犊牛源粪肠球菌分离鉴定及药敏试验

从河北省围场县某养殖场患病死亡的犊牛脏器样品中分离到1株优势菌株,对其进行常规形态学观察、生化鉴定、16S r DNA基因序列测定、动物致病性试验及药敏试验。结果显示,分离菌株的生化鉴定特性与粪肠球菌的生化鉴定特性相符;分离菌株16Sr DNA基因序列与粪肠球菌的同源性为96. 2%;在系统发育进化树上分离菌株与粪肠球菌聚为一簇;分离菌株对小白鼠具有一定的致病性,并将其命名为EFC QHD-1;分离菌株EFC QHD-1对替米考星、复方新诺明、卡那霉素等耐药;对环丙沙星、氟苯尼考、阿莫西林等敏感。     

动物源性肠球菌的研究进展

综述了动物源性肠球菌的生物学特性，致病性，流行病学，实验室诊断和耐药性的研究进展。     

致羔羊脑炎型粪肠球菌的分离及鉴定

北疆地区几个不同羊场的羔羊连续几年发生了以各种神经症状和死亡为主要特征的疾病。对病、死羊进行了病原菌的分离、培养、生化鉴定、血清学鉴定和动物回归实验等,确定其致病菌为粪肠球菌。     

致羔羊脑炎粪肠球菌的分布规律

为了确定致羔羊脑炎粪肠球菌在人工感染小鼠体内的分布规律,本研究采用粪肠球菌人工培养物腹腔注射小鼠,无菌采集死亡或濒临死亡小鼠脏器,利用已建立的PCR技术对人工感染肠球菌小鼠主要脏器进行检测,结果显示在受检的6种组织中,即肝、脾、心、脑、肾均能扩增出与预计大小112bp一致的粪肠球菌的DNA阳性条带。与细菌分离结果一致。     

粪肠球菌xwAP增菌培养基的优化

针对益生菌粪肠球菌的营养需要优化其增菌培养基,获得其高密度培养。采用单因素试验和中心组合设计对粪肠球菌增菌培养基进行优化。单因素试验结果表明最佳碳源、氮源、磷源、铵盐分别为蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、柠檬酸三铵;通过Plackett-Burman试验设计和响应面法对其进行增菌培养基优化,优化培养基配方为:葡萄糖23.5 g/L、蛋白胨18.8 g/L、柠檬酸三铵2.6 g/L、磷酸二氢钾2.5 g/L,硫酸镁0.5 g/L、硫酸锰0.15 g/L、无水乙酸钠5 g/L、吐温-80 1 g/L,调节pH值为6.2,由此培养得到的活菌浓度可达到3.21×109CFU/m L,是MRS的3.89倍。该结果可为菌剂制备及工业化生产提供理论依据。     

粪肠球菌中具有启动功能的DNA片段的捕获及鉴定

PCR扩增来自质粒pUC119的β-内酰胺酶基因(bla)作报告基因,克隆进质粒pNZ8037上的能被Nisin诱导的启动子PnisA下游,构建了粪肠球菌启动功能片段探测载体pNZ-bla.利用该探测载体从粪肠球菌染色体总DNA中克隆到了能在粪肠球菌中表达的一系列具有启动功能的DNA片段,将包含克隆片段的pNZ-P-bla6质粒电击转化粪肠球菌,培养转化子并检测其抗氨苄强度,结果表明其抗氨苄强度大于Nisin诱导的含pNZ-bla质粒的粪肠球菌.表明克隆的功能片段启动能力强于PnisA.在pNZ-P-bla6的启动功能片段下游Sau3AⅠ和EcoRⅠ之间接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建表达绿色荧光蛋白的质粒载体pNZ-P-gfp并导入粪肠球菌中,共聚焦显微镜下可以观察到绿色荧光蛋白的表达.     

