞免疫活性和HSP70的影响

不同浓度苯并(a)芘[B(a)P](0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 μmol/L)处理体外培养的人淋巴细胞系721.221,研究B(a)P对体外培养的人淋巴细胞免疫活性和热休克蛋白70的影响.染毒16 h,分别应用MTT比色法、Elisa法和Western blot法研究B(a)P对体外培养的淋巴细胞细胞活力、细胞因子IFN-α、interleukin-1α和interleukin-6分泌和热休克蛋白70表达情况的影响.与对照组比较,0.125～1.000μmol/L低剂量B(a)P染毒组促进细胞的生长(P＜0.05),1.000 μmol/L B(a)P染毒组细胞的增殖活性达到峰值,与溶剂对照组相比,增加了55％.2.000～ 16.000 μmol/L B(a)P染毒细胞,16 h后对细胞活力存在显著抑制作用(P＜0.05).IFN-α随着B(a)P染毒浓度的升高,IFN α分泌呈先上升后下降的趋势,1 μmol/L B(a)P染毒组分泌达到峰值,随后降低.IL-1α和IL-6分泌随着染毒浓度的增加而降低,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05),呈现剂量-效应关系.HSP70随着染毒浓度的增加,呈现先增加后降低的趋势.本研究证实B(a)P对721.221细胞活力、免疫活性和应急因子的影响存在显著的剂量依赖性,为今后评估人群接触B(a)P对免疫系统和自身应急系统的毒性提供实验依据.     

CTGF反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞转分化的影响

目的:研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)合成CTGF与а-SMA表达的影响。方法:测算CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染率;应用CTGF反义寡核苷酸直接转染第三代HLECs进行细胞生长曲线的测定;采用RT-PCR检测细胞CTGF和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA水平。结果:直接导入法反义寡核苷酸进入较慢,但导入72h后未出现细胞毒性。CTGF反义寡核苷酸直接导入HLECs培养细胞72h后可见对细胞增殖的抑制作用。直接导入法处理48h后,TGF-β1能显著增加CTGF以及α-SMA mRNA的表达,但却可被CTGF反义寡核苷酸所抑制。而错义寡核苷酸却没有这种作用。结论:CTGF反义寡核苷酸直接转染HLECs能抑制TGF-β1诱导的CTGF与α-SMA表达上调,提示CTGF反义寡核苷酸可能为防治后发性白内障提供新途径。     

润肺口服液对慢性支气管炎大鼠支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8表达影响的研究

目的 研究中药复方润肺口服液对慢性支气管炎(Chronic bronchitis,CB)支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8表达的影响,探讨其治疗CB的疗效机制.方法 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、慢性支气管炎组及慢性支气管炎 润肺口服液治疗组,每组8只.大鼠慢性支气管炎模型通过熏香烟加气管内注入低剂量脂多糖制成,利用免疫组织化学观察各组大鼠支气管TNF-a,ICAM-1蛋白及IL-8的表达情况.结果 熏香烟加气管内低剂量脂多糖注射可复制出较理想的慢性支气管炎模型,假手术组支气管上皮内可见TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8弱阳性表达;慢性支气管炎组支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8在支气管上皮细胞、支气管周围的淋巴滤泡炎性细胞和肺泡间质细胞中可见强阳性表达;半定量图像分析显示,慢性支气管炎组TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8的表达明显强于假手术组(P＜0.05),慢性支气管炎加润肺口服液治疗组的表达则明显弱于支气管炎组(P＜0.05).结论 润肺口服液通过下调支气管上皮细胞中TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8的表达,从而减轻气道炎症反应是其治疗慢性支气管炎的部分机制.     