中药复方对口腔致病粪肠球菌超微结构的影响

目的:观察黄芩、大黄、五倍子、蛇床子4种药物及其配伍组合的中药复方对口腔致病粪肠球菌超微结构的影响.方法:采用透射电镜进行观察中药处理后的粪肠球菌形态结构的改变.结果:经黄芩处理后的粪肠球菌细胞壁较完整,胞浆轻度变性;大黄组大部分胞壁不完整,破裂呈不连续状态,质壁分离严重,胞浆内可见大量颗粒样黑色沉淀;五倍子组的胞壁无明显变化,胞浆基本完整;蛇床子组胞壁变薄,胞浆变性严重;中药复方组的细胞壁失去原有结构而明显变薄或消失,细胞变形,出现裂解或自溶状态,核浆消失,大量细胞内容物外排.结论:中药复方对口腔致病粪肠球菌抗菌效果良好.     

动物微生态制剂鸡肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

试验菌种由宁夏固原山区完全自然生长的土种健康产蛋母鸡的盲肠和大肠中分离获得,共分离出8株革兰氏染色阳性杆菌株,对其进行茼落形态观察和描述,及革兰氏染色、芽孢染色和生理生化鉴定,确定4株为芽孢杆菌（Bacillus）,其中3株为枯草芽孢杆菌（B、subtilis）,1株为蜡状芽孢杆菌（B．cereus）,各项鉴定结果均符合相对应的芽孢杆菌属和种的菌落形态,及革兰氏染色、芽孢染色特征和生理生化鉴定标准;另4株初步确定为不产芽抱的革兰氏阳性杆菌．     

致羔羊脑炎粪肠球菌人工感染羔羊的试验研究

将从发生羔羊脑炎病例中分离纯化的粪肠球菌经静脉注射接种于健康的2只美利奴羔羊和1只土种羔羊.结果显示,被感染羊均表现出与自然感染绵羊相似的临床症状和病理变化,并从脑、心血、肝等组织中回收到了接种菌,从而证明了该粪肠球菌分离株具有较强的致病性.     

Modulation of virulence within a pathogenicity island in vancomycin-resistant Enterococcus faecalis

Enterococci are members of the healthy human intestinal flora, but are also leading causes of highly antibiotic-resistant, hospital-acquired infection. We examined the genomes of a strain of Enterococcus faecalis that caused an infectious outbreak in a hospital ward in the mid-1980s (ref. 2), and a strain that was identified as the first vancomycin-resistant isolate in the United States, and found that virulence determinants were clustered on a large pathogenicity island, a genetic element previously unknown in this genus. The pathogenicity island, which varies only subtly between strains, is approximately 150 kilobases in size, has a lower G + C content than the rest of the genome, and is flanked by terminal repeats. Here we show that subtle variations within the structure of the pathogenicity island enable strains harbouring the element to modulate virulence, and that these variations occur at high frequency. Moreover, the enterococcal pathogenicity island, in addition to coding for most known auxiliary traits that enhance virulence of the organism, includes a number of additional, previously unstudied genes that are rare in non-infection-derived isolates, identifying a class of new targets associated with disease which are not essential for the commensal behaviour of the organism.     

多种实验动物脑出血模型的制作

脑出血是常见的神经系统疾病,对人们的生命健康构成了极大的威胁.对于脑出血病因、病理及治疗方法等方面的研究已成为现今神经系统疾病的研究热点.制作稳定、与人类脑出血疾病类似且易于应用的动物模型对研究此类疾病有着重要的意义.本文综述了近年来在各类文献中应用过的脑出血模型,供大家参考.     

基于人工智能技术的矿井水害来源识别模型库的建立方法研究

为了建立合理的矿井水害识别模型库,以便提高水害来源识别的准确率,提出了建立水害识别模型库(水的水化学模型)的原则和方法技术。这个原则是各类水害来源模型内部的类内离散度尽可能小,使其具有代表性;各个模型之间的类间离散度尽可能大,以便清楚的区分各个水害来源的总原则。给出了描述这个原则的数学公式以及实现上述原则的方法技术。在山西潞安环保能源开发股份有限公司的多个煤矿进行了生产性验证。生产实践证明提出的原则和方法技术是可行的、识别矿井水的来源(判定水的类型)的准确率可达到95%。     