HDAC1、8在肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转化中的表达及意义

目的:观察TGF-β1作用下,肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN在EMT过程中HDAC1、8的表达情况及TSA对TGF-β1诱导细胞EMT的影响。方法:将TGF-β1加入到体外培养的细胞中,于不同时间收取细胞,采用WB及Real-time RT-PCR检测HDAC1、8及E-cad、α-SMA的表达情况。然后将TGF-β1加入经过TSA预处理的细胞中,于不同时间收取细胞,重新检测上述基因。结果:加入TGF-β1后,E-cad蛋白表达下调;α-SMA蛋白表达上调;HDAC1蛋白表达上调;HDAC8蛋白表达下调。E-cad mRNA表达下调;α-SMA及HDAC8的mRNA均于12 h表达上调,6 h、24 h表达下调;HDAC1 mRNA表达于6 h下调,24 h上调。加入TSA后,E-cad蛋白表达上调;α-SMA、HDAC1及HDAC8蛋白的表达均下调。E-cad mRNA表达上调;α-SMA mRNA表达于6 h、12 h上调,24 h下调;HDAC1 mRNA表达下调;HDAC8 mRNA表达上调。结论:TGF-β1体外诱导的RLE-6TN细胞EMT,可以通过应用TSA抑制其获得α-SMA表型、失去E-cad表型,从而部分逆转TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮EMT。     

体外培养人涎腺多形性腺瘤细胞及表面标记物的初步研究

体外培养15例人涎腺多形性腺瘤原发肿瘤组织,探讨体外培养的细胞与原发肿瘤组织的表面标志物表达情况。运用免疫组化法检测CK5/6、CK7、CK8/18、CK14、CK20,vimentin及肌上皮表面标记物α-SMA、calponin及p63在细胞和肿瘤组织中的表达。结果发现体外培养的多形性腺瘤细胞呈多样形,可同时表达角蛋白、肌上皮表面标记物及波形蛋白,与原发肿瘤表达基本一致。提示体外培养的多形性腺瘤细胞可能大部分来源于肌上皮细胞及导管上皮细胞等,这为研究涎腺多形性腺瘤肿瘤生物学多样性提供了实验依据。     

亚硝酸盐对人肝癌SMMC-7721细胞HIF-1α表达的影响

为了探讨肿瘤细胞有氧糖酵解的原因,以人肝癌SMMC-7721细胞为对象,体外研究了亚硝酸钠对细胞HIF-1α表达的影响.结果表明:人肝癌SMMC-7721细胞体外培养条件下,加用一定剂量的亚硝酸钠可以促进细胞增殖和HIF-1α表达,超过一定剂量反而抑制细胞增殖和HIF-1α表达;当用亚硝酸钠和NO特异性清除剂c-PTIO一起作用细胞时,细胞增殖效应和HIF-1α表达总体有所下降,但细胞增殖和HIF-1α表达的低剂量促进高剂量抑制现象依然存在.结果提示,亚硝酸根离子和NO共同阻滞细胞线粒体呼吸链,导致细胞耗氧量下降,HIF-1α降解减少,使细胞有氧糖酵解加强,促进细胞增殖.     

人视网膜色素上皮细胞生长特性及可见光对其影响

 研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞的生长特性及可见光对其影响.用倒置相差显微镜和透射电镜观察人视网膜色素上皮(hRPE)细胞形态和超微结构,用计数法和噻唑蓝(MTT)法绘制生长曲线.从光照时间、光照时有无血清、光照后是否换液、光照后培养时间这4方面考查可见光对hRPE细胞的损伤情况.实验结果表明,体外培养的hRPE细胞为多角形,有极性,细胞器正常,生长旺盛.(8423±359)lx的可见光光照2h就能对hRPE细胞造成显著损伤.光照时间为5h,光照时培养液中含10%胎牛血清,光照后不换培养液,光照后培养时间为24h,此条件下hRPE损伤率为58%.体外培养的hRPE细胞具有正常的形态结构和生长规律.可见光可对hRPE细胞造成损伤,并且损伤程度有时间积累效应.因此,在日常生活中应尽可能避免阳光直射,减少光照时间,以降低视网膜光损伤发生率,保护眼睛.     

慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.     

MSCs联合EPCs体外构建组织工程化血管的实验研究

目的为了探讨间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)联合内皮前体细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)在体外构建组织工程化血管的可行性以及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的作用。方法首先分离、培养、扩增小鼠骨髓来源的MSCs和EPCs。剪裁、消毒、胶原包埋聚羟基乙酸(Polyglycolic acido,PGA)支架材料。按EPCs组、MSCs组、EPCs联合MSCs组、EPCs联合MSCs加b FGF培养组将各组细胞分别接种到处理过的PGA支架上制成细胞、PGA复合物,将以上制成的复合物在体外培养1周时分别用HE染色及倒置显微镜观察细胞与PGA的相容性,培养8周时做HE及免疫组织化学染色检测CD34、α-SMA蛋白水平,并对免疫组织化学染色评分后分析细胞、PGA复合物培养情况及各组之间的差异。结果 1周时,大量细胞贴附在PGA支架纤维上,细胞与PGA相容性良好;8周时各分组免疫组织化学α-SMA染色均为阴性;联合组免疫组织化学CD34染色阳性,并评分明显高于EPCs组和MSCs组,且差异有统计学意义(P0.05);EPCs组染色评分明显高于MSCs组,且差异有统计学意义(P0.05);b FGF组与联合组之间染色评分无明显差异(P0.05)。结论 MSCs联合EPCs可在体外构建组织工程化血管,两种细胞联合应用明显优于单种细胞应用,单独的b FGF应用没有明显的促进作用。     

钩藤中钩藤碱对肿瘤坏死因子-α诱导人星型胶质细胞炎症模型作用机制研究

目的研究钩藤中钩藤碱对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导人星型胶质细胞(Human Astrocytes,HA)的炎症模型的作用机制.方法:体外培养HA,用TNF-α诱导HA造模,将细胞分为正常组、模型组、钩藤碱组、依达拉奉组.采用噻唑蓝(MTT)法检测钩藤碱对HA增殖能力的影响,用逆转录PCR法(RT-PCR)检测一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)mRNA、白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)mRNA、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA的表达,用分光光度法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-mTOR,mTOR,p-Stat3和Stat3的蛋白表达.结果与正常组比较,32ng·mL-1的TNF-α对星形胶质细胞有明显抑制作用(P0.001);400μmol·L~(-1)的钩藤碱对星形胶质细胞活力有明显抑制作用(P0.001).与模型组相比,200μmol·L~(-1)的钩藤碱对模型细胞有明显的增殖作用(P0.01);钩藤碱组和依达拉奉组NOS mRNA,NO和SOD都显著上升(P0.001),IL-23mRNA,IL-6mRNA和MDA都显著下降(P0.001);钩藤碱组p-mTOR/mTOR和p-Stat3/Stat3都显著下降(P0.01).结论钩藤有效成分钩藤碱具有抑制TNF-α诱导HA炎症的损伤作用,可能是通过下调mTOR/STAT3信号通路增加氧化相关因子NOS,NO,SOD的表达,减少氧化相关因子MDA以及炎症相关因子IL-23和IL-6的表达.     

HIF-1α对宫颈癌细胞迁移能力的影响

将表达野生型HIF-1α(fl HIF-1α)和抑制性HIF-1α(dn HIF-1α)的重组质粒pcDNA3.1-fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染入SiHa细胞中表达,采用免疫细胞化学法和Western blot检测重组质粒转染SiHa细胞后其HIF-1α与CXCR4表达水平的变化;划痕试验测定细胞迁移情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果重组质粒pcDNA3.1fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染SiHa细胞后,pcDNA3.1-fl HIF-1α转染组(fl组)HIF-1α蛋白表达水平与其他三组比显著增高,差异具有统计学意义(P＜0.05),而pcDNA3.1dn HIF-1α转染组(dn组)与pcDNA3.1组和未转染组相比无统计学差异(P＞0.05).但fl组和dn组其CXCR4蛋白水平的表达与pcDNA3.1组和未转染组相比均有较明显的差异(P＜0.05).fl组迁移能力略高于对照组(P＞0.05),dn组迁移能力明显低于对照组(P＜0.05).HIF-1α能提高CXCR4蛋白的表达,从而加快SiHa细胞的迁移;而dn HIF-1α的作用正好相反.     