一种水产弧菌快速药敏检测方法的建立

【目的】实现弧菌药物敏感性的现场快速检测。【方法】以副溶血性弧菌、溶藻弧菌及灿烂弧菌3种弧菌为试验菌株,在Mueller-Hinton(MH)培养基基础上通过添加鱼肉蛋白胨及调节无机盐离子浓度,优选弧菌的增菌液。同时利用阿尔玛蓝作为颜色指示剂,选择11种水产常见药物并设置8个倍比稀释的浓度梯度,结合运用海藻糖作为包被保护剂,制备弧菌快速药敏检测微孔板,板内设有药敏检测区、生长对照区及质控区。【结果】利用药敏微孔板法及传统的试管稀释法分别对副溶血性弧菌、溶藻弧菌及灿烂弧菌进行药敏检测,结果显示微孔板法测定的所有药物对3种弧菌的MIC值与试管稀释法完全吻合。【结论】本研究建立的药敏微孔板法能够实现对3种弧菌药敏特性的快速、简便、准确检测,研究结果将为水产病原微生物的现场快速选药技术提供重要参考。     

不同物种源的150株肠球菌抗生素抗性分析

以来自人、狗、鸡、牛、猪五个物种源共150株肠球菌为试材,采用K-B法进行药敏实验,分析不同物种源粪便中的肠球菌对抗生素耐药情况的差异性。结果显示对红霉素的耐药率鸡源高达80%,而牛源仅为20%、对呋喃妥因的耐药率猪源和狗源分别为62.1%和3.4%、对环丙沙星鸡源耐药率为70%,而狗源并未出现耐药菌株;而对多重耐药分析后人源与狗源主要集中于2耐、3耐和4耐;牛源主要为2耐和4耐;猪源主要为3耐和4耐;鸡源的多重耐药情况复杂。表明不同物种源肠球菌的耐药情况具有差异性,为我国利用抗生素分析法识别粪便污染来源提供理论依据。     

一种快速的重组农杆菌PCR鉴定方法

建立一种快速的重组农杆菌PCR扩增鉴定方法,采用煮沸法处理重组农杆菌,使农杆菌高温裂解,释放质粒DNA,直接进行PCR扩增反应,检测目的基因片段.结果表明,重组质粒PCR扩增效果较好,目标条带较为明显.通过煮沸重组农杆菌,进行PCR扩增反应鉴定质粒DNA,不仅实验操作简单安全,缩短实验时间,并且避免了酚、氯仿试剂在提取质粒DNA过程中的残留对后续分子鉴定质量的影响.     

一种快速分离和鉴别诺氟沙星的物理学方法

根据诺氟沙星在水中不溶下沉、在氯仿中不溶上浮的现象，建立了一种快速分离和鉴别诺氟沙星的物理学方法。方法(1)以水作参比用比重瓶法测定诺氟沙星的密度；(2)取原料药和胶囊剂内容物分别置于刻度试管中，加入氯仿。充分振摇使药粉混悬后静置，观察药粉由动态到静止的时间和上浮与下沉的大体数量。结果(1)诺氟沙星密度D^21为1．4260，RSD为0．1718％；(2)纯诺氟沙星在氯仿中1—2min全部上浮；合格胶囊内容物绝大部分上浮。少量下沉；不合格和掺假的胶囊内容物则相反；上浮粉末的数量均与诺氟沙星的含量呈正相关。结论试验证明：可以利用诺氟沙星与掺假物或辅料的密度之间的差异。与氯仿混合后静置，能分别浮于上层或下沉的物理学现象，创建一种用于分离或鉴别诺氟沙星的快速操作方法。     

基于圆柱绕流的气动声源识别方法

以气流流经固体壁面产生的气动声源为研究对象,以力点源对应的偶极子气动声源声波动方程的声压解为基础,利用流场中声源辐射声压和脉动力、脉动力和压力梯度的关系,建立偶极子气动声源辐射声压与流场压力梯度的关系式;利用两偶极子声源可组成一四极子声源的概念,建立四极子气动声源辐射声压与流场脉动速度的关系式。最后,以圆柱绕流为研究对象,采用上述两关系式并结合数值仿真计算方法,得到圆柱绕流的偶极子和四极子气动声源大小和分布特征。结果表明：偶极子气动声源向远场的声辐射声压由??p?t决定,四极子气动声源向远场的声辐射声压由?2ur2?t2决定。