大鼠卵泡膜中肌成纤维细胞的形成及意义

目的:探讨肌成纤维细胞在卵泡膜中的形成及意义。方法:分别取动情期和非动情期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测肌成纤维细胞的特征性标记(α-SMA)和波形蛋白(vim entin)分别在这两组中各级卵泡卵泡膜细胞上的表达情况,并进行图像分析。结果:1.α-SMA和vim entin表达于卵巢的各级卵泡的卵泡膜细胞(窦前卵泡、小窦状卵泡、大窦状卵泡),在动情期组,两者在大窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,数量也最多,组内各级卵泡间它们表达的比较均有显著性差异(P<0.05),并且α-SMA和vim entin表达强度均与卵泡直径大小成正相关性(r分别为0.631和0.536);在非动情期组,α-SMA表达在小窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,大窦状卵泡最弱,各级卵泡间α-SMA表达比较差异有显著性(P<0.05),除了窦前卵泡和小窦状卵泡vim entin表达比较差异无显著性(P>0.05)外,vim entin在其他卵泡间的表达比较差异也有显著性(P<0.05),但是α-SMA和vim entin的表达强度与卵泡直径大小无明显相关性(r分别为-0.087和0.224);α-SMA和vim entin的表达在上述两组各类型卵泡间比较也均有显著性差异(P<0.05)。结论:肌成纤维细胞存在于卵泡膜中,并可能在排卵过程中起重要作用。     

清热利湿与益气古典方剂逆转二甲基亚硝胺大鼠肝硬化的细胞生物学基础研究

探讨了清热利湿的茵陈蒿汤与益气的黄芪汤逆转二甲基亚硝胺(di methylnitrosamine,DMN)大鼠肝硬化的细胞生物学基础.采用0.5%DMN生理盐水溶液4周12次腹腔注射法制备大鼠肝硬化模型,造模成型后终止DMN刺激,分组予以不同功效方剂经口给药2周,获取样本作相关指标的检测.TUNEL染色原位检测肝细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫组织化学及Western blot方法分别检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、肝细胞生长因子α(he-patic growth factor-α,HGF-α)、CD68及基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2,9(MMP-2、MMP-9)的活性.与正常大鼠比较,模型大鼠肝细胞凋亡指数、CD68及α-SMA表达均显著增加,而HGF-α与MMP-13表达显著减少(P<0.01或<0.05);与同期模型对照组大鼠相比,茵陈蒿汤组大鼠肝细胞凋亡指数显著降低,CD68与MMP-13表达显著增加(P<0.01,P<0.05),黄芪汤组无显著变化;茵陈蒿汤组MMP-9活性显著增加(P<0.01)、而黄芪汤组显著降低(P<0.05);茵陈蒿汤组及黄芪汤组大鼠肝组织α-SMA表达均显著降低(P<0.01),而黄芪汤组显著低于茵陈蒿汤组(P<0.05),黄芪汤组大鼠肝组织HGF-α表达显著增加(P<0.05),MMP-2活性显著降低(P<0.05).这表明逆转DMN大鼠肝硬化的有效方剂具有不同的细胞生物学基础:茵陈蒿汤清热利湿的祛邪作用在于减少肝实质细胞的病理性凋亡、调控库普弗细胞功能;黄芪汤益气的扶正功效主要表现为抑制肝星状细胞活化及促进肝窦内皮细胞损伤的修复.     

LAK细胞和HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用

[目的]对LAK细胞和.HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用进行研究分析.[方法]分别将不同比例的LAK细胞和AO细胞混合培养6 h(4:1,20:1,100:1,500:1).采用LDH释放法测定LAK的杀伤活性;HSV1-TKc+及HSV1-TKc-AO细胞按照不同比例培养60 h(15:85,35:65,50:50,75:25,65:35,85:15),后更换15μg/ml GCV培养液,6 d后采用LDH释放法测定其杀伤活性.对两组实验的效靶比与杀伤活性进行相关性检验,比较两组的杀伤活性.[结果]LAK细胞与靶细胞的比值与杀伤活性呈线性相关性(r=0.996,P＜0.01).其杀伤活性随着效靶比的增大而增加;AO/HSVI-TKc+与AO/HSV1-TKc-的细胞比例与HSV-1TKc/GCV的杀伤活性成线性相关(r=0.984,P＜0.01),其杀伤活性随着比例的增大而增加,LAK与HSV1-TKc/GCV两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]LAK细胞与HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外具有一定的杀伤作用,但两者比较差异无统计学意义.     

ATX在LPC诱导胃癌细胞增殖与迁移中的作用

利用免疫组化技术研究ATX在胃癌及正常人胃粘膜组织之间表达的差异,Western Blot法检测ATX表达及ERK磷酸化,MTT法测定细胞增殖,Boyden chamber法测定细胞迁移.结果显示:ATX在正常胃粘膜组织、癌旁组织及胃癌组织均有表达,胃癌细胞BGC-803中有表达;ATX具有溶血磷脂酶D活性,能将LPC水解为LPA,并以LPA受体介导信号通路促进胃癌细胞的增殖和迁移作用.由此得出LPC是通过LPC-Autotaxin-LPA-LPA1/3-Gi-ERK信号通路诱导胃癌细胞增殖与迁移.ATX/LPA通路在胃癌治疗中也是一个潜在的靶位点.     

MBL在绵羊呼吸道上皮细胞抗肺炎支原体感染过程中的机制探讨

为了探究甘露糖结合凝集素(MBL)对绵羊呼吸道黏膜上皮细胞抵御绵羊肺炎支原体(MO)感染的作用,本研究从绵羊血清中提取天然MBL蛋白,将绵羊呼吸道黏膜上皮细胞分4组,分别处理为:接种MO前细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后继续细胞培养;正常培养。采用荧光定量PCR的方法,对各组细胞MBL、C3、ICAM-1、IL-6、SBD-1基因的表达量进行研究。结果显示:与对照组相比,其他组细胞密度均减少,且MBL、C3基因的表达量显著下降(P0.05),同时ICAM-1、IL-6基因的表达量显著升高(P0.05);接种MO前加入MBL的细胞ICAM-1基因的表达量相对其他组显著升高(P0.05),且其SBD-1基因表达量极显著升高(P0.01)。被MO感染的各组细胞均产生免疫应答,在感染前加入MBL组细胞的免疫应答更强烈,该过程或有ICAM-1和SBD-1参与。     

Bcl-2 shRNA诱导成人T淋巴细胞白血病细胞株Molt4凋亡的研究

目的:探讨以Pgenesil-1质粒为载体表达的Bcl-2短发夹样RNA (short hairpin,shRNA)诱导Molt4成人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的作用.方法:采用脂质体介导的转染方法将表达Bcl-2 shRNA的两个RNA干扰质粒(Bcl-2 shRNA1和Bcl-2 shRNA2)、阴性组(针对非目的基因所构建的shRNA表达载体)、空白组及单纯脂质体组分别转染Molt4细胞.采用免疫细胞化学法检测转染48 h后的各组细胞Bcl-2蛋白表达水平;MTT法分别检测24,48,72 h各组细胞的增殖活性;用姬姆萨染色和流式细胞仪观察细胞凋亡情况.结果:转染Molt4细胞48 h后, Bcl-2 shRNA1组和Bcl-2 shRNA2组的细胞Bcl-2 蛋白表达率均明显下降;与阴性对照shRNA组、空白组和单纯脂质体组相比差异有显著性(P＜0.05), Bcl-2 shRNA1组的抑制作用要强于Bcl-2 shRNA2组.MTT测定显示Bcl-2 shRNA1组和Bcl-2 shRNA2组细胞增殖活力均明显下降,分别与空白组和单纯脂质体组进行比较差异有显著性(P＜0.05);阴性对照shRNA组与单纯脂质体组比较则无明显差异(P＞0.05).Bcl-2 shRNA1和Bcl-2 shRNA2作用于Molt4细胞48 h后,姬姆萨染色可见凋亡细胞.流式细胞仪检测示Bcl-2 shRNA1组和Bcl-2 shRNA2组细胞凋亡率随时间逐渐增高,与空白组和单纯脂质体组进行比较差异有显著性(P＜0.05),但Bcl-2 shRNA1组和Bcl-2 shRNA2组二者间无明显差异(P＞0.05).结论:Bcl-2 shRNA表达载体可促进Molt4细胞的凋亡.     

脯氨酸羟化酶抑制剂对缺氧环境下大鼠视网膜神经胶质细胞中脯氨酸羟化酶2表达的影响研究

观察在脯氨酸羟化酶抑制剂(PHI)干预下,脯氨酸羟化酶2(PHD 2)在缺氧环境下大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达变化,探讨其与眼内相关增生因子表达的关系。原代培养大鼠视网膜神经胶质细胞,鉴定后传代培养,并分为3组:正常对照组(control)、缺氧组(hypoxia)、干预组(intervention)。正常对照组不做特殊处理;缺氧组加入200μmol/L缺氧诱导剂氯化钴(CoCl_2);干预组加入500μmol/L的脯氨酸羟化酶抑制剂。免疫荧光化学染色法观察各组PHD 2和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,RT-PCR检测PHD 2、VEGF mRNA水平,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测各组细胞增殖活性,Annexin V-FITC鉴定各组细胞凋亡情况。对照组视网膜神经胶质细胞中PHD 2和VEGF的表达比较弱,呈弱荧光染色;缺氧组视网膜神经胶质细胞中PHD 2及VEGF的表达明显增强,呈强红色荧光及强绿色荧光;干预组PHD 2及VEGF的表达明显低于缺氧组。RT-PCR分析结果表明:对照组视网膜神经胶质细胞中PHD 2和VEGF mRNA都呈弱表达;缺氧组视网膜神经胶质细胞中PHD 2和VEGF mRNA表达量明显增多;干预组中PHD 2、VEGF mRNA表达量较对照组轻度增多,但较缺氧组明显减少。缺氧组视网膜神经胶质细胞的增殖活性明显高于正常对照组(P0.001);干预组视网膜神经胶质细胞的增殖活性高于正常对照组(P=0.001);但是干预组视网膜神经胶质细胞增殖活性明显低于缺氧组(P=0.001)。干预组和对照组视网膜神经胶质细胞的凋亡明显高于缺氧组(P0.001);干预组视网膜神经胶质细胞的凋亡高于正常对照组(P0.001)。缺氧环境可诱导视网膜神经胶质细胞中PHD 2、VEGF mRNA的表达增高,刺激神经胶质细胞的增殖,减缓细胞凋亡;脯氨酸羟化酶抑制剂可有效抑制缺氧环境下PHD 2增高引起的神经胶质细胞的增殖和VEGF mRNA的表达。     

白介素-10对TNF-α介导血管平滑肌细胞增殖的影响

观察重组人白介素 10 (rhIL_10 )对肿瘤坏死因子 (TNF_α)刺激的离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果显示 ,TNF_α对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL_10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响。在TNF_α刺激下 ,低至 10ng mL的rhIL_10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长 (P <0 0 5 )